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CellSafe/艾美捷PCR/qPCR定制预混料解决方案

艾美捷CellSafe PCR/qPCR定制预混料解决方案：

定制服务：

CellSafe提供高品质产品，满足客户的多样化需求。

为了节省客户购买和使用现成产品所需的时间和精力，CellSafe提供针对客户应用优化的产品。

推荐客户：

当使用相同的引物/探针进行重复实验时

开发新的定制PCR/qPCR试剂盒

利用现有的诊断标记对PCR/qPCR试剂盒进行产品化/商业化

定制选项：

格式：从各种填充尺寸和容器中选择（散装/微管/8条带/96孔板）

包装：定制包装标签以进行商业化

组成：找到组件的Z佳配方

文件：提供额外的性能测试服务

CellSafe致力于提供支原体全面解决方案，可以有效检测、消除和预防影响细胞培养的支原体。作为CellSafe在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的CellSafe产品。

https://www.amyjet.com/brand/CellSafe.shtml

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CellSafe/艾美捷HiSense UDG热不稳定蛋白--低热稳定性和易于失活

HiSense™ UDG（尿嘧啶-DNA糖基化酶）热敏感型含有在海洋细菌中发现的酶。与大肠杆菌中的UNG（尿嘧啶-DNA糖基化酶）一样，它水解单链或双链DNA中的尿嘧啶-糖苷键，切除尿嘧啶并在DNA中产生碱基敏感的无碱基位点。这些无碱基位点可以通过内切核酸酶、热处理或碱基处理水解。根据DNA的制备方式，尿嘧啶DNA糖基化酶可以用来实现一般性、位点特异性或链特异性的含尿嘧啶DNA断裂。这种酶显示出较低的热稳定性，因此更容易失活。

尿嘧啶-DNA糖基化酶可以用来在任何含有胸苷残基的位点切割DNA。

由于尿嘧啶-DNA糖基化酶的热敏感性，其主要用途是预防PCR中的交叉污染。与大肠杆菌中的酶相比；使用这种UNG制剂，没有必要在扩增后立即冷冻PCR产物，或者将反应混合物保持在+70°C。

艾美捷CellSafe HiSense UDG热不稳定蛋白#SCU-100组成：

Components                                    Size

Uracil-DNA Glycosylase(UDG) heat labile              100 µl (1 unit/µl)

储存：

在-20℃下储存检查产品标签上的有效期。

CellSafe HiSense UDG热不稳定蛋白特点：

低热稳定性和易于失活，包括来自海洋细菌的酶。

高效水解单链或双链DNA中的尿嘧啶-糖苷键。

预防PCR中的交叉污染。

测试方案：

1) 向20~50微升的PCR混合液中加入1微升（1单位）UDG。

2) 在25℃下反应5~10分钟。

3) 在95℃下加热2分钟以使UDG失活。

4) 使用经过UDG处理的PCR混合液进行PCR。

CellSafe HiSense UDG热不稳定蛋白结果：

使用PCR产物（包括尿嘧啶碱基）的尿嘧啶DNA糖基化酶的效率

泳道 1: 含有dUTP的1KB PCR产物的108个拷贝

泳道 2: 含有dUTP的1KB PCR产物的107个拷贝

泳道 3: 含有dUTP的1KB PCR产物的106个拷贝

泳道 4: 含有dUTP的1KB PCR产物的105个拷贝

泳道 5: 100bp DNA梯度

泳道 6: 含有dUTP的PCR产物的108个拷贝

泳道 7: 含有dUTP的PCR产物的107个拷贝

泳道 8: 含有dUTP的PCR产物的106个拷贝

泳道 9: 含有dUTP的PCR产物的105个拷贝

使用包括尿嘧啶碱基的连续稀释的PCR产物进行了尿嘧啶DNA糖基化酶的效率测试。同时，HiSense™ Taq主混合液也被用作阴性对照进行了测试。反应混合液先在25°C下孵育5分钟，然后95°C下5分钟，接着进行25个循环，每个循环包括95°C下30秒，60°C下30秒，72°C下1分钟。HiSense™ Taq主混合液（含UDG）除了dATP、dGTP、dCTP和dTTP外，还含有dUTP。

CellSafe致力于提供支原体全面解决方案，可以有效检测、消除和预防影响细胞培养的支原体。作为CellSafe在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的CellSafe产品。

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CellSafe/艾美捷HiSense cDNA合成主混合液：更高的产量、更好的纯度

HiSense™ cDNA合成主混合液是一种全合一（All-in-one）格式的产品，它允许更方便、更快速地合成第一链cDNA。该主混合液含有M-MLV（莫洛尼鼠白血病病毒）逆转录酶（RTase）、核糖核酸酶抑制剂、dNTPs（去氧核苷酸三磷酸）和Oligo（dT）引物。

Oligo (dT) 是能够与 mRNA 的 3'-Poly(A) 尾部退火的寡核苷酸。Oligo (dT) 的用途仅限于具有 3'-Poly(A) 尾部的 mRNA 或总 RNA 模板。

一般说明：

1) 富集的聚腺苷酸 (poly(A)+) mRNA 和总 RNA 都可用于第一链 cDNA 的合成，但富集的聚腺苷酸 mRNA 可能会产生更高的产量和最终产品更好的纯度。

2) RNA 样本必须无基因组 DNA 污染。

3) 为了去除与 cDNA 互补的 RNA，加入 1 µl (2 U) 的大肠杆菌核糖核酸酶 H 并在 37°C 下孵育 20 分钟。

4) 第一链 cDNA 合成完成后，cDNA 产物可以直接作为模板用于标准 PCR/qPCR。

艾美捷CellSafe HiSense cDNA合成主混合液#CDS-100, CDS-200, CDS-400, CDSM-200, CDSM-400, LCDS-96, LCDS-480操作步骤：

1) 在冰上解冻 RNA 模板和全合一 5X cDNA 主混合液。轻轻但彻底地混合溶液。

2) 在冰上的 PCR 管中准备以下反应混合物。

3) 充分混合组分并通过简短的离心收集。在以下反应条件下孵化混合物。

4) 新合成的第一链 cDNA 已准备好用于立即的下游应用，或在 -20°C 下长期储存。

CellSafe HiSense cDNA合成主混合液 qPCR结果：

使用HiSense™QGreenBlue qPCR Master Mix（目录号QBLR-05）扩增人cDNA的GAPDH基因（217bp片段）

CellSafe HiSense HiSense cDNA合成主混合液相关产品：

HiSense DLRTaq PCR Polymerase/ Master Mix/ Premix

HiSense Multiplex PCR Master Mix/ Premix

HiSense QPlex qPCR Master Mix

HiSense QGreenBlue qPCR Master Mix

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CellSafe/艾美捷高效、易于使用和可靠的HiSense RT-PCR主混合液

HiSense™ RT-PCR 主混合液提供了一种单步程序，用于执行 RT-PCR 反应。由于包含了加载染料，因此后续的加载和 RT-PCR 产物的可视化更加简化。用户需要提供引物和经 DNase 处理的模板 RNA。

本产品包含了在单个反应管中进行 PCR 扩增所需的所有必要试剂。具体来说，这种一步式 RT-PCR 主混合液含有特殊的反应缓冲液、逆转录酶抑制剂、dNTPs 和无 DNA Taq DNA 聚合酶，适用于使用任何 RNA 模板的高度敏感和特异性 RT-PCR。

特殊的 RT-PCR 缓冲液含有稳定剂和增强剂，这些成分可以优化“单步”中的两个反应。

该主混合液为最终用户提供了一个高效、易于使用和可靠的替代传统“两步”顺序 RT-PCR 的选择。

艾美捷CellSafe HiSense RT-PCR主混合液特点：

1、特殊的 RT-PCR 缓冲液含有稳定剂和增强剂，它们优化了“一步法”中的两个反应。

2、主混合液为最终用户提供了一个与传统“两步法”顺序 RT-PCR 相比，更高效、易用且可靠的替代方案。

3、包含蓝色染料，使得主混合液可以直观确认。

4、热启动：是的。

CellSafe HiSense RT-PCR主混合液结果：

人类RNA中GAPDH基因（217bp片段）的扩增

HiSense™ RT-PCR主混合液的循环条件为：42°C下30分钟，95°C下5分钟，接着进行35个循环，每个循环包括95°C下5秒，60°C下30秒，以及72°C下30秒。通过包含特殊的反应缓冲液、逆转录酶（RTase）、逆转录酶抑制剂、dNTPs（去氧核苷酸三磷酸）和HiSense™ Taq PCR聚合酶，实现了高度敏感和特异性的RT-PCR。

Lane 1 : 100bp DNA Ladder

Lane 2 : 10ng Human RNA

Lane 3 : 1ng Human RNA

Lane 4 : 100pg Human RNA

Lane 5 : 10pg Human RNA

Lane 6 : 1pg Human RNA

Lane 7 : 100fg Human RNA

CellSafe HiSense RT-PCR主混合液相关产品：

HiSense DLRTaq PCR Polymerase/ Master Mix/ Premix

HiSense cDNA Synthesis Master Mix

HiSense QPlex RT-qPCR Master Mix

HiSense QGreenBlue RT-qPCR Master Mix

CellSafe致力于提供支原体全面解决方案，可以有效检测、消除和预防影响细胞培养的支原体。作为CellSafe在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的CellSafe产品。

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细胞无期限分裂，永生化细胞优缺点一览

永生化细胞（也称为连续细胞或细胞系）是端粒和/或肿瘤抑制基因已经被改变的原代细胞。肿瘤抑制基因（例如p53和Rb）对于在DNA损伤的可能性更高时（即在多个细胞周期后，更多关于细胞周期的信息请访问我们的知识库）向细胞发出停止分裂的信号非常重要。在永生化细胞的情况下，这些基因已经被抑制或其功能被抑制，使细胞能够无限期地继续分裂。

图：端粒是DNA的重复区域，形成染色体末端的保护“帽”，保护染色体免受退化。经过每一轮细胞周期，这些端粒会变短，Z终导致细胞进入衰老阶段，细胞停止分裂。

理想的永生化细胞具有与其亲本组织相似的基因型和表型。一些实验室使用相同的永生化细胞数十年，因此，它们的细胞系已经被很好地表征，并为其长期项目提供了一致的基线。Z古老和Z常用的人类细胞系是HeLa细胞系，该细胞系是在20世纪50年代从宫颈癌细胞中建立的！但是，检查细胞系的身份以确保您的细胞系是您认为的那样是非常重要的。

原代细胞优缺点：

优点：

1、与亲本组织有相似的染色体数量

2、具有亲本组织的专门生化特性（生长因子和激素分泌）

3、是体内情况的Z佳实验模型

缺点：

1、有限的寿命/有限的细胞分裂次数

2、种群之间和不同制备之间的相当大的变异

3、在培养中维持起来非常困难（非常“挑剔”）——也更容易受到污染

4、难以获得（供体可用性）

艾美捷永生化细胞优缺点：

优点：

1、倾向于比原代细胞更快地生长，并且可以生长到更高的细胞密度

2、细胞类型统一（大多数是克隆的）

3、相同的供体来源，因此批次间变化较小

4、大多数细胞特性从亲代细胞中得以保留

5、为长期项目节省了金钱和时间

6、适用于体外实验

缺点：

1、细胞在体外培养过程中可能随时间分化

2、体外的细胞行为可能不代表体内情况

3、表型或细胞功能可能发生改变

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永生化小鼠雪旺细胞使用协议

施万细胞是研究涉及糖基化、再生能力降低、氧化应激以及其他神经退行性疾病的糖尿病神经病变发病机制的宝贵工具。这种永生化小鼠施万细胞表达胶质细胞标记物（S100、GFAP、p75NTR）、参与施万细胞发育和周围髓鞘形成的转录因子（Krox20、Oct6、PAX3 和 SOX10），以及神经营养因子（NGF、BDNF、GDNF 和 CNTF）。

在生长因子如血小板源性生长因子-BB（PDGF-BB）、酸性成纤维细胞生长因子（aFGF）、β成纤维细胞生长因子（bFGF）或转化生长因子-β1（TGF-β1）存在的情况下，这些细胞会表现出有丝分裂反应。IMS32 细胞可用于研究涉及周围神经再生的作用机制，以及作为评估神经系统疾病发病机制的体外模型。使用免疫反应性来检测细胞标记物。

艾美捷abm永生化小鼠雪旺细胞基本参数：

货号：T0295

名称：永生化小鼠施万细胞（IMS32）

生物体：小鼠（M. musculus）

组织：大脑

供体历史：ICR 小鼠

生长特性：贴壁，纺锤形

细胞类型：永生化细胞

储存条件：液氮的气相，或低于-130°C。

运输条件：干冰运输。

产品格式：冷冻

预期用途：本产品仅用于实验室研究。不适用于任何动物或人类的治疗用途，任何人类或动物的消费，或任何诊断用途。

生物安全等级：II

生长条件：

建议使用 PriCoat™ T25 烧瓶（G299）或应用细胞外基质（G422）以促进细胞对培养容器的粘附。PriGrow III (TM003) + 10% FBS + 1% 青霉素/链霉素溶液（G255），37.0°C，5% CO₂。

拆包和储存说明：

1. 目视检查包装容器是否有泄漏或破损的迹象。

2. 立即将干冰包装中的冷冻细胞转移到低于-130°C的温度中，最好在液氮气相储存，直到准备使用。

为了确保Z高的活性水平，在收到后尽快解冻小瓶并开始培养。如果需要继续储存，小瓶应仅储存在低于-130°C或液氮气相中。不要在-70°C下储存，因为这会导致活性丧失。

解冻协议：

1. 在37°C水浴中快速摇晃解冻细胞（最多2分钟）。瓶盖应保持在水面之上，以最小化污染风险。

2. 用70%乙醇喷洒并擦拭瓶身外部以消毒。从这一点开始，所有操作应严格在生物安全柜内使用无菌条件进行。

3. 将细胞悬液转移到含有5ml预加热的完全生长培养基的15ml无菌圆锥管中。以125xg离心细胞5-7分钟。

4. 在不干扰细胞沉淀物的情况下吸去上清液。将细胞沉淀物重新悬浮在推荐的预加热的完全生长培养基中，并分装到T25培养瓶中。

5. 在推荐的条件下培养细胞。

传代协议：

下面给出的体积是针对T75培养瓶的；根据培养容器的大小按比例增加或减少体积。当培养容器80%融合时传代细胞。

1. 吸去培养基，并加入2-3ml预加热的0.25% Trypsin-EDTA到培养容器中。

2. 在显微镜下观察细胞以确认脱落（通常在2-10分钟内）。难以脱落的细胞可以放在37°C下，几分钟以促进脱落。

3. 通过向培养容器中加入相等体积的完全生长培养基来中和Trypsin-EDTA。

4. 将培养悬液转移到无菌离心管中，并以125xg离心5分钟。实际的离心时间和速度可能因细胞类型而异。

5. 吸去上清液，并用预加热的新鲜完全生长培养基重新悬浮沉淀物。根据需要将适量的细胞悬液添加到新的培养容器中。

6. 在推荐的条件下培养细胞。

永生化小鼠雪旺细胞文献参考：

Watabe, K., Fukuda, T., Tanaka, J., Honda, H., Toyohara, K., & Sakai, O. (1995). Spontaneously immortalized adult mouse Schwann cells secrete autocrine and paracrine growth-promoting activities. Journal of neuroscience research, 41(2), 279–290.

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永生化犬真皮成纤维细胞- Myc技术参数和存储信息

永生化犬真皮成纤维细胞- Myc：使用实时PCR技术定量分析永生化细胞系中Myc基因的表达。

艾美捷abm永生化犬真皮成纤维细胞- Myc基本参数：

货号：T0267

名称：永生化犬皮肤成纤维细胞 - Myc

生物体：狗（Canine）

组织：皮肤

生长特性：贴壁，双极

细胞类型：永生化细胞

储存条件：液氮的气相，或低于-130°C

运输条件：干冰运输

产品格式：冷冻

预期用途：本产品仅用于实验室研究。不适用于任何动物或人类的治疗用途，任何人类或动物的消费，或任何诊断用途

生物安全等级：II

分析证书：有关批次特定的测试结果，请参考可在 www.abmgood.com 查找的适用的分析证书

生长条件：需要使用PriCoat™ T25烧瓶（G299）或应用细胞外基质（G422）以促进细胞对培养容器的粘附。PriGrow III (TM003) + 10% FBS + 1% 青霉素/链霉素溶液（G255），37.0°C，5% CO₂

永生化犬真皮成纤维细胞- Myc拆包和储存说明：

1. 目视检查包装容器是否有泄漏或破损的迹象。

2. 立即将干冰包装中的冷冻细胞转移到低于-130°C的温度中，Z好在液氮气相储存，直到准备使用。

为了确保Z高的活性水平，在收到后尽快解冻小瓶并开始培养。如果需要继续储存，小瓶应仅储存在低于-130°C或液氮气相中。不要在-70°C下储存，因为这会导致活性丧失。

冷冻保存：使用冷冻保存介质（TM024），或含有10% DMSO的完全生长培养基。

永生化方法：通过连续传代和带有Myc基因的重组慢病毒转导。

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永生化小鼠肠肌成纤维细胞解冻协议&文献参考

肠上皮细胞为抵御通过腔管进入身体的细菌、抗原和有毒物质提供了一个保护屏障。这些细胞受到调节，以分化和增殖来建立它们的保护功能。已有研究表明，位于上皮细胞下方的肠肌成纤维细胞在调节肠上皮细胞方面发挥作用。

永生化小鼠肠肌成纤维细胞是从C57BL/6J小鼠的结肠粘膜中分离出来的，并用SV40大T抗原转染。它保留了原始的肌成纤维细胞表型，并表达α-平滑肌肌动蛋白、波形蛋白和Ⅰ型胶原。也检测到与免疫反应相关的蛋白，如TLR-4、CD14、MD2和IκBα。此外，这些细胞对脂多糖（LPS）处理有反应，能够引发炎症反应，导致IκBα降解和p38 MAPK磷酸化。它是研究肠损伤、纤维化、炎症、组织修复和肠组织免疫调节的宝贵工具。使用西方印迹（Western blot）和免疫荧光染色来确定细胞标记和蛋白表达。

艾美捷abm永生化小鼠肠肌成纤维细胞基本参数：

货号：T0565

名称：永生化小鼠肠肌成纤维细胞

生物体：小鼠 (M. musculus)

组织：肠

供体历史：C57BL/6J 小鼠

生长特性：贴壁，纺锤形

细胞类型：永生化细胞

储存条件：液氮的气相，或低于-130°C

运输条件：干冰运输

产品格式：冷冻

预期用途：本产品仅用于实验室研究。不适用于任何动物或人类的治疗用途，任何人类或动物的消费，或任何诊断用途。

生物安全等级：II

分析证书：有关批次特定的测试结果，请参考可在 www.abmgood.com 查找的适用的分析证书。

生长条件：需要使用PriCoat™ T25烧瓶（G299）或应用细胞外基质（G422）以促进细胞对培养容器的粘附。PriGrow III (TM003) + 10% FBS + 1% 青霉素/链霉素溶液（G255），37.0°C，5% CO₂

拆包和储存说明：

1. 目视检查包装容器是否有泄漏或破损的迹象。

2. 立即将干冰包装中的冷冻细胞转移到低于-130°C的温度中，Z好在液氮气相储存，直到准备使用。

为了确保Z高的活性水平，在收到后尽快解冻小瓶并开始培养。如果需要继续储存，小瓶应仅储存在低于-130°C或液氮气相中。不要在-70°C下储存，因为这会导致活性丧失。

永生化小鼠肠肌成纤维细胞解冻协议：

1. 在37°C水浴中快速摇晃解冻细胞（Z多2分钟）。瓶盖应保持在水面之上，以最小化污染风险。

2. 用70%乙醇喷洒并擦拭瓶身外部以消毒。从这一点开始，所有操作应严格在生物安全柜内使用无菌条件进行。

3. 将细胞悬液转移到含有5ml预加热的完全生长培养基的15ml无菌圆锥管中。以125xg离心细胞5-7分钟。

4. 在不干扰细胞沉淀物的情况下吸去上清液。将细胞沉淀物重新悬浮在推荐的预加热的完全生长培养基中，并分装到T25培养瓶中。

5. 在推荐的条件下培养细胞。

永生化小鼠肠肌成纤维细胞文献参考：

Kawasaki, H., Ohama, T., Hori, M., & Sato, K. (2013). Establishment of mouse intestinal myofibroblast cell lines. World journal of gastroenterology, 19(17), 2629–2637.

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