来宝网 2023/9/25点击589次
T7 RNA聚合酶适用于合成标记/未标记的高特异性 RNA 探针
T7 RNA聚合酶（T7 RNA Polymerase）是一种 RNA聚合酶，分子量约99kDa。专门催化5'→3'方向的 RNA形成过程。T7RNA聚合酶具有高度启动子专一性，且只会转录T7 噬菌体中位于T7启动子下游的的DNA或DNA复制品。
此酵素在合成RNA的过程中，需要DNA模板与 镁离子（Mg）作为 辅因子。 牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）及 精胺（spermidine）对此酵素具促进效果。与细菌的RNA聚合酶的差异之一，在于T7RNA聚合酶不受 抗生素 利福平（rifampicin）抑制。
艾美捷T7 RNA聚合酶（#C-BSM0124）适用范围:
1. 合成单链 RNA，包括 mRNA，siRNA，gRNA 等各类 RNA 的前体。
2. 合成标记或未标记的高特异性 RNA 探针。
3. 利用帽子类似物合成加帽的 mRNA。
T7 RNA聚合酶可分为：常规型和耐热型。常规型T7 RNA聚合酶可在37℃对模板进行高效体外转录，而耐热型T7 RNA聚合酶可在更高的温度下（37-52℃）进行体外转录。
T7 RNA聚合酶使用方法：
推荐的反应条件：
在37°C下培养1小时。如果转录物长度小于300nt，反应时间可以延长至2-16小时。反应结束后，在上述20μl反应混合物中加入1μl双脱氧核糖核酸酶，并在37°C下孵育15分钟以移动DNA模板
备注：
1.模板DNA的纯度对于体外转录至关重要。在质粒DNA提取过程中引入的RNase A残基会显著影响转录RNA的质量。建议使用OD260/280比例为1.8-2.0的高纯度RNase游离质粒。
2.模板DNA可以通过线性化的环状质粒或PCR获得。模板DNA的上游区域应包含T7启动子序列，下游区域应具有钝端或编码链上的5'突出部分。
3.为了您的安全和健康，请在进行实验时穿戴实验服、一次性手套和口罩。
https://www.amyjet.com/products/C-BSM0124-5000U.shtml
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IHCAb SOX9 (BGT-SOX9) 鼠单抗，助力抗原修复
SRY-box 9（SOX9）智人该基因编码的蛋白质与HMG-box类DNA结合蛋白的其他成员一起识别CCTTGA序列。它在软骨细胞分化过程中发挥作用，并抵抗类固醇生成因子1，调节抗米勒激素（AMH）基因的转录。缺陷会导致骨骼畸形综合征和campomelic发育不良，通常伴有性别逆转。
Cat #: B-IMW6546
Size: 100 μL
Storage: Store at -20°C. Avoid repeated freeze / thaw cycles.
IHCAb SOX9 (BGT-SOX9) 鼠单抗该抗体检测人S0X9的内源性水平。热诱导表位修复法（HIER）是一种较理想的抗原修复方法。
IHCAb SOX9 (BGT-SOX9) 鼠单抗：
应用/稀释：IHC-p 1:100-500，WB 1:500-1000，EUISA 1:5000-20000
同种型/来源：小鼠、单克隆/lgG2b、Kappa
特异性：该抗体可检测人SOX9的内源性水平。热诱导表位回收（HIER）柠檬酸盐
在石蜡切片中，强烈推荐pH6.0的缓冲液作为抗原修复方法
亚细胞定位：细胞核
表情：眼睛，PNS，睾丸。
配方：PBS中的液体，含有50%甘油、0.5%BSA和0.02%叠氮化钠。
储存：储存温度为-15°C至-25°C
IHCAb SOX9 (BGT-SOX9) 鼠单抗示例展示：
图1：人结肠癌组织用抗SOX9抗体染色
图2：人胃腺癌组织用抗SOX9抗体染色
https://www.amyjet.com/products/B-IMW6546-100uL.shtml
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EBFP，鼠单抗（8B5），好用的蛋白质“标签”
增强型蓝色荧光蛋白（EBFP）发出强烈的蓝色荧光。EBFP可用作蛋白质“标签”来研究蛋白质的亚细胞定位和/或其在刺激时的易位，或用作转染瞬时和稳定表达系统的标记。
艾美捷EBFP，鼠单抗（8B5）：
Cat #: D-AKE2290
Size: 50 μL / 200 μL
Storage: Store at -20°C. Avoid repeated freeze / thaw cycles
EBFP，鼠单抗（8B5）：
应用：WB
建议的起始稀释度如下：WB（1:5000）。
同种型：小鼠lgG
反应性：所有预期物种
配方：液体
浓度：1mg/mL
储存：在-20°C下储存。避免重复冻融循环。
储存缓冲液：PBS中的液体，pH 7.4，含有0.02%叠氮化钠作为防腐剂和50%甘油。
储存说明：自装运之日起，在-20°C温度下稳定一年。为了zui大限度地回收产品，在解冻后和取下盖子之前对原始小瓶进行离心。避免重复冷冻和解冻。
EBFP，鼠单抗（8B5）示例展示：
图1:5000（laneA）稀释的EBFP融合蛋白与抗EBFP单克隆抗体（8B5）的蛋白质印迹分析
仅供研究使用，不用于人类或临床诊断
https://www.amyjet.com/products/D-AKE2290-200uL.shtml
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Nano-Tag9，鼠单抗（11T3）：纯化和检测Nano-tag蛋白
Nano-tag是一种新型的链霉亲和素结合肽，用于纯化和检测Nano-tag蛋白。该肽对链霉亲和素具有纳摩尔亲和力，因此被称为纳米标签。纳米标签有两种类型，Nano-tag 15（MDVEAWLGARVPLVET）和Nano-tag 9（MDVEAWLGAR），其分别以4 nM和17 nM的解离常数结合链霉亲和素。
Cat #: D-AKE2300
Size: 50 μL / 200 μL
Storage: Store at -20°C. Avoid repeated freeze / thaw cycles.
Nano-Tag9，鼠单抗（11T3）：
应用：WB
建议的起始稀释度如下：WB（1:2000-1:5000）。
同种型：小鼠lgG
反应性：所有预期物种
配方：液体
浓度：1mg/mL
储存：在-20°C下储存。避免重复冻融循环。
储存缓冲液：PBS中的液体，pH 7.4，含有0.02%叠氮化钠作为防腐剂和50%甘油。
储存说明：自装运之日起，在-20°C温度下稳定一年。为了最大限度地回收产品，在解冻后和取下盖子之前对原始小瓶进行离心。避免重复冷冻和解冻。
Nano-Tag9，鼠单抗（11T3）示例展示：
图：分别以1:50000（泳道A）和1:10000（泳道B）稀释液用Nano-Tag9小鼠单克隆抗体（11T3）对重组Nano-Tag9蛋白的蛋白质印迹分析
仅供研究使用，不用于人类或临床诊断
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异硫氰酸荧光素标记的抗体方案
FITC（荧光素异硫氰酸酯）可以与各种抗体蛋白结合，而不会失去其对关节蛋白的特异性。一旦结合，抗体在碱性溶液中表现出强烈的黄绿色荧光。相应抗原的定性、定位或定量检测可以通过荧光显微镜观察或流式细胞术分析进行。它被用于医学、农业和兽医科学等各个领域，用于快速诊断由细菌、病毒、寄生虫和其他病原体引起的疾病。
艾美捷异硫氰酸荧光素：
Cat #: B-CHM100
规格：100 mg
储存：储存温度为-20°C，避光保存。
配方：C21H11NO5S
兆瓦：389.38
纯度：≥95%（HPLC）
光谱特性：Ex/Em=490/525 nm
外观：黄色粉末
运输和储存：
储存条件：储存温度为20°C，避光。
稳定性：在适当的储存条件下稳定至少12个月。
异硫氰酸荧光素标记的抗体方案：
（1） 将待交联的蛋白质（浓度：1mg/mL）在交联反应缓冲液中在4°C下透析三次，将pH调节至9.0。交联缓冲液的制备：溶解7.56 g NaHCO3，1.06 g Na₂CO3和7.36g NaCl在水中的溶液稀释至1L的最终体积。
（2） 将FITC以1 mg/mL的浓度溶解在二甲基亚砜中。为每次交联反应准备新鲜的FITC溶液，并避免暴露在光下。
（3） 将FITC缓慢添加到抗体溶液中，比例为P：F（蛋白质：FITC）=1 mg：150μg。轻轻混合溶液，同时加入FITC，以确保与抗体均匀混合。让反应在黑暗中在4℃下进行8小时。
（4） 添加5 mol/L NH₄Cl最终浓度为50 mmol/L，在4°C下停止反应2小时。
（5） 将缀合物相对于PBS溶液透析至少四次，直到透析液变得清澈为止。
（6） 交联材料的特性：
蛋白质浓度（mg/mL）=[A280-0.31×A₄gs]/1.4
F/P比：3.1×A₄gs/[A280-0.31×A₄gs]。该值应介于2.5～6.5之间。
（7） 将FITC蛋白偶联物储存在pH 7.4的PBS中，补充0.1%的NaN3和1%的BSA，在4°C的黑暗中储存。
https://www.amyjet.com/products/B-CHM100-100mg.shtml
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APC-Cy7串联染料使用说明&注意事项
异藻蓝蛋白（APC）是从螺旋藻中分离得到的一种藻胆蛋白。与其他藻胆蛋白一样，APC表现出荧光，并具有高消光系数和量子产率。它可以使用传统的蛋白质交联技术与抗体和其他蛋白质偶联，而不会改变其光谱特性。其在633nm和647nm处的强吸收使其及其串联物成为流式细胞术应用中与红色激光结合使用的首选荧光染料之一。APC-AF700和APC Alexa Fluor 700串联染料具有相同的结构。它们的主要吸收峰在651nm处，发射峰在710nm附近。APC-AF750串联是APC-Cy7的一个极好的替代品，提供更高的FRET效率和信号。它的主要吸收峰在651nm，发射峰在780nm附近
艾美捷APC-Cy7串联染料：
Cat #：B-CHM310/B-CHM316/B-CHM317
规格：1 mg
储存：储存温度为4°C，避光。
形式：固体
激光器：Laser633
储存条件：储存温度为4°C，避光保存，不得冷冻。
稳定性：在适当的储存条件下稳定至少6个月
APC-Cy7串联染料使用说明：
1.抗体修饰
1） 将抗体修饰试剂（DTT/TCEP）溶于ddH2O中，制备2 mg/ml抗体修饰缓冲液。
2） 使用PBS缓冲液将待标记抗体的浓度（纯度>90%）调节至约5-10 mg/ml。向每毫克抗体中加入10μl抗体修饰缓冲液，轻轻混合。在室温下搅拌混合物60-90分钟。
3） 反应完成后，将混合物转移到离心过滤管中，并加入MES缓冲液。离心过滤器多次以除去过量的抗体修饰缓冲液。过滤器中收集的溶液是经修饰的抗体，应将其调节至1-5mg/ml的浓度。
2.APC串联激活
1） 将APC串联溶于浓度为5-10mg/ml的0.1M PBS（pH 7.4，5mM EDTA）中。
2） 将SMCC溶解在无水二甲基亚砜中，制备10mg/ml的储备溶液。
3） 每mg APC串联染料添加Sul的SMCC（n（APC串联）：n（SMCC）=1:80）。用铝箔密封反应混合物，并在室温下旋转1小时，以使APC串联上的氨基与琥珀酰亚胺酯反应，形成衍生的APC串联。
4） 反应完成后，将反应混合物转移到超滤离心管中，并在4℃、12000g下离心5分钟以除去滤液。加入500μl MES缓冲液，混合并离心。重复此步骤5次。
5） 收集活化的APC串联溶液。
3.活化的APC串联与抗体的结合
1） 使用MES缓冲液将活化APC串联的浓度调节至5 mg/ml。为了获得活化APC串联的准确重量，我们建议使用活化APC串联形式测量的消光系数（[APC串联]=0.14999×A651，其中[APC串联]是以mg/ml为单位的浓度，A651是651nm处的吸光度，优选在0.3-0.8的范围内）。
2） 将修饰的抗体与活化的APC串联以1:1.3的质量比混合（每mg修饰的抗体1.3 mg活化的APC串列）。在室温下进行反应，避光2小时。
3） 将NEM溶解在无水二甲基亚砜（DMSO）中，制备12.5 mg/ml溶液（0.1 M）。在步骤2）的反应混合物中，每毫克抗体加入5μl-NEM溶液，以阻断任何剩余的活性基团。
4） 将步骤3）中的溶液转移到离心过滤管中，并通过重复离心去除阻塞缓冲液。
5） 将标记的抗体分成等分，添加适当的防腐剂，并在-20°C下储存以备将来使用。
APC-Cy7:
注意事项：
1.激活的APC串联应在黑暗中冷藏。在贴标签的过程中，应尽可能避免光线照射。
2.封闭试剂和修饰试剂应新鲜配制，并立即使用。它们不应该存放很长时间。
3.标记的抗体应具有高特异性和不低于90%的纯度。单克隆抗体是首选，溶液中不应含有游离胺。最好使用PBS。在标记之前，抗体应该耗尽NaN3和BSA。透析、浓缩和浓度测量等操作可能会导致抗体损失。因此，应根据具体情况确定用于标记的抗体的适当量。
4.由于修饰抗体中引入的基团对再氧化的易感性，修饰后的抗体应尽快与活化的APC串联偶联。
https://www.amyjet.com/products/B-CHM310-1mg.shtml
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RPE-Cy7串联染料丨抗体修饰、PE串联激活方法
PE-Cy5是属于藻胆蛋白缀合物家族的串联染料。在这种类型的串联染料中，激发能可以从PE转移到Cy5，zui大发射波长为Cy5。PE-Cy5与FITC和PE具有zui小的光谱重叠，导致低荧光干扰。因此，它在实验中与FITC和PE联合使用。需要注意的是，PE-Cy5不适合与APC配对，因为它们具有显著的光谱重叠。与PE-Cy5相比，PE-Cy5.5对FITC、PE和APC的荧光干扰最小，使其与这些染料的组合相容。此外，与PE-Cy5相比，PE-Cy5.5表现出更高的荧光强度。PE-Cy7与FITC没有光谱重叠，与APC的重叠zui小，使其能够与FITC、PE和APC结合使用。然而，需要注意的是，PE-Cy7对光漂白高度敏感，并且在实验期间需要严格的光保护环境。
艾美捷RPE-Cy7串联染料：
Cat #：B-CHM311/B-CHM312/B-CHM314/B-CHM315
规格：1 mg/10 mg
储存：储存温度为4°C，避光。
形式：固体
纯度：Amax/A280>5.0
储存条件：储存温度为4°C，避光，不结冰。
稳定性：在适当的储存条件下稳定至少6个月
RPE-Cy7串联染料使用说明：
1.抗体修饰
1） 将抗体修饰试剂（DTT/TCEP）溶于ddH2O中，制备2 mg/ml抗体修饰缓冲液。
2） 使用PBS缓冲液将待标记抗体的浓度（纯度>90%）调节至约5-10 mg/ml。向每毫克抗体中加入10μl抗体修饰缓冲液，轻轻混合。在室温下搅拌混合物60-90分钟。
3） 反应完成后，将混合物转移到离心过滤管中，并加入MES缓冲液。离心过滤器多次以除去过量的抗体修饰缓冲液。过滤器中收集的溶液是经修饰的抗体，应将其调节至1-5mg/ml的浓度。
2.PE串联激活
1） 将PE串联溶于浓度为5-10mg/ml的0.1M PBS（pH 7.4，5mM EDTA）中。
2） 将SMCC溶解在无水二甲基亚砜中，制备10mg/ml的储备溶液。
3） 每mg PE串联染料添加Sul的SMCC（n（PE串联）：n（SMCC）=1:80）。用铝箔密封反应混合物，并在室温下旋转1小时，使PE串联上的氨基与琥珀酰亚胺酯反应，形成衍生的PE串联。
4） 反应完成后，将反应混合物转移到超滤离心管中，并在4°C、12000g下离心5分钟以除去滤液。加入500μul MES缓冲液，混合并离心。重复此步骤5次。
5） 收集活化的PE串联溶液。
3.活化的PE串联与抗体的结合
1） 使用MES缓冲液将活化PE串联的浓度调节至5 mg/ml。为了获得活性PE串联的准确重量，我们建议使用活性PE串联形式测量的消光系数（[PE串联]=0.1245×A565，其中[PE串联]是以mg/ml为单位的浓度，A565是565nm处的吸光度，优选在0.3-0.8的范围内）。
2） 将修饰的抗体与活化的PE串联以1:3的质量比混合（3mg修饰的抗体的活化的PE串列排列）。在室温下避光反应2小时。
3） 将NEM溶解在无水二甲基亚砜（DMSO）中，制备12.5 mg/ml溶液（0.1 M）。在步骤2）的反应混合物中，每毫克抗体加入5μl-NEM溶液，以阻断任何剩余的活性基团。
4） 将步骤3）中的溶液转移到离心过滤管中，并通过重复离心去除阻塞缓冲液。
5） 将标记的抗体分成等分，添加适当的防腐剂，并在-20°C下储存以备将来使用。
注意事项：
1.活性PE串列应在黑暗中冷藏。在贴标签的过程中，应尽可能避免光线照射。
2.封闭试剂和修饰试剂应新鲜配制，并立即使用。它们不应该存放很长时间。
3.标记的抗体应具有高特异性和不低于90%的纯度。单克隆抗体是首选，溶液中不应含有游离胺。最好使用PBS。在标记之前，抗体应该耗尽NaN3和BSA。透析、浓缩和浓度测量等操作可能会导致抗体损失。因此，应根据具体情况确定用于标记的抗体的适当量。
4.由于修饰抗体中引入的基团对再氧化的敏感性，修饰后的抗体应尽快与活化的PE串联偶联。
PE-Cy7:
https://www.amyjet.com/products/B-CHM311-1mg.shtml
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预活化，APC-AF750：更高的FRET效率和信号
异藻蓝蛋白（APC）是从螺旋藻中分离得到的一种藻胆蛋白。与其他藻胆蛋白一样，APC表现出荧光，并具有高消光系数和量子产率。它可以使用传统的蛋白质交联技术与抗体和其他蛋白质偶联，而不会改变其光谱特性。其在633nm和647nm处的强吸收使其及其串联物成为流式细胞术应用中与红色激光结合使用的首选荧光染料之一。APC-AF700和APC Alexa Fluor 700串联染料具有相同的结构。它们的主要吸收峰在651nm处，发射峰在710nm附近。APC-AF750串联是APC-Cy7的一个极好的替代品，提供更高的FRET效率和信号。它的主要吸收峰在651nm，发射峰在780nm附近
艾美捷预活化，APC-AF750：
Cat #: 目录号：B-CHM310/B-CHM316/B-CHM317
规格：1 mg
储存：储存温度为4°C，避光。
形式：解决方案激光：Laser633
储存条件：储存温度为4°C，避光保存，不得冷冻。
稳定性：在适当的储存条件下稳定至少6个月。
预活化，APC-AF750使用说明：
1.抗体修饰
1） 将抗体修饰试剂（DTT/TCEP）溶于ddH20中，制备2mg/ml抗体修饰缓冲液。
2） 使用PBS缓冲液将待标记抗体的浓度（纯度>90%）调节至约5-10 mg/ml。向每毫克抗体中加入10μl抗体修饰缓冲液，轻轻混合。在室温下搅拌混合物60-90分钟。
3） 反应完成后，将混合物转移到离心过滤管中，并加入MES缓冲液。离心过滤器多次以除去过量的抗体修饰缓冲液。过滤器中收集的溶液是经修饰的抗体，应将其调节至1-5mg/ml的浓度。
2.APC串联激活
1） 将APC串联溶于浓度为5-10mg/ml的0.1M PBS（pH 7.4，5mM EDTA）中。
2） 将SMCC溶解在无水二甲基亚砜中，制备10mg/ml的储备溶液。
3） 每mg APC串联染料添加5ul的SMCC（n（APC串联）：n（SMCC）=1:80）。用铝箔密封反应混合物，并在室温下旋转1小时，以使APC串联上的氨基与琥珀酰亚胺酯反应，形成衍生的APC串联。
4） 反应完成后，将反应混合物转移到超滤离心管中，并在4℃、12000g下离心5分钟以除去滤液。加入500μl MES缓冲液，混合并离心。重复此步骤5次。
5） 收集活化的APC串联溶液。
3.活化的APC串联与抗体的结合
1） 使用MES缓冲液将活化APC串联的浓度调节至5 mg/ml。为了获得活化APC串联的准确重量，我们建议使用活化APC串联形式测量的消光系数（[APC串联]=0.14999×A651，其中[APC串联]是以mg/ml为单位的浓度，A651是651nm处的吸光度，优选在0.3-0.8的范围内）。
2） 将修饰的抗体与活化的APC串联以1:1.3的质量比混合（每mg修饰的抗体1.3 mg活化的APC串列）。在室温下进行反应，避光2小时。
3） 将NEM溶解在无水二甲基亚砜（DMSO）中，制备12.5 mg/ml溶液（0.1 M）。每毫克抗体向步骤2）的反应混合物中加入5μl的-NEM溶液，以阻断任何剩余的活性基团。
4） 将步骤3）中的溶液转移到离心过滤管中，并通过重复离心去除阻塞缓冲液。
5） 将标记的抗体分成等分，添加适当的防腐剂，并在-20°C下储存以备将来使用。
注意事项：
1.激活的APC串联应在黑暗中冷藏。在贴标签的过程中，应尽可能避免光线照射。
2.封闭试剂和修饰试剂应新鲜配制，并立即使用。它们不应该存放很长时间。
3.标记的抗体应具有高特异性和不低于90%的纯度。单克隆抗体是首选，溶液中不应含有游离胺。最好使用PBS。在标记之前，抗体应该耗尽NaN3和BSA。透析、浓缩和浓度测量等操作可能会导致抗体损失。因此，应根据具体情况确定用于标记的抗体的适当量。
4.由于修饰抗体中引入的基团对再氧化的易感性，修饰后的抗体应尽快与活化的APC串联偶联。
APC-AF750:
https://www.amyjet.com/products/B-CHM317-1mg.shtml
