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A-MGL24高浓度，基质胶（体内实验，PDX/CDX 异种移植）

Biogradetech货号A-MGL24高浓度的基质胶是一种连续的特殊细胞外基质薄膜，形成了内皮细胞、上皮细胞、肌肉细胞或神经细胞与其相邻基质之间的界面。基质胶在发育和伤口愈合过程中会被降解和再生。它不仅支持细胞和细胞层，还对组织结构起着重要作用，影响细胞的粘附、迁移、增殖和分化。基质胶能够成为转移性肿瘤细胞侵袭的主要屏障。 Biogradetech货号A-MGL24高浓度的基质胶是从Engelbreth-Holm-Swarm（EHS）肿瘤中纯化得到的可溶性基质胶。此高浓度的基质胶在37°C下形成重组基底膜基质胶。高浓度的基质胶的主要成分包括层粘连蛋白、IV型胶原、粘连素和肝素硫酸酯蛋白聚糖。  

艾美捷高浓度，基质胶（体内实验，PDX/CDX 异种移植）适用范围：

该系列分为标准型高浓度和低生长因子高浓度，其浓度和粘度均高于普通浓度的基质胶，更适合于体内实验（动物模型），如PDX、CDX、体内血管生成测定等。  

高浓度，基质胶（体内实验，PDX/CDX 异种移植）参数：

来源：小鼠肿瘤；

颜色：含酚红的基质胶呈黄粉色，无酚红的基质胶呈半透明淡黄色；

形态：标准型基质胶在4°C下溶解为透明液体；高浓度基质胶在0°C下溶解后为透明液体，长时间放置于4°C后会半凝胶化。

浓度：蛋白质浓度范围为8至26 mg/mL。

内毒素：≤ 4.5 EU/mL

凝胶时间：室温下5-30分钟凝胶，当温度从22°C升至37°C时，凝胶形成速度加快。

包被涂层方法：

打造成功的细胞培养环境，关键在于选择合适的基质胶。其中，基质胶的包被涂层方法对于不同的应用需求有所不同。下面，我们将介绍基质胶的包被涂层步骤，帮助您轻松应对各种细胞培养挑战。 首先，让我们来了解一下基质胶的解冻过程。将Biogradetech货号A-MGL24高浓度的基质胶在2-8°C的冰箱中过夜解冻。由于冰箱温度可能有所不同，因此建议在解冻过程中将基质胶放在冰上保持低温，以防止过早凝胶化。解冻后的基质胶在15°C以上的温度下会迅速凝固，因此在使用时要保持冰上状态，以避免不必要的凝胶形成。 Biogradetech货号A-MGL24高浓度的基质胶有许多应用场景，需要不同的厚度和浓度。例如，用于内皮细胞形成类似毛细血管的结构（管状结构形成实验）、大鼠主动脉组织分化为类似毛细血管的结构（主动脉环形成实验）、上皮器官样结构形成或肿瘤器官样结构形成，需要较厚的凝胶，也就是厚层凝胶法。而一些应用，如原代细胞的传代培养，需要薄层涂层而不是厚凝胶，因此应采用薄层凝胶法。  

厚层凝胶法：

按上述方法解冻基质胶；

缓慢上下移液将基质胶混匀，注意不要引入空气泡；

向细胞培养板表面加入200-300μL/cm2基质胶，平铺均匀，注意避免产生气泡；

将培养板放置在 37 ℃，等待 30 min 形成凝胶即可使用。

薄层包被法：

按上述方法解冻基质胶；

缓慢上下移液将基质胶混匀，注意不要引入空气泡；

根据实验需求使用预冷的培养基稀释。建议将基质胶稀释为1:100以用于原代细胞的扩增。对于您的应用，可能需要经验性地确定zui佳涂层浓度；

加入适量体积的该溶液覆盖整个细胞培养板表面。建议加入300μL/cm2的溶液；

将培养板放置在室温，孵育至少1h；

吸去上清即可使用。不要让涂层表面干燥。

通过以上步骤，您可以根据不同的细胞培养需求，灵活选择适合的基质胶涂层方法。无论是厚凝胶还是薄层涂层，都能为您的细胞研究提供稳定的3D培养支持，赶快尝试基质胶涂层方法，提升您的细胞培养实验效果吧！

https://www.amyjet.com/products/index___A-MGL24__.shtml

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PE [R-藻红蛋白]：荧光强而稳定，灵敏度高

藻红蛋白是从红藻中分离纯化的，具有较强的荧光性、良好的吸光度和较高的量子产率。它在可见光谱区具有很宽的激发和发射范围。通过使用传统的标记方法，它可以很容易地与生物素、抗生物素和各种单克隆抗体结合形成荧光探针，用于抗体荧光标记，如荧光显微镜、荧光免疫分析、双或多色荧光分析、癌症细胞表面抗原检测、流式细胞术荧光测量、，以及诊断和生物工程技术，例如体内成像应用。

艾美捷PE [R-藻红蛋白]：

Cat #: B-CHM303

Size: 1mg / 5mg / 10mg / 50mg / 100mg / 500mg / 1g

Storage: Store at 4°C protected from light

PE [R-藻红蛋白]特性：

形态：冻干粉

分子量和亚基：完整PE的分子量约为240000道尔顿，PE有三种亚基：α（20000道尔顿）、β（20000道顿）和γ（30000道尔顿）。已发现完整PE的分子量为约240000道尔顿。PE的α亚基只含有藻红蛋白（PEB）发色团，而β亚基和γ亚基同时含有PEB和藻红素（PUB）。光谱性质：Ex/Em=450-500nm/575±5nm

纯度：Amax/A280>5.6

运输和储存

储存条件：4℃避光保存。

稳定性：在适当的储存条件下稳定至少12个月。

PE [R-藻红蛋白]优势：

1.冻干粉，能立即溶解在水中，不含影响产品活化的硫酸铵，使用方便；

2.在宽pH范围内具有宽吸收光谱使得更容易选择合适的激发波长，从而在激发期间产生具有特定荧光发射峰的有效荧光发射；

3.吸光率和荧光量子产率高，荧光强而稳定，灵敏度高；

4.荧光背景小，难以猝灭，荧光保存期长；

5.易于与其他分子交联结合，非特异性吸附较少；

6.从纯天然海洋生物中提取，没有任何毒性或副作用，也没有放射性，使用非常安全。它很容易与抗体、生物素、亲和素和免疫蛋白等物质结合，产生荧光探针。

https://www.amyjet.com/products/B-CHM303-10mg.shtml

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预活化的PE [R-藻红蛋白]使用说明

藻红蛋白是从红藻中分离纯化的，具有较强的荧光性、良好的吸光度和较高的量子产率。它在可见光谱区具有很宽的激发和发射范围。通过使用传统的标记方法，它可以很容易地与生物素、抗生物素和各种单克隆抗体结合形成荧光探针，用于抗体荧光标记，如荧光显微镜、荧光免疫分析、双或多色荧光分析、癌症细胞表面抗原检测、流式细胞术荧光测量、，以及诊断和生物工程技术，例如体内成像应用。活化的藻红蛋白很容易与抗体和其他蛋白质结合，而不需要化学交联剂。这些高度纯化的藻红蛋白在结合后保持其光谱特征。用4-（N-马来酰亚胺甲基）环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺基（SMCC）处理活化的hycoerythrin，该琥珀酰胺基与赖氨酸残基反应，使马来酰亚胺基团与偶联伴侣蛋白的游离硫醇反应。当与含硫醇的靶标混合时，可以直接偶联，无需进一步预处理。

艾美捷预活化的PE [R-藻红蛋白]：

Cat #: B-CHM305

Size: 1 mg

Storage: Store at 4°C, protected from light

预活化的PE [R-藻红蛋白]特性：

形式：液体

光谱特性：Ex/Em=450-500纳米/575±5纳米

纯度：Amax/A280>5.0

运输和储存

储存条件：4°C避光保存。不要冻结。

稳定性：在适当的储存条件下稳定至少6个月。

预活化的PE [R-藻红蛋白]使用说明：

1.抗体修饰

1） 将抗体修饰试剂（DTT/TCEP）溶于ddH20中，制备2mg/ml抗体修饰缓冲液。

2） 使用PBS缓冲液将待标记抗体的浓度（纯度>90%）调节至约5-10 mg/ml。向每毫克抗体中加入10μl抗体修饰缓冲液，轻轻混合。在室温下搅拌混合物60-90分钟。

3） 反应完成后，将混合物转移到离心过滤管中，并加入MES缓冲液。离心过滤器多次以除去过量的抗体修饰缓冲液。过滤器中收集的溶液是经修饰的抗体，应将其调节至1-5mg/ml的浓度。

2.活化的R-藻红蛋白与抗体的结合

1） 使用MES缓冲液将活化的R-藻红蛋白的浓度调节至5 mg/ml。为了获得R-PE的准确重量，我们建议使用R-PE的消光系数进行测量（[R-PE]=0.1245×

A565，其中[R-PE]是以mg/ml为单位的浓度，A565是565nm处的吸光度，优选在0.3-0.8的范围内）。

2） 将修饰的抗体与活化的R-藻红蛋白以1:3的质量比混合（每mg修饰的抗体3 mg活化的R藻红蛋白）。在室温下避光反应2小时。

3） 将NEM溶解在无水二甲基亚砜（DMSO）中，制备12.5 mg/ml溶液（0.1 M）。在步骤2）的反应混合物中，每毫克抗体加入5μl-NEM溶液，以阻断任何剩余的活性基团。

4） 将步骤3）中的溶液转移到离心过滤管中，并通过重复离心去除阻塞缓冲液。

5） 将标记的抗体分成等分，添加适当的防腐剂，并在-20°C下储存以备将来使用。

https://www.amyjet.com/products/B-CHM305-1mg.shtml

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APC [别藻蓝蛋白]链霉亲和素-亮度比有机染料高5-10倍

链霉亲和素-藻红蛋白偶联物可用于检测具有极高灵敏度的生物素化分子。它们通常用作检测生物素化的一级探针的二级试剂，如流式细胞术、蛋白质免疫印迹、免疫细胞化学等应用中的抗体。链亲和素的APC缀合物由共价结合到荧光标记物（别藻蓝蛋白）的生物素结合蛋白（链亲和素）组成。链亲和素以非常高的亲和力与生物素结合，因此与链亲和素的缀合物通常与与生物素的缀合物一起特异性地用于检测各种蛋白质、蛋白质变体、核酸或其他分子（例如，在生物素化的一级抗体与靶蛋白结合后，荧光链亲和素对其进行检测）。链亲和素APC在开发用于流式细胞术分析、微板分析和芯片应用的生物素-链亲和素检测方案方面具有巨大的实用性。该APC链亲和素缀合物以高纯度（通过HPLC确认）形式提供。

艾美捷别藻蓝蛋白-链霉亲和素：

Cat #: B-CHM302

Size: 10mg

Storage: Store at 4°C protected from light.

别藻蓝蛋白-链霉亲和素特性

形式：蓝色溶液

光谱特性：Ex/Em=652/662 nm

溶液成分：0.5mg/ml pH~7.4 PBS，2mg/ml牛血清白蛋白（不含IgG和蛋白酶），0.05%钠

叠氮化物

运输和储存

储存条件：4℃避光保存。

稳定性：在适当的储存条件下稳定至少6个月。

别藻蓝蛋白-链霉亲和素优势

-亮度比有机染料高5-10倍在水溶液中的溶解度极高

-无未偶联的链霉亲和素；在大多数情况下，没有未偶联的APC非常适合流式细胞术、微板和微阵列应用

-对于大多数荧光链霉亲和素应用，推荐浓度为1-10μg/mL，zui佳条件由用户确定。

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RPE-Cy7串联染料化学性质及光谱参考

PE-Cy5是属于藻胆蛋白缀合物家族的串联染料。在这种类型的串联染料中，激发能可以从PE转移到Cy5，zui大发射波长为Cy5。PE-Cy5与FITC和PE具有zui小的光谱重叠，导致低荧光干扰。因此，它在实验中与FITC和PE联合使用。需要注意的是，PE-Cy5不适合与APC配对，因为它们具有显著的光谱重叠。与PE-Cy5相比，PE-Cy5.5对FITC、PE和APC的荧光干扰zui小，使其与这些染料的组合相容。此外，与PE-Cy5相比，PE-Cy5.5表现出更高的荧光强度。PE-Cy7与FITC没有光谱重叠，与APC的重叠zui小，使其能够与FITC、PE和APC结合使用。然而，需要注意的是，PE-Cy7对光漂白高度敏感，并且在实验期间需要严格的光保护环境。

艾美捷RPE-Cy7串联染料：

Cat #: B-CHM311 / B-CHM312 / B-CHM314 / B-CHM315

Size: 1 mg / 10 mg

Storage: Store at 4°C protected from light.

RPE-Cy7串联染料性质：

形式：溶液

纯度：Amax/A280>5.0

运输和储存

储存条件：4℃保存，避光，不冻。

稳定性：在适当的储存条件下稳定至少6个月。

使用说明

1.抗体修饰

1） 将抗体修饰试剂（DTT/TCEP）溶于ddH2O中，制备2 mg/ml抗体修饰缓冲液。

2） 使用PBS缓冲液将待标记抗体的浓度（纯度>90%）调节至约5-10 mg/ml。向每毫克抗体中加入10μl抗体修饰缓冲液，轻轻混合。在室温下搅拌混合物60-90分钟。

3） 反应完成后，将混合物转移到离心过滤管中，并加入MES缓冲液。离心过滤器多次以除去过量的抗体修饰缓冲液。过滤器中收集的溶液是经修饰的抗体，应将其调节至1-5mg/ml的浓度。

2.PE串联激活

1） 将PE串联溶于0.1M PBS（pH 7.4，5mM EDTA）中，浓度为5-10mg/ml。

2） 将SMCC溶解在无水二甲基亚砜中，制备10mg/ml的储备溶液。

3） 每mg PE串联染料添加5ul SMCC（n（PE串联）：n（SMCC）=1:80）。用铝箔密封反应混合物，并在室温下旋转1小时，使PE串联上的氨基与琥珀酰亚胺酯反应，形成衍生的PE串联。

4） 反应完成后，将反应混合物转移到超滤离心管中，并在4℃、12000g下离心5分钟以除去滤液。加入500μl MES缓冲液，混合并离心。重复此步骤5次。

5） 收集活化的PE串联溶液。

3.活化的PE串联与抗体的结合

1） 使用MES缓冲液将活化PE串联的浓度调节至5 mg/ml。为了获得活性PE串联的准确重量，我们建议使用活性PE串联形式测量的消光系数（[PE串联]=0.1245×A565，其中[PE串联]是以mg/ml为单位的浓度，A565是565nm处的吸光度，优选在0.3-0.8的范围内）。

2） 将修饰的抗体与活化的PE串联以1:3的质量比混合（3mg修饰的抗体的活化的PE串列排列）。在室温下避光反应2小时。

3） 将NEM溶解在无水二甲基亚砜（DMSO）中，制备12.5 mg/ml溶液（0.1 M）。每毫克抗体向步骤2）的反应混合物中加入5μl的-NEM溶液，以阻断任何剩余的活性基团。

4） 将步骤3）中的溶液转移到离心过滤管中，并通过重复离心去除阻塞缓冲液。

5） 将标记的抗体分成等分，添加适当的防腐剂，并在-20°C下储存以备将来使用。

注意事项：

1.活性PE串列应在黑暗中冷藏。在贴标签的过程中，应尽可能避免光线照射。

2.封闭试剂和修饰试剂应新鲜配制，并立即使用。它们不应该存放很长时间。

3.标记的抗体应具有高特异性和不低于90%的纯度。单克隆抗体是首选，溶液中不应含有游离胺。zui好使用PBS。在标记之前，抗体应该耗尽NaN3和BSA。透析、浓缩和浓度测量等操作可能会导致抗体损失。因此，应根据具体情况确定用于标记的抗体的适当量。

4.由于修饰抗体中引入的基团对再氧化的敏感性，修饰后的抗体应尽快与活化的PE串联偶联。

PE-Cy7:

https://www.amyjet.com/products/B-CHM311-1mg.shtml

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预活化，RPE-Cy5—表现出更高的荧光强度

PE-Cy5是属于藻胆蛋白缀合物家族的串联染料。在这种类型的串联染料中，激发能可以从PE转移到Cy5，zui大发射波长为Cy5。PE-Cy5与FITC和PE具有zui小的光谱重叠，导致低荧光干扰。因此，它在实验中与FITC和PE联合使用。需要注意的是，PE-Cy5不适合与APC配对，因为它们具有显著的光谱重叠。与PE-Cy5相比，PE-Cy5.5对FITC、PE和APC的荧光干扰zui小，使其与这些染料的组合相容。此外，与PE-Cy5相比，PE-Cy5.5表现出更高的荧光强度。PE-Cy7与FITC没有光谱重叠，与APC的重叠zui小，使其能够与FITC、PE和APC结合使用。然而，需要注意的是，PE-Cy7对光漂白非常敏感，并且在实验过程中需要严格的光保护环境

艾美捷预活化，RPE-Cy5：

Cat #: B-CHM311 / B-CHM312 / B-CHM314 / B-CHM315

Size: 1 mg / 10 mg

Storage: Store at 4°C protected from light.

预活化，RPE-Cy5规格：

预活化，RPE-Cy5性质：

形式：固体

纯度：Amax/A280>5.0

运输和储存

储存条件：4°C保存，避光，不冻。

稳定性：在适当的储存条件下稳定至少6个月。

使用说明

1.抗体修饰

1） 将抗体修饰试剂（DTT/TCEP）溶于ddH20中，制备2mg/ml抗体修饰缓冲液。

2） 使用PBS缓冲液将待标记抗体的浓度（纯度>90%）调节至约5-10 mg/ml。向每毫克抗体中加入10μl抗体修饰缓冲液，轻轻混合。在室温下搅拌混合物60-90分钟。

3） 反应完成后，将混合物转移到离心过滤管中，并加入MES缓冲液。离心过滤器多次以除去过量的抗体修饰缓冲液。过滤器中收集的溶液是经修饰的抗体，应将其调节至1-5mg/ml的浓度。

2.PE串联激活

1） 将PE串联溶于0.1M PBS（pH 7.4，5mM EDTA）中，浓度为5-10mg/ml。

2） 将SMCC溶解在无水二甲基亚砜中，制备10mg/ml的储备溶液。

3） 每mg PE串联染料添加Sμl SMCC（n（PE串联）：n（SMCC）=1:80）。用铝箔密封反应混合物，并在室温下旋转1小时，使PE串联上的氨基与琥珀酰亚胺酯反应，形成衍生的PE串联。

4） 反应完成后，将反应混合物转移到超滤离心管中，并在4℃、12000g下离心5分钟以除去滤液。加入500μl MES缓冲液，混合并离心。重复此步骤5次。

5） 收集活化的PE串联溶液。

3.活化的PE串联与抗体的结合

1） 使用MES缓冲液将活化PE串联的浓度调节至5 mg/ml。为了获得活性PE串联的准确重量，我们建议使用活性PE串联形式测量的消光系数（[PE串联]=0.1245×A565，其中[PE串联]是以mg/ml为单位的浓度，A565是565nm处的吸光度，优选在0.3-0.8的范围内）。

2） 将修饰的抗体与活化的PE串联以1:3的质量比混合（3mg修饰的抗体的活化的PE串列排列）。在室温下避光反应2小时。

3） 将NEM溶解在无水二甲基亚砜（DMSO）中，制备12.5 mg/ml溶液（0.1 M）。在步骤2）的反应混合物中，每毫克抗体加入5μl-NEM溶液，以阻断任何剩余的活性基团。

4） 将步骤3）中的溶液转移到离心过滤管中，并通过重复离心去除阻塞缓冲液。

5） 将标记的抗体分成等分，加入适当的防腐剂，在-20°C下储存以备将来使用。

注意事项：

1.活性PE串列应在黑暗中冷藏。在贴标签的过程中，应尽可能避免光线照射。

2.封闭试剂和修饰试剂应新鲜配制，并立即使用。它们不应该存放很长时间。

3.标记的抗体应具有高特异性和不低于90%的纯度。单克隆抗体是首选，溶液中不应含有游离胺。zui好使用PBS。在标记之前，抗体应该耗尽NaN3和BSA。透析、浓缩和浓度测量等操作可能会导致抗体损失。因此，应根据具体情况确定用于标记的抗体的适当量。

4.由于修饰抗体中引入的基团对再氧化的敏感性，修饰后的抗体应尽快与活化的PE串联偶联。

https://www.amyjet.com/products/B-CHM312-10mg.shtml

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