来宝网 2024/8/16点击171次
UBCH 5c TR-FRET检测试剂盒--检测协议&示例结果
UbcH5c TR-FRET检测试剂盒是一种均匀、灵敏的TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）检测试剂盒，旨在测量UbcH5b（泛素结合酶E2 D3）泛素化活性。该试剂盒使用生物素标记的泛素和铽标记的抗体识别His标记的UbcH5c蛋白，以完成TR-FRET配对。该试剂盒包含足够的纯化的UbcH5 c、纯化的UBE1、生物素泛素、抗His-Tb标记的供体、染料标记的受体和400个反应的测定缓冲液。
货号: BPS-79901
检测试剂盒格式: TR-FRET
物种: 人类
需自备材料:
能够测量时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）的荧光微孔板阅读器
可调节的微量移液管和无菌吸头
轨道摇床
UniProt #UBE1: P22314; UBCH5c: P61077
储存/稳定性: 如果按照指示储存材料，该检测试剂盒从收到之日起最佳性能可维持长达6个月。
应用: 筛选抑制Ubch5c活性的分子，在药物发现高通量筛选（HTS）应用中。
运输温度: -80°C
禁忌: UbcH5c TR-FRET检测试剂盒与高达1%最终DMSO浓度兼容。我们建议在U2检测缓冲液中以不超过10% DMSO溶液准备抑制剂，并每个孔使用2 μl。
避免冻融循环。
检测协议：
所有样品和对照应进行三次重复实验。
检测应包括“空白”、“阳性对照”、“阴性对照”和“试验抑制剂”条件。
我们建议在实验过程中将稀释后的蛋白质保持在冰上。
有关蛋白质处理的详细信息，请参阅蛋白质常见问题解答（bpsbioscience.com）。
我们推荐使用Bay11-7821作为内部对照。如果不对控制抑制剂进行剂量反应曲线测试，我们建议按照下面验证数据中显示的IC50值的0.1倍、1倍和10倍来运行控制抑制剂。
在冰上解冻UBE1、UbcH5c、U2检测缓冲液、生物素-泛素和ATP。短暂离心管以回收全部内容物。
将UBE1用U2检测缓冲液稀释至20 ng/µl（每个孔1.5 µl）。
将UbcH5c用U2检测缓冲液稀释至4 ng/µl（每个孔1.5 µl）。
将生物素-泛素用U2检测缓冲液稀释5倍（每个孔1 µl）。
准备主混合物如下（每个孔5.5 µl）：N个孔 × （稀释后的UBE1 1.5 µl + 稀释后的UbcH5c 1.5 µl + 稀释后的生物素-泛素1 µl + U2检测缓冲液1.5 µl）。
向“阳性对照”、“阴性对照”和“试验抑制剂”孔中各加入5.5 µl主混合物。
向“空白”孔中各加入5.5 µl U2检测缓冲液。
准备试验抑制剂（每个孔2 µl）：对于滴定，准备比期望最终浓度高10倍的连续稀释。反应的最终体积为20 µl。
向每个指定为“试验抑制剂”孔中加入2微升的抑制剂稀释液。
向“阳性对照”、“阴性对照”和“空白”孔中各加入2微升的溶剂溶液。
将抗His标签的供体和染料标记的受体各稀释400倍，使用U2检测缓冲液（每孔10微升）。这将制成供体/受体混合液。
向每个孔中加入10微升的供体/受体混合液。 注意：在添加底物（ATP）之前，考虑在室温（RT）下进行30分钟的预孵育步骤。
通过向“空白”、“试验抑制剂”和“阳性对照”孔中各加入2.5微升4毫米ATP来启动反应。
向“阴性对照”孔中加入2.5微升U2检测缓冲液。
避免光照，并在室温下孵育反应30分钟，或进行长达1小时的动力学分析。
使用能够测量TR-FRET的微孔板阅读器读取荧光强度。
应从所有其他值中减去“空白”值。
UBCH 5c TR-FRET检测试剂盒示例结果：
图:Bay11-7821抑制了UbcH5c的活性。在Bay11-7822浓度增加的情况下测量了UbcH5的活性（Tocris#1744）。结果表示为相对于阳性对照的活性百分比（在没有抑制剂的情况下测量，设置为100%）。
https://www.amyjet.com/products/BPS-79901.shtml
——————————————————————
HDAC11重组蛋白：用于细胞信号传导和基因调控研究的关键蛋白
HDAC11，即组蛋白去乙酰化酶11，是HDAC家族中的一员，它在调控免疫细胞的成熟、分化和功能方面发挥着重要作用。作为一种独特的组蛋白去乙酰化酶，HDAC11不仅能够去乙酰化组蛋白，还能够去脂酰化非组蛋白，如转录因子和其他细胞内蛋白。这些功能使得HDAC11在多种生物学过程中扮演着关键角色，特别是在免疫调控方面。
艾美捷HDAC11重组蛋白：
货号: BPS-50021
构建：HDAC11（1-347（末端））
浓度：0.20 毫克/毫升
物种：人类
配制于：50 毫摩尔 Tris-HCl，pH 8.0，500 毫摩尔 NaCl，50 毫摩尔 KCl，2 毫摩尔 EDTA，3 毫摩尔 DTT，0.5% TritonX-100 和 10% 甘油
表达系统：Sf9
格式：水性缓冲液解决方案
稳定性：至少在 -80°C 下保存 6 个月。避免冻融循环。
储存：-80°C
Genbank 访问号：NM_024827
分子量：40 kDa
纯度：80%
比活性：每分钟每克 25 皮摩尔
检测条件：根据 HDAC11 荧光发生试剂盒（BPS Bioscience #50687）进行检测，使用不同量的 HDAC11。
应用：适用于研究酶动力学、筛选抑制剂和选择性分析。
HDAC11重组蛋白数据参考：
HDAC11的免疫调控功能表现在其对炎症反应、肿瘤免疫、移植免疫以及自身免疫疾病中的作用。研究表明，HDAC11能够通过负调控IL-10和上调促炎细胞因子来发挥免疫激活作用，但同时它也能通过负调控中性粒细胞和T细胞的功能来发挥免疫抑制作用。这种双向作用使得HDAC11成为一个有前景的免疫治疗靶点。
在肿瘤免疫方面，HDAC11通过调节免疫抑制因子的表达，如降低IL-10的表达，增强了肿瘤微环境中的抗肿瘤免疫反应。此外，HDAC11的抑制剂正在被开发用于增强肿瘤治疗的效果，尤其是在克服肿瘤治疗耐药性方面显示出潜力。
在移植免疫中，HDAC11的抑制可以改善器官移植后的免疫排斥反应，通过上调IL-10的表达和下调促炎因子的表达来促进免疫耐受。
值得注意的是，HDAC11的抑制剂开发是当前研究的热点之一。已有多种HDAC11选择性抑制剂被合成或从植物中提取出来，如FT234、FT895、SIS7、SIS17和加西诺等，这些抑制剂在抗真菌、抗肿瘤等方面显示出潜在的应用价值。
https://www.amyjet.com/products/BPS-50021.shtml
——————————————————————
WRN解旋酶活性测定试剂盒，荧光测定检测方案
WRN解旋酶活性测定试剂盒是一种荧光测定法，旨在通过监测WRN（Werner综合征ATP依赖性Helicase）拮抗剂/抑制剂对WRN催化的DNA解旋的影响来筛选和分析WRN拮抗剂/抑制剂。WRN Helicase活性检测试剂盒采用方便的96孔格式，含有足够的纯化重组WRN、ATP、DNA底物、检测缓冲液和添加剂，可用于100个反应。
艾美捷WRN解旋酶活性测定试剂盒：
货号: BPS-78852
同义词：双功能3'-5'外切酶/ATP依赖性解旋酶WRN，DNA解旋酶，RecQ样型3，RecQ蛋白样2，Werner综合征蛋白，ATP依赖性解旋酶，3'-5'外切酶，RECQ3，RECQL2
检测试剂盒格式：荧光法
物种：人类
需自备材料：能够读取激发波长/发射波长=525 nm/592 nm的荧光微孔板阅读器。
UniProt ：#Q14191
储存/稳定性：如果按照指示储存材料，该检测试剂盒从收到之日起最佳性能可维持长达6个月。
应用：筛选影响WRN解旋酶活性的小分子抑制剂或拮抗剂，在高通量筛选（HTS）应用中。
运输温度：-80°C
注：反应中DMSO的最终浓度不应超过1%。
WRN解旋酶活性测定试剂盒检测协议：
所有样品和对照应成对进行。
检测应包括“阴性对照”、“阳性对照”和“试验抑制剂”条件。
我们建议在实验中将稀释后的蛋白质保持在冰上。
有关蛋白质处理的详细信息，请参阅蛋白质常见问题解答(bpsbioscience.com)。
我们推荐使用HRO761作为内部对照。如果不对控制抑制剂进行剂量反应曲线测试，我们建议按照下面验证数据中显示的IC50值的0.1倍、1倍和10倍来运行控制抑制剂。
准备4倍浓缩WRN缓冲液：向4毫升4倍WRN缓冲液中加入40微升0.5M DTT并混匀。
准备1倍WRN缓冲液：用蒸馏水将1毫升4倍浓缩WRN缓冲液稀释4倍。混匀。
在冰上解冻WRN。短暂离心含有蛋白质的管子以回收管子的全部内容物。
将WRN用1倍WRN缓冲液稀释至5纳克/微升。每个孔需要40微升。
向“阳性对照”和“试验抑制剂”孔中各加入40微升稀释后的WRN。
向“阴性对照”孔中加入40微升1倍WRN缓冲液。
准备试验抑制剂（每个孔5微升）：对于滴定，准备比期望最终浓度高10倍的连续稀释。反应的最终体积为50微升。
向“试验抑制剂”孔中加入5微升试验抑制剂。
向“阴性对照”和“阳性对照”孔中各加入5微升溶剂溶液。
轻轻晃动板子，然后在室温(RT)下孵育15-20分钟。
解冻ATP（200 mM）并保持在冰上。
将ATP在1倍WRN缓冲液中稀释5倍至40 mM浓度。每个孔需要2.5微升。注意：将未使用的ATP分装成单次使用的小份，并立即存放在-80°C。
在冰上解冻WRN底物。短暂离心含有WRN底物的管子以回收管子的全部内容物。
将WRN底物在1倍WRN缓冲液中稀释12.5倍。每个孔需要2.5微升。注意：将未使用的WRN底物分装成单次使用的小份，并立即存放在-80°C。
准备主混合物，按1:1的比例混合稀释后的ATP（40 mM）和稀释后的WRN底物，如下：N个孔 × （2.5微升稀释后的WRN底物 + 2.5微升稀释后的ATP）。
通过向所有孔中加入5微升上述制备的主混合物来启动反应。
轻轻晃动板子，并立即放入能够读取λexc/λem=525 nm/592 nm的荧光微孔板阅读器中。
在25分钟后读取终点荧光，或在加入主混合物后使用动力学模式读取几个时间点。推荐的时间间隔为5分钟。
通过从其他值中减去“阴性对照”的值来计算结果。
WRN解旋酶活性测定试剂盒示例结果：
图:WRN的滴定。在WRN和2 mM ATP含量增加的情况下测量荧光。
https://www.amyjet.com/products/BPS-78852.shtml
——————————————————————
Conju-Probe-DBCO-SS-NHS，高化学选择性
DBCO-SS-NHS也称为DBCO-CONH-S-S-COONHS酯和DBCO-S-S-S-SE。一种可切割的异双官能接头，含有用于点击化学的DBCO部分和活化的NHS酯。
Conju-Probe-DBCO-SS-NHS是一种可切割的异双官能接头，含有用于点击化学的DBCO部分和活化的NHS酯。二苯并环辛炔基团（DBCO）是热稳定的，在没有催化剂的情况下通过应变促进的点击反应对叠氮化物基团具有高比反应性。
艾美捷Conju-Probe-DBCO-SS-NHS：
货号：CP-2024
分类：可裂解连接体，DBCO连接体
标签：可裂解连接体，点击化学，环辛炔，DBCO，DBCO试剂
化学式：C28H27N3O6S2
分子量：565.66
CAS号：1435934-53-4
纯度：>95%
物理形态：白色泡沫
溶解性：可溶于二氯甲烷（DCM）、四氢呋喃（THF）、乙腈、二甲基甲酰胺（DMF）和二甲基亚砜（DMSO）
储存条件：-20℃
Conju-Probe-DBCO-SS-NHS特征：
出色的生物相容性 — 应变促进的点击反应在温和的缓冲条件下迅速发生，无需使用辅助性的有毒铜催化剂。
高化学选择性 — 叠氮化物和DBCO基团不会与其他生物样本中发现的官能团发生反应或干扰，但它们之间可以高效地结合。
可裂解的硫硫键 — 可以被像DTT或GSH这样的游离巯基分子还原。
艾美捷科技是Conju-Probe的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。
https://www.amyjet.com/news/Conju-Probe-new.shtml
——————————————————————
Conju-Probe-Bromoacetyl-PEG3-DBCO，高化学选择性
Bromoacetyl-PEG3-DBCO：一种含有DBCO部分用于点击化学和溴乙酰基用于巯基共轭的异双官能接头。
Conju-Probe-溴乙酰基-PEG3-DBCO是一种异双官能连接体，含有用于点击化学的DBCO部分和用于巯基偶联的溴乙酰基。二苯并环辛炔基团（DBCO）是热稳定的，在没有催化剂的情况下通过应变促进的点击反应对叠氮化物基团具有高比反应性。
艾美捷Conju-Probe-Bromoacetyl-PEG3-DBCO：
货号：CP-2084
类别：可裂解连接体，DBCO连接体
标签：可裂解连接体，点击化学，环辛炔，DBCO，DBCO试剂
化学式：C29H34BrN3O6
分子量：600.50
CAS号：不适用（N/A）
纯度：大于95%
物理形态：淡黄色油状物
溶解性：可溶于二氯甲烷（DCM）、四氢呋喃（THF）、乙腈、二甲基甲酰胺（DMF）和二甲基亚砜（DMSO）
储存条件：-20℃
Conju-Probe-Bromoacetyl-PEG3-DBCO特征：
z越的生物相容性 — 在温和的缓冲条件下，应变促进的点击化学反应迅速发生，无需使用辅助性的有毒铜催化剂。
高化学选择性 — 叠氮化物和DBCO基团不会与生物样本中发现的其他官能团发生反应或干扰，但它们之间可以高效地结合。
亲水性PEG3间隔 — 减少聚集，最小化空间位阻，并增强溶解性。
艾美捷科技是Conju-Probe的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。
https://www.amyjet.com/news/Conju-Probe-new.shtml
——————————————————————
Conju-Probe-Amino-bis-PEG3-DBCO，减少聚集，提高溶解性
Bromoacetyl-Amino-bis-PEG3-DBCO：一种含有两个用于点击化学的DBCO部分和仲胺的异官能连接体。
Conju-Probe-氨基双-PEG3-DBCO是一种异官能连接体，含有两个用于点击化学的DBCO部分和一个仲胺。二苯并环辛炔基团（DBCO）是热稳定的，在没有催化剂的情况下通过应变促进的点击反应对叠氮化物基团具有高比反应性。
艾美捷Conju-Probe-Amino-bis-PEG3-DBCO：
货号：CP-2067
类别：DBCO连接体，多臂连接体
标签：分支连接体，DBCO试剂，PEG-DBCO
化学公式：C63H79N7O14
分子量：1158.34
CAS号：不适用（N/A）
纯度：大于90%
物理形态：淡黄色油状物
溶解性：可溶于二氯甲烷（DCM）、四氢呋喃（THF）、乙腈、二甲基甲酰胺（DMF）和二甲基亚砜（DMSO）
储存条件：-20℃
Conju-Probe-Amino-bis-PEG3-DBCO特征：
出色的生物相容性 — 在温和的缓冲条件下，应变促进的点击反应迅速发生，无需使用附加的有毒铜催化剂。
高化学选择性 — 叠氮化物和DBCO基团不会与生物样本中发现的其他官能团发生反应或干扰，但它们之间能够高效地结合。
亲水性PEG3间隔臂 — 减少聚集，最小化空间位阻，并提高溶解性。
艾美捷科技是Conju-Probe的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。
https://www.amyjet.com/news/Conju-Probe-new.shtml
——————————————————————
Conju-Probe高亲水性BCN-PEG3-amine (endo)，适合水性生物偶联
BCN-PEG3-amine (endo)：一种具有羧酸反应性的异双官能BCN接头。
Conju-Probe-BCN-PEG3-胺（endo）是一种异双官能接头，含有用于点击化学的BCN部分和伯胺。
相对于所有其他无金属点击化学探针，BCN与其叠氮化物对应物的高反应性及其高亲水性非常适合水性生物偶联。
艾美捷Conju-Probe-BCN-PEG3-amine (endo)：
货号：CP-6003
分类：BCN连接体
标签：BCN试剂，BCN-PEG
化学公式：C19H32N2O5
分子量：368.47
CAS号：1883512-27-3
纯度：大于90%
物理形态：油状
溶解性：可溶于二氯甲烷（DCM）、四氢呋喃（THF）、乙腈、二甲基甲酰胺（DMF）和二甲基亚砜（DMSO）
储存条件：-20℃
Conju-Probe-BCN-PEG3-amine (endo)特征：
卓越的生物相容性 — 在温和的缓冲条件下，应变促进的点击反应迅速发生，无需使用附加的有毒铜催化剂。
高化学选择性 — 叠氮化物和BCN基团不会与生物样本中发现的其他官能团发生反应或干扰，但它们之间能够高效地结合。
亲水性PEG3间隔臂 — 减少聚集，最小化空间位阻，并提高溶解性。
艾美捷科技是Conju-Probe的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。
https://www.amyjet.com/news/Conju-Probe-new.shtml
——————————————————————
Conju-Probe-PTAD-alkyne：已证实的选择性，更稳定
BCN-PEG3-amine (endo)：一种含有用于酪氨酸点击反应的PTAD部分和用于点击化学的炔烃的异双官能接头。
Conju-Probe-PTAD炔是一种异双官能接头，含有用于酪氨酸点击反应的PTAD部分和用于点击化学的炔。
艾美捷Conju-Probe-PTAD-alkyne：
货号：CP-7001
类别：酪氨酸选择性PTAD
标签：点击化学，PTAD，酪氨酸点击
化学公式：C12H11N3O4
分子量：261.23
CAS号：不适用（N/A）
纯度：大于90%
物理形态：白色固体
溶解性：可溶于甲醇（MeOH）、二甲基甲酰胺（DMF）和二甲基亚砜（DMSO）
储存条件：-20℃
4-苯基-3H-1,2,4-三唑啉-3,5（4H）-二酮（PTADs）是最近报道的一种能够与酪氨酸发生点击反应的生物正交探针。他们的好处包括但不限于：
已证实的选择性 —— 对酪氨酸具有高于半胱氨酸和赖氨酸的选择性。
在小分子、肽和蛋白质的修饰中，对酪氨酸残基的酚基侧链具有化学选择性。
适用于广泛的生物可接受水性缓冲液，pH范围广泛，无需使用重金属催化剂。
与马来酰亚胺相比，酪氨酸点击连接在温度、极端pH值和暴露于人血浆中提供更好的稳定性。
艾美捷科技是Conju-Probe的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。
https://www.amyjet.com/news/Conju-Probe-new.shtml
