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Biogradetech PKH26红色荧光细胞链接试剂盒(外泌体染色)，多领域适用

PKH26细胞连接试剂盒（用于通用细胞膜标记）是一种基于荧光探针PKH26的测试试剂盒，用于通用细胞薄膜标记。它适用于体外细胞标记、体外细胞增殖和长期细胞追踪研究。PKH26是一种获得专利的具有长疏水性尾部的膜标记探针，可以稳定地插入细胞膜的肽区。PKH26荧光在黄橙色光谱范围内，最大激发波长为551nm，最大发射波长为567nm。它与罗丹明或PE检测系统兼容。它也可以用标准荧光素过滤器激发，但是荧光强度可能被轻微地降低。PKH26具有最长的体内半衰期，超过100天，非常适合体内细胞跟踪、细胞增殖研究和其他长期实验。此外，PKH26染料已在体外和体内跟踪实验中成功用于标记染色体和细胞外小泡。

艾美捷PKH26红色荧光细胞链接试剂盒(外泌体染色)基本参数：

目录号：B-CHK104

规格：0.1 mL

储存：室温

PKH26红色荧光细胞链接试剂盒(外泌体染色)一般细胞膜标记程序分析：

亲脂性染料结合到细胞膜上进行标记。染色强度是染料浓度和细胞浓度的函数，与渗透性无关。因此，确保适量的染料对于避免过度标记至关重要，这可能导致细胞膜完整性的丧失或细胞活力的降低。

以下程序可用于在体外和体内标记细胞，包括干细胞、淋巴细胞、单核细胞、内皮细胞、神经元或任何其他类型的细胞。体内细胞的标记过程可能需要进行某些修饰，如血小板染色或吞噬细胞的选择性标记。

在下面的染色过程中，细胞浓度和染料浓度表示该过程中使用的初始浓度。这些浓度已被证明适用于各种细胞类型。用户应根据实验目的，通过评估染色后细胞活力（如PI染色）、荧光强度、染色均匀性以及是否影响所研究细胞的功能，确定最佳染料浓度和细胞浓度。

注1：在PKH26染色过程中，不应存在叠氮化物或代谢毒性物质。

注2：虽然粘附细胞也可以染色，但单个悬浮细胞可以获得更好的染色均匀性。因此，对于粘附细胞，建议使用抑肽酶（胰蛋白酶/EDTA）将其消化成单个悬浮细胞，以获得更好的染色结果。

以下程序的最终体积为2 mL，PKH26浓度为2×10-6 M，细胞浓度为1×107个细胞/mL。以下所有步骤均在室温（20-25°C）下进行。

1.将含有2x107个单细胞的悬浮液置于锥形底部聚丙烯管中，并使用不含血清的培养基冲洗。注：血清蛋白质和脂质也会与染料结合，从而降低可用于膜粘合的有效浓度。在用DiluentC重悬用于标记（步骤4）之前，用无血清培养基或缓冲液洗涤一次（步骤1）可获得最佳结果。

2.将细胞（400x g）离心5分钟，形成松散的颗粒。注意：PKH26乙醇染料溶液不应直接添加到细胞沉淀中。这将导致异质性表达和细胞活力降低。

3.离心细胞后，仔细吸取上清液，注意不要去除任何细胞，而是留下25μL的上清液。注：为了获得可重复的结果，当细胞悬浮在稀释剂C中时，重要的是尽量减少残留培养基或缓冲液的量。

4.通过向细胞沉淀中加入1mL稀释剂C制备2x细胞悬浮液，并用温和移液管重悬以确保完全分散。不要涡旋，也不要让细胞长时间停留在稀释剂C中。注意：生理盐的存在会导致染料形成胶束，并大大降低染色效率。因此，重要的是在添加染料时将细胞悬浮在稀释剂C中，而不是悬浮在培养基或缓冲液中。

5.染色前，通过在聚丙烯离心管中向1 mL稀释剂C中加入4μL PHH26乙醇染料溶液，在稀释剂C中制备2倍染料溶液（4x10–6 M），并充分混合以分散。

注1：为了最大限度地减少乙醇对细胞活力的影响，步骤5中添加的染料体积应在步骤6结束时产生不超过1-2%的乙醇。

注2：如果需要最终染料浓度为2x10–6 M，则通过用未变性的100%乙醇稀释试剂盒中提供的PKH26乙醇染料溶液来制备中间染料原液，将获得最具重现性的结果。

6.将1mL的2x细胞悬浮液（步骤4）快速添加到1mL的2x染料溶液（步骤5）中，并立即通过移液管将样品挤出。混合指示体积后的最终浓度为1x107细胞/mL和2x10–6MPKH26

注：由于染色几乎是即时的，细胞在染料溶液中快速均匀的分散对于正确、均匀和可重复的标记至关重要。

该试剂仅用于科学研究领域，不适用于临床诊断或其他用途。

https://www.amyjet.com/products/B-CHK104-0.1mL.shtml

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PKH26红色荧光细胞链接试剂盒(外泌体染色)，实现细胞示踪和荧光标记的强大工具

在细胞生物学和生物医学研究中，细胞示踪和荧光标记是非常重要的技术手段。PKH26红色荧光细胞链接试剂盒作为一种强大的工具，提供了一种简单而可靠的方法来标记和追踪细胞。本文将介绍PKH26试剂盒的原理、使用方法以及其在细胞研究中的应用。

1. PKH26试剂盒的原理：

PKH26试剂盒采用了一种独特的红色荧光染料，即PKH26染料。该染料能够与细胞膜中的脂质结合，并在细胞分裂过程中均匀地传递给子细胞。这使得被标记的细胞能够保持长时间的强烈红色荧光，从而实现对细胞的可靠追踪。

2. 使用方法：

使用PKH26试剂盒非常简便。首先，将待标记的细胞收集并洗涤，以去除培养基中的血清成分。然后，将细胞悬浮液与PKH26染料预混合，并在室温下孵育一段时间，以允许染料与细胞膜结合。最后，通过洗涤和培养，将标记的细胞用于后续实验或移植。

3. 应用领域：

PKH26试剂盒在细胞研究中具有广泛的应用。以下是一些常见的应用领域：

细胞追踪：PKH26标记的细胞可以用于追踪其在体内或体外的迁移、增殖和分化情况。这对于研究细胞命运、组织再生和肿瘤转移等过程非常有价值。

细胞相互作用研究：通过将不同细胞类型分别标记为PKH26红色和其他荧光染料，可以实现对细胞相互作用、细胞融合和细胞迁移的实时观察和分析。

细胞治疗和移植研究：PKH26标记的细胞可以用于跟踪和评估细胞治疗的效果，以及研究移植细胞在宿主组织中的存活和分布情况。

药物筛选和毒性评估：通过将PKH26标记的细胞与药物或毒性物质共同处理，可以评估其对细胞生存和功能的影响，从而为药物筛选和毒性评估提供可靠的指标。

艾美捷PKH26红色荧光细胞链接试剂盒(外泌体染色)基本参数：

目录号：B-CHK104

规格：0.1 mL

储存：室温

PKH26红色荧光细胞链接试剂盒是一种简单而可靠的细胞示踪和荧光标记工具。其独特的染料和使用方法使其在细胞研究中得到广泛应用。通过使用PKH26试剂盒，研究人员可以实现对细胞的可靠追踪，揭示细胞行为和相互作用的重要信息，从而推动细胞生物学和生物医学领域的进展。

该试剂仅用于科学研究领域，不适用于临床诊断或其他用途。

https://www.amyjet.com/products/B-CHK104-0.1mL.shtml

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Biogradetech Annexin V-AF 488/PI双染细胞凋亡检测试剂盒，快速方便

细胞凋亡是一种程序性细胞死亡，目的是从组织中清除不需要的、受损的或衰老的细胞。在正常细胞中，负性磷脂位于细胞膜的内侧，而膜的外表面被不带电的磷脂（PS）占据。细胞进入细胞凋亡后，带负电荷的PS从质膜的内部小叶转移到外部小叶，从而使PS暴露在外部细胞环境中。人抗凝血剂，膜联蛋白V是一种35-36kDa的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，对PS具有高亲和力。用荧光团或生物素标记的膜联蛋白Ⅴ可以通过结合暴露在外叶上的PS来识别凋亡细胞。碘化丙啶（PI）是一种荧光细胞核染料，不渗透支持细胞和凋亡细胞，但用红色荧光染色死细胞，与细胞中的核酸紧密结合。

AnnexinV-AF488/PI细胞凋亡检测试剂盒提供了一种快速方便的细胞凋亡检测方法。在所提供的结合缓冲液中用膜联蛋白V-AF 488/PI细胞凋亡检测试剂盒对细胞群体进行染色后，早期凋亡细胞显示细胞膜的绿色荧光，死细胞显示细胞核的红色荧光和细胞膜的红色荧光，活细胞显示很少或没有荧光。此外，为了解决细胞凋亡检测和结果的不标准化问题，该试剂盒还提供了一种获得专利的细胞凋亡阳性参考物质。检测可以通过流式细胞术或荧光显微镜进行分析。

艾美捷Annexin V-AF 488/PI双染细胞凋亡检测试剂盒基本参数：

目录号：D-AKE0002

规格：50T

储存：在-20°C下储存12个月，避光

Annexin V-AF 488/PI双染细胞凋亡检测试剂盒供应材料和储存条件：

试剂准备：

注意：在打开小瓶之前，请以低速对小瓶进行短暂离心。

1×膜联蛋白V结合缓冲液：使用前制备。用去离子水将膜联蛋白V结合缓冲液（5×）稀释至1×。将多余的试剂在4°C下保存6个月。

附件V-AF 488：随附随用。使用前将其平衡至室温。未使用的试剂被分装并储存在20°C的温度下，避光保存。避免重复冷冻和解冻。

碘化丙啶（PI）：供应时即用。使用前将其平衡至室温。未使用的试剂被分装并储存在20°C的温度下，避光保存。避免重复冷冻和解冻。

细胞凋亡诱导因子A：供应即用。使用前将其平衡至室温。储存在20°C温度下。细胞凋亡诱导剂B：随附即用。使用前将其平衡至室温。储存温度为20°C。

该试剂仅用于科学研究领域，不适用于临床诊断或其他用途。

https://www.amyjet.com/products/D-AKE0002-50T.shtml

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Annexin V-AF 488/PI双染细胞凋亡检测试剂盒，实现高灵敏度的细胞凋亡检测

引言：

细胞凋亡是细胞生物学中的重要过程，对于研究细胞生命周期、发育、疾病和药物研发具有重要意义。Annexin V-AF 488/PI双染细胞凋亡检测试剂盒是一种高灵敏度的工具，可用于检测和分析细胞凋亡。本文将介绍该测试剂盒的原理、使用方法以及其在细胞凋亡研究中的应用。

1. 测试剂盒原理：

Annexin V-AF 488/PI双染细胞凋亡检测试剂盒基于Annexin V和PI（Propidium Iodide）的双染技术。Annexin V是一种结合在凋亡细胞表面的蛋白质，具有高亲和力。PI是一种核酸染料，可用于区分细胞的凋亡状态。通过将Annexin V标记为AF 488绿色荧光染料，以及PI标记为红色荧光染料，可以同时检测细胞的早期凋亡和晚期凋亡。

2. 使用方法：

使用Annexin V-AF 488/PI双染细胞凋亡检测试剂盒非常简单。首先，将待检测的细胞培养物收集并洗涤。然后，将细胞悬浮液与染料混合，并在适当的条件下孵育一段时间。最后，通过流式细胞术或荧光显微镜等技术，检测和分析细胞中的荧光信号。

3. 应用领域：

Annexin V-AF 488/PI双染细胞凋亡检测试剂盒在细胞凋亡研究中具有广泛的应用。以下是一些常见的应用领域：

药物筛选和毒性评估：该测试剂盒可用于评估药物和毒性物质对细胞的凋亡诱导能力，从而为药物筛选和毒性评估提供可靠的指标。

细胞生命周期研究：通过检测细胞中不同阶段的凋亡情况，可以揭示细胞生命周期的调控机制和异常情况。

疾病研究：细胞凋亡在多种疾病的发生和发展中起着重要作用。该测试剂盒可用于研究癌症、神经退行性疾病、心血管疾病等与细胞凋亡相关的疾病。

细胞治疗评估：对于细胞治疗的研究和临床应用，该测试剂盒可用于评估细胞治疗的效果和细胞存活情况。

艾美捷Annexin V-AF 488/PI双染细胞凋亡检测试剂盒基本参数：

目录号：D-AKE0002

规格：50T

储存：在-20°C下储存12个月，避光

Annexin V-AF 488/PI双染细胞凋亡检测试剂盒是一种高灵敏度的细胞凋亡检测工具。其双染技术能够同时检测细胞的早期凋亡和晚期凋亡，为细胞凋亡研究提供了可靠的手段。通过使用该测试剂盒，研究人员可以深入了解细胞凋亡的机制、调控和相关疾病，推动细胞生物学和生物医学领域的进展。

该试剂仅用于科学研究领域，不适用于临床诊断或其他用途。

https://www.amyjet.com/products/D-AKE0002-50T.shtml

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Biogradetech超敏型细胞增殖检测试剂(CCK-8) FAQ

超灵敏细胞计数试剂盒-8（CCK-8）通过利用高度水溶性的四唑盐-WST-8进行非常方便的测定。WST-8被细胞中的脱氢酶还原，产生橙色产物（甲赞），可溶解在组织培养基中。CCK-8是非放射性的，允许在细胞增殖和细胞毒性测定中进行灵敏的比色测定，以测定活细胞的数量。细胞中甲酰胺的含量与活细胞的数量成正比，可用于检测细胞增殖和细胞毒性。使用CCK-8的检测灵敏度高于使用其他四氮唑盐如MTT、XTT、MTS或WST-1的检测灵敏度。

艾美捷超敏型细胞增殖检测试剂(CCK-8)基本参数：

目录号：D-AKE106-U

规格：1000T / 10000T

储存：在4°C下储存12个月，在-20°C下至少储存24个月，避光

超敏型细胞增殖检测试剂(CCK-8)供应材料和储存条件：

试剂准备：

即用CCK-8溶液：即用，无需预混合成分。

程序分析：

注意：在实际实验之前，做一个预实验，以确定合适的细胞数量和培养时间。如果OD值过高，可以适当减少细胞数量，可以缩短添加CCK-8的孵育时间，或者可以减少CCK-8负载量

一、绘制标准曲线

1.用细胞仪计数制备的细胞悬浮液中的细胞数量，然后接种细胞。

2.用培养基稀释细胞，按顺序形成细胞浓度梯度，通常为5-7个细胞浓度梯度、每个浓度梯度4-6个多孔。

3.接种后，将粘附细胞或悬浮细胞孵育0.5-4h，每100μL培养基加入10μL CCK-8试剂孵育一定时间，然后测量OD450值。以单元格数为x轴，OD450值为y轴，绘制标准曲线。根据该标准曲线，可以确定未知样品中细胞的数量。使用该标准曲线的前提条件是测试条件完全相同

二、细胞活性测定方案

1.在96孔板中接种细胞悬浮液（100μL/孔）。将培养板放入湿润的二氧化碳培养箱中进行预培养。

2.在板的每个孔中加入10μL CCK-8溶液。小心不要将气泡引入井内，因为它们会干扰外径读数。

3.将培养板在培养箱中培养0.5-4小时。培养时间取决于细胞类型和细胞密度等实验条件。

4.使用微孔板读数器测量450 nm处的吸光度。

三、细胞增殖和细胞毒性测定方案

1.在96孔板中分配100μL细胞悬浮液（5000个细胞/孔）。预孵育用于24小时除湿二氧化碳培养箱的平板。

2.将1-10μL不同浓度的待测物质加入平板中。

3.将培养板在培养箱中培养适当的时间长度（例如，6、12、24或48小时）。

4.在板的每个孔中加入10μL CCK-8溶液。小心不要将气泡引入井内，因为它们会干扰外径读数。

5.将培养板在培养箱中培养0.5-4小时。培养时间取决于细胞类型和细胞密度等实验条件。

6.使用微孔板读数器测量450 nm处的吸光度

超敏型细胞增殖检测试剂(CCK-8)FAQ：

1.本品敏感，OD值偶尔偏高。我们应该如何处理？

从三个方面进行调整：（1）使用不同数量的细胞进行检测，制作标准曲线，确定合适的细胞数量；（2） 缩短CCK-8的孵育时间；（3） 降低CCK-8的负载量，将CCK8稀释到合适的浓度以供使用。

2.如何确定该产品的检测范围？

建议制作不同细胞数的标准曲线，并根据稳定的线性趋势确定特定细胞的检测间隔。

3.如何设置细胞毒性测试？

设置方法有两种：（1）将1-10μL不同浓度的待测物质加入100μL的细胞悬浮液中，孵育适当的时间，然后加入系统中10%的溶液。（2） 在药物暴露于细胞一段时间后，使用10%CCK-8检测细胞增殖。

该试剂仅用于科学研究领域，不适用于临床诊断或其他用途。

https://www.amyjet.com/products/D-AKE106-U-1000T.shtml

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超敏型细胞增殖检测试剂(CCK-8)：快速、灵敏的细胞增殖评估工具

细胞增殖是细胞生物学和生物医学研究中的一个重要参数，对于评估细胞的生长状态、药物筛选和细胞治疗效果具有关键意义。超敏型细胞增殖检测试剂CCK-8（Cell Counting Kit-8）是一种常用的工具，可快速、灵敏地评估细胞的增殖能力。本文将介绍CCK-8的原理、使用方法以及其在细胞增殖研究中的应用。

1. 测试剂原理：

CCK-8基于一种水溶性的四氯化新香豆素（WST-8）染料。在细胞增殖过程中，细胞内的代谢活性会还原WST-8为可溶性的橙色产物，产生可测量的吸光度变化。吸光度的变化与细胞数量成正比，从而可以评估细胞的增殖状态。

2. 使用方法：

使用CCK-8测试剂非常简单。首先，将待检测的细胞均匀地分布在培养皿中。然后，将CCK-8试剂加入培养基中，并在适当的条件下孵育一段时间。最后，通过分光光度计或酶标仪等设备，测量培养基中的吸光度变化，即可评估细胞的增殖能力。

3. 应用领域：

CCK-8测试剂在细胞增殖研究中具有广泛的应用。以下是一些常见的应用领域：

药物筛选：CCK-8可以用于评估药物对细胞增殖的影响，从而帮助筛选具有抑制或促进细胞增殖作用的潜在药物候选物。

细胞毒性评估：通过测量细胞的增殖能力，可以评估毒性物质对细胞的损伤程度，从而帮助毒性评估和安全性研究。

细胞生命周期研究：CCK-8可以用于监测细胞在不同细胞周期阶段的增殖能力，揭示细胞周期的调控机制和异常情况。

细胞治疗评估：对于细胞治疗的研究和临床应用，CCK-8可以用于评估移植细胞的增殖能力和治疗效果。

艾美捷超敏型细胞增殖检测试剂(CCK-8)基本参数：

目录号：D-AKE106-U

规格：1000T / 10000T

储存：在4°C下储存12个月，在-20°C下至少储存24个月，避光

超敏型细胞增殖检测试剂CCK-8是一种快速、灵敏的细胞增殖评估工具。其基于WST-8染料的原理使其能够准确地评估细胞的增殖能力。通过使用CCK-8测试剂，研究人员可以方便地评估细胞的增殖状态，为细胞生物学、药物筛选和细胞治疗研究提供有力支持。

该试剂仅用于科学研究领域，不适用于临床诊断或其他用途。

https://www.amyjet.com/products/D-AKE106-U-1000T.shtml

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Biogradetech EdU法细胞增殖成像分析试剂盒（绿色荧光）试剂准备

细胞增殖的检测对于评估细胞健康、确定基因毒性或评估抗癌药物至关重要。到目前为止，直接测量DNA合成是最准确的方法，通常通过将核苷类似物如[3H]胸苷或5-溴-2'-脱氧尿苷掺入细胞复制来进行，然后分别通过放射自显影或用抗BrdU抗体检测或观察。

EdUCellProliferation试剂盒，用于成像（绿色荧光）是BrdU测定的一种新的替代品。EdU（5-乙炔基-2´-脱氧尿苷）是胸苷的核苷类似物，在活性DNA合成过程中被掺入DNA。与BrdU测定相比，EdU点击分析不是基于抗体的，因此不需要DNA变性（通常使用HCl或加热或用DNase消化）来检测结合的核苷。检测基于点击反应，这是叠氮化物和萘醌之间铜催化的共价反应，在30分钟内完成。

艾美捷EdU法细胞增殖成像分析试剂盒（绿色荧光）基本参数：

目录号：D-AKK2030

规格：100T

储存：在-20°C下储存12个月，避光

EdU法细胞增殖成像分析试剂盒（绿色荧光）供应材料和储存条件：

EdU法细胞增殖成像分析试剂盒（绿色荧光）试剂准备：

EdU（10 mM）：随附随用。使用前将其平衡至室温。储存温度为-20°C。

BSA洗涤液（1×）：加入PBS将BSA洗涤溶液（5×）稀释成1×工作溶液（最终浓度为3%BSA/PBS），混合均匀。等分后，溶液可在-20°C下稳定储存6个月。

AbFluor 488叠氮化物：供应即用。使用前将其平衡至室温。储存温度为-20°C，避光。

10×反应缓冲液：供应时即可使用。使用前将其平衡至室温。储存在20°C的温度下。铜试剂：随附即用。使用前将其平衡至室温。储存温度为4℃。

还原剂（10x）的制备：向还原剂中加入去离子水，制备最终浓度为100 mg/mL的还原剂（10 x），并搅拌至化合物完全溶解。等分后，溶液可在-20°C下储存6个月。如果溶液变为棕色，则表示组件已降级，不建议继续使用。

Hoechst 33342（1x）：使用前用PBS以1:1000的比例稀释1×Hoechst 333 42工作溶液。保存温度为20℃，等分后避光。

羟基脲：DNA合成抑制剂。随附随用。使用前将其平衡至室温。储存温度为4°C，等分后避光。

该试剂仅用于科学研究领域，不适用于临床诊断或其他用途。

https://www.amyjet.com/products/D-AKK2030-100T.shtml

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EdU法细胞增殖成像分析试剂盒（绿色荧光）程序分析

EdUCellProliferation试剂盒，用于成像（绿色荧光）是BrdU测定的一种新的替代品。EdU（5-乙炔基-2´-脱氧尿苷）是胸苷的核苷类似物，在活性DNA合成过程中被掺入DNA。与BrdU测定相比，EdU点击分析不是基于抗体的，因此不需要DNA变性（通常使用HCl或加热或用DNase消化）来检测结合的核苷。检测基于点击反应，这是叠氮化物和萘醌之间铜催化的共价反应，在30分钟内完成。

艾美捷EdU法细胞增殖成像分析试剂盒（绿色荧光）基本参数：

目录号：D-AKK2030

规格：100T

储存：在-20°C下储存12个月，避光

EdU法细胞增殖成像分析试剂盒（绿色荧光）程序分析：

A.细胞使用EdU标记

在这个实验中，以96孔板中的贴壁细胞为例。悬浮细胞可以在孵育EdU后涂抹（将适量的细胞加到玻片上，用酒精灯烘干）。涂抹后，染色步骤与贴壁细胞相同。

1. 在孔板中放置适当的玻片，在孔中种植适量的细胞，并在处理细胞后使其达到所需的密度。

2. 可选步骤：设置阴性对照。在EdU孵育之前加入DNA合成抑制剂羟基脲，按1:1000的比例直接加入阴性对照孔中，混匀并孵育0.5小时。

3. 使用细胞培养基中的10mM EdU溶液制备2倍浓度的EdU工作溶液（20μM）。推荐的最终EdU浓度为10μM，通过将10mM EdU与细胞培养基按1:500稀释可以得到2倍浓度的EdU工作溶液（20μM）。

4. 预热至37°C的2倍浓度的EdU溶液与含有待测细胞的培养基加入相同体积，使96孔板中EdU的最终浓度为1倍。

注意：推荐不要更换所有培养基，因为这会影响细胞增殖速率；推荐初始EdU浓度为10μM。

5. 在最适宜的条件下孵育细胞2小时（根据细胞扩展的时间，一般肿瘤细胞的孵育时间为2小时）。

6. 孵育结束后，移除培养基，向每个孔中加入0.1mL固定液（含有3.7%甲醛的PBS溶液），在室温下孵育15分钟。

7. 去除固定液，用0.1mL BSA工作溶液（1倍浓度）洗涤每个孔中的细胞，孵育5分钟。重复3次。

8. 去除洗涤液，向每个孔中加入0.1mL穿透剂（含有0.5% Triton X-100的PBS溶液），在室温下孵育15分钟。

9. 去除穿透剂，用0.1mL BSA工作溶液（1倍浓度）洗涤每个孔中的细胞，孵育5分钟。重复2次。

10. 进入C步骤。

B.在活体动物中标记EdU

这个实验以6周龄小鼠为例，其他动物中EdU的标记，请参考相关文献。

1. 对于小鼠，根据10-200 mg/kg的剂量，将EdU与PBS混合制成一定浓度，可以通过腹腔注射、局部注射到特定组织或器官，或者加入饮用水中。具体剂量与使用的动物的类型、体重和使用方式有关，可以参考相关文献，因此建议首次使用时探索EdU的浓度，或直接使用50 mg/kg的浓度进行测试。如果之前使用过BrdU进行实验，可以参考BrdU的最终浓度作为EdU的最终浓度。EdU需要单独购买。

2. 可选步骤：设置阴性对照。在EdU处理期间加入DNA合成抑制剂羟基脲，与EdU溶液按照1000 mg/kg的浓度配制。羟基脲需要单独购买。

3. 经过24小时或根据具体实验确定的适当时间后，迅速杀死小鼠，取出必要的组织，并根据常规步骤制作冰冻切片或石蜡切片。也可以根据相关文献调整EdU标记的时间。

4. 对于冰冻切片：

（1）加入适量的固定溶液（含3.7%甲醛的PBS），室温孵育15分钟。

（2）取出固定剂，用0.1mL BSA工作溶液（1x）洗涤每个孔中的细胞5分钟。重复3次。

（3）取出洗涤剂，向每个孔中加入0.1mL渗透剂（含有0.5%Triton X-100的PBS），并在室温下孵育15分钟。

（4）去除渗透剂，并用0.1mL BSA工作溶液（1x）洗涤每个孔中的细胞5分钟。重复2次。

（5）抗原修复（可选）：如果同时需要对靶蛋白进行免疫荧光染色，并且需要抗原修复，可以使用合适的抗原修复液或自制的合适抗原修复液进行抗原修复。

（6）转到步骤C。

5.对于石蜡切片：

（1）脱蜡：在二甲苯中脱蜡5-10分钟，然后换成新鲜二甲苯，然后脱蜡5-10分钟。无水乙醇和无水乙醇分别脱蜡5分钟和3分钟。95%乙醇3分钟。85%乙醇3分钟.75%乙醇3分钟50%乙醇3分钟.PBS 5分钟。

（2）抗原修复（可选）：如果同时需要对靶蛋白进行免疫组织化学染色，并且需要抗原修复，可以使用合适的抗原修复液或自制合适的抗原修补液进行抗原修复。

注意：如果使用蛋白酶K或胰蛋白酶进行抗原修复，必须反复清洗，否则残留的酶会严重干扰后续的标记反应。

（3）转到步骤C。

C.EdU检测

注：在该步骤中，每个孔使用100μL反应混合物。对于其他孔板或片，可以根据实际情况调整反应混合物的体积，但必须按比例添加反应组分。

1.根据下表制备Click-iT反应混合物。

注意：按照表中列出的顺序添加配料是很重要的；否则，反应不会顺利进行。在制备后15分钟内使用Click-iT反应混合物。

2.取出溶液，向每个样品中加入100μL Click-iT反应混合物，并在室温下孵育细胞30分钟，避光。

3.取出反应混合物，用0.1mL BSA洗涤溶液（1x）洗涤孔中的细胞5分钟，然后取出洗涤溶液。

4.可选步骤：核染色（1xHoechst 33342）或抗体标记。

重要提示：孵化过程中应避免光线照射。如果您不需要其他染色，请在孵化后直接进行图像和分析。

5.用荧光显微镜（Ex/Em=501/525nm）分析样品中标记的DNA，用Ex/Em=360/460nm检测细胞核。

该试剂仅用于科学研究领域，不适用于临床诊断或其他用途。

https://www.amyjet.com/products/D-AKK2030-100T.shtml

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凝血诊断研究丨高质量凝血因子VIII抗体文献参考

凝血因子VIII（Factor VIII）是一种重要的血液凝血蛋白，也被称为抗血友病因子。它在血液凝块形成过程中发挥关键作用。凝血因子VIII由基因F8编码，主要在肝脏和内皮细胞中合成。它是一个复合蛋白，由A亚单位和B亚单位组成。A亚单位是重链，负责与其他凝血因子相互作用，促进凝血反应。B亚单位是轻链，与凝血因子IX结合，形成凝血复合物。凝血因子VIII的功能是在凝血级联反应中促进凝血因子X的激活，从而引发血液凝块形成。

缺乏或功能异常的凝血因子VIII会导致血友病A，这是一种常见的遗传性凝血障碍疾病。治疗血友病A的常见方法之一是通过补充凝血因子VIII来恢复凝血功能。

艾美捷prolytix(haemtech)专注于凝血诊断领域，可提供高质量的凝血因子VIII抗体：

货号 PAHFVIII-S

名称 Sheep Anti-Human Factor VIII  羊抗人因子VIII抗体

消光系数 E1% 1cm,280nm=14.0

分子量 150000

特性 该IgG的抑制剂活性是通过Bethesda抑制剂测定法进行测量的，其活性为2,500-3,000 B.U./mg IgG

特异性 人因VIII;免疫扩散(+)，ELISA(+)，与血管性血友病因子无反应性

缓冲液 50% Glycerol/H2O (v/v)

保存条件 -20℃

凝血因子VIII抗体文献引用：

为了研究ALN-AT3在带有因子VIII抗体的血友病A大动物模型中的药理活性，给非人类灵长类动物（NHPs）注射了高剂量的特异性因子VIII抗体，以暂时诱导严重的血友病A。

Haematologic Technologies是一家凝血诊断产品生产商, 主要研究参与凝血调节以及骨代谢的蛋白, 可提供高质量血浆来源的凝血蛋白，以及单克隆抗体和多克隆抗体。此外，还提供凝血因子缺乏血浆和用于临床研究的定制采血管。

https://www.amyjet.com/products/PAHFVIII-S.shtml