来宝网 2023/9/12点击533次
霉亲和素磁珠操作注意事项
链霉亲和素磁珠是将链霉亲和素(streptavidin)固定在磁性微球上，借助链霉亲和素-生物素高亲和力结合特性，与生物素化蛋白、抗体及核酸（统称生物素化分子）等形成固定层，进而分离和与生物素化分子相互作用的靶分子，可用于亲和纯化，细胞分选，蛋白互作，DNA-蛋白质相互作用，探针捕获和mRNA分离等多方面应用。
艾美捷链霉亲和素磁珠：
Cat #: C-BETA2002
Size: 2 mL / 10 mL/ 100 mL
Storage: 2°C to 8°C
链霉亲和素磁珠组分：
协议：
1.捕获生物素化核酸
2.捕获生物素化抗体/蛋白质
洗涤缓冲液：
洗涤缓冲液A：10mM Tris-HCl，pH 7.5，1mM EDTA，1M NaCl，0.01%～0.1%吐温-20
洗涤缓冲液B：PBS，pH 7.4，含有0.05%吐温-20（可根据需要添加0.01%-0.1%BSA）
注：
1、将珠粒的pH值保持在6-8之间，避免冷冻和离心。
2、避免将磁珠长时间暴露在磁场中，以防止磁珠聚集，从而降低结合活性。
3、为了极大限度地减少磁珠的损失，磁分离时间应不少于1分钟。
4、在制备生物素化样品的过程中，使用脱盐柱去除游离生物素。
5、转移磁珠时，应通过摇动确保彻底再悬浮，并避免操作过程中出现气泡
6、本品仅供研究使用。
https://www.amyjet.com/products/C-BETA2002-100mL.shtml
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AF 488偶联试剂盒样品制备及操作步骤
偶联试剂盒的特点是备齐各种用品使用更方便，效率经过优化后更高，可以直接制备得到一个完整的亲和层析柱。
AF 488标记试剂盒提供了一种简单快速的方法标记抗体、蛋白质、多肽等含有游离氨基的样本。该试剂盒设计用于直接从含有游离氨基的蛋白质、肽和其他配体制备488，应用于偶联标记
艾美捷AF 488偶联试剂盒：
Cat #: D-AKE520/D-AKE530/D-AKE540/D-AKE560/D-AKE580
Size: 100 μg*3
Storage: Stored at -20°C for 6 months, protected from light
AF 488偶联试剂盒样品制备：
待标记样品的初始浓度应高于2 mg/mL。提示蛋白浓度在2.5mg/mL以上。否则，在实验之前需要增加蛋白质浓度。待标记样品的成分（或储存缓冲液）应符合以下要求：
（1） 不要含有氨基成分，否则会影响偶联效果。
（2） 少量BSA不会影响偶联效果。建议使用PBS作为存储缓冲液。
（3） 如果样品中含有可能干扰标记的物质，建议用PBS代替缓冲液。具体方法如下
将样品加入超滤膜中，加入200-150µL PBS。在12000 g、4°C、10分钟的温度下离心，然后滤出滤液。然后再次加入PBS，并在12000g，4°C，10分钟下离心。离心后，取出超滤管的内芯，将其置于干净的外管中，并在4000g，4℃，2分钟下离心以收集样品。
待标记样品的成分（或储存缓冲液）要求清单：
注：请根据实际样品体积，放大或缩小试剂盒各成分在反应系统中的体积。（例如FlyLink™ AF 488标签套件）
不同规格的推荐合适标签样本量和标签系统如下：
Size Amount of Sample Optimal Labeling System
3 ×100 µg 3×100 µg 3×50-3×75 µL
1 mg 1 mg 500-750 µL
以下操作步骤基于3×100µg规格。对于其他规格，请相应地调整日期。如果您需要调整音量，请保持样本大小不变，并更改FlyLink的音量™ AF 488标签解决方案，Activated FlyLink™ AF 488溶液和去离子水。1.添加15µL FlyLink™ AF 488将溶液标记到待标记的样品溶液中，并用移液管轻轻混合。2.移液管7.5µL活性FlyLink™ AF 488溶液加入步骤1中的反应溶液中，加入去离子水至150µL（注：此体积为标记系统），轻轻混合，并在37°C的黑暗中静置1小时。
注：步骤1/2属于标记步骤。
3.向步骤2中的反应溶液中加入适量PBS（固定体积约为500µL），轻轻混合，将溶液移至纯化柱中。在4°C下以12000 g离心10分钟。
4.丢弃滤液，向纯化柱中加入适量PBS（固定体积约500µL）。在4°C下以12000 g离心10分钟。
5.取出纯化柱，将其倒置在干净的离心管中，在4000g下离心2分钟4°C。离心管中收集的溶液为偶联产物。
注：步骤3/4/5为纯化步骤。该缀合物在4°C的黑暗中可以稳定一个多月。为了长期保存，缀合物应装在小份中，置于-20°C的黑暗中，并加入一定体积的甘油。避免重复冷冻和解冻。
https://www.amyjet.com/products/D-AKE520-3.shtml
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彗星法DNA损伤分析试剂盒/Comet Assay Kit
检测Jurkat正常细胞和阳性对照组DNA损伤。 并与其它品牌A进行了比较。彗星法 DNA 损伤分析试剂盒（3 孔载玻片）是一种单细胞凝胶电泳试验（SCGE），快速、灵敏的检测细胞 DNA 损伤的试剂盒。彗星法DNA损伤分析试剂盒（3孔载玻片）应用于细胞毒理。
艾美捷彗星法DNA损伤分析试剂盒：
Cat #: D-AKE3040
Size: 15T
Storage: Stored at 4°C for 6 months, protected from light
彗星法DNA损伤分析试剂盒（3孔载玻片）供应材料和储存条件:
试剂准备：
彗星幻灯片（3孔）：随附随用。使用前将其平衡至室温。在4℃下储存。10×赖氨酸溶液：供应即用。使用前将其平衡至室温。在4℃下储存。EDTA（500mM）：供应时即用。使用前将其平衡至室温。储存温度为4℃。
琼脂（低熔点）：将琼脂（低沸点）瓶在90-95°C的水浴中加热20min，直到琼脂液化。将瓶子转移到37°C水浴中20分钟以保持液态。将其余部分等分并在4℃下储存。
碘化丙啶（PI）（50×）：使用前新鲜制备，用PBS稀释50倍至1×PI染料浓度，在4°C下储存并避光。
40 mM Tris-HCl（pH 7.5）：在使用前制备，用PBS稀释100倍至0.4 mM Tris-HCl（pH7.5）的浓度，并在4°C下储存。
1×裂解缓冲液：制备100 mL 1×裂解液
电泳溶液的选择：
根据所需的运行条件和检测灵敏度选择合适的电泳溶液。TBEis优选用于细胞凋亡的分析，并且能够使用尾部长度而不是尾部力矩进行数据分析。TBE电泳可检测单链和双链DNA断裂，并可检测少数AP位点。碱性电泳更灵敏，可以检测少量的DNA损伤。
1.TBE电泳溶液
试剂数量
Tris Base 10.8g
硼酸5.5克
EDTA（二钠盐）0.93克
去离子水调节体积至1L
注意：使用前充分混合。TBE电泳溶液是新制备的，使用前在4°C下冷却至少20分钟。
2.碱性电泳溶液（300mM NaOH，1mM EDTA，pH>13）
试剂数量
试剂数量
氢氧化钠12g
EDTA（500 mM）2 mL
去离子水调节体积至1L
注意：使用前充分混合。碱性电泳溶液是新制备的，使用前在4°C下冷却至少20分钟
https://www.amyjet.com/products/D-AKE3040-15T.shtml
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样品制备&操作步骤丨AF 555偶联试剂盒
AF 555标记试剂盒设计用于直接从含有游离氨基的蛋白质、肽和其他配体制备555。AF 555偶联试剂盒提供了一种简单快速的方法标记抗体、蛋白质、多肽等含有游离氨基的样本。AF 555偶联试剂盒应用于偶联标记。
艾美捷AF 555偶联试剂盒：
Cat #: D-AKE520/D-AKE530/D-AKE540/D-AKE560/D-AKE580
Size: 100 μg*3
Storage: Stored at -20°C for 6 months, protected from light
AF 555偶联试剂盒供应材料和储存条件：
注：纯化柱适用于分子量在100KD至200KD之间的样品；如果试剂残留，请及时密封并在-20°C下储存
样品制备：
待标记样品的初始浓度应高于2 mg/mL。提示蛋白浓度在2.5mg/mL以上。否则，在实验之前需要增加蛋白质浓度。待标记样品的成分（或储存缓冲液）应符合以下要求：
（1）不含氨基成分，否则会影响偶联效果。
（2） 少量BSA不会影响偶联效果。建议使用PBS作为存储缓冲液。
（3） 如果样品中含有可能干扰标记的物质，建议用PBS代替缓冲液。具体方法如下
将样品加入超滤膜中，加入200-150µL PBS。在12000 g、4°C、10分钟的温度下离心，然后滤出滤液。然后再次加入PBS，并在12000g，4°C，10分钟下离心。离心后，取出超滤管的内芯，将其置于干净的外管中，并在4000g，4℃，2分钟下离心以收集样品
操作步骤：
以下操作步骤基于3×100μg规格。对于其他规格，请相应地调整日期。如果您需要调整体积，请保持样品大小不变，并更改标记系统中的“FlyLink”“AF 488标记溶液、“Activated FlyLink”AF 488溶液和去离子水的体积。
1.将15μL FlyLink“”AF 488标记溶液加入待标记的样品溶液中，并用移液管轻轻混合。
2.用移液管将7.5μL的Activated FlyLink“”AF 488溶液移到步骤1中的反应溶液中，加入去离子水至150μL（注：此体积为标记系统），轻轻混合，在37°C的黑暗中静置1h。
注：步骤1/2属于标记步骤。
3.向步骤2中的反应溶液中加入适量PBS（固定体积约为500μl），轻轻混合
将溶液移至纯化柱。在4℃、12000g离心10分钟。
4.丢弃滤液，向纯化柱中加入适量PBS（固定体积约500μL）。
在4℃下以12000g离心10分钟。
5.取出纯化柱，将其倒置在干净的离心管中，在4℃下以4000g离心2分钟。
离心管中收集的溶液是偶联产物。
注：步骤3/4/5为纯化步骤。该偶联物在4°C的黑暗中可以稳定一个月以上。为了长期保存，缀合物应装在小份中，置于-20°C的黑暗中，并加入相同体积的甘油。避免重复冷冻和解冻。
https://www.amyjet.com/products/D-AKE530-3.shtml
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快速内切酶DpnII，专为快速酶切而设计
快速内切酶DpnII专为快速酶切而设计.5-15分钟即可完全酶切,让DNA酶切变得简单。组分：FlyCut™ DpnII，10× CutOne™ Buffer，10× CutOne™ Color Buffer，保存建议-20℃
艾美捷快速内切酶DpnII：
Cat #: C-BSM533
Size: 50 rxns
Storage: -20°C
快速内切酶DpnII使用方法：
1.快速DNA消化方案
①将以下反应组分按所示顺序在冰上混合：
a. 对于纯化的PCR产物。如果PCR产物未纯化，则应将10倍CutOne“”缓冲液的量减少到2μl，以减少未纯化PCR产物中的剩余金属离子。如果用于克隆，我们建议在消化前纯化PCR产物，因为一些DNA聚合酶的核酸外切酶活性可能会改变切割DNA的末端。
②轻轻混合并向下旋转；
③ 在37°C下培养15分钟（质粒DNA）或15～30分钟（PCR产物）或30～60分钟（基因组
DNA）；
④ 可选：80°C加热20分钟灭活酶；
⑤如果在反应中使用CutOne“”颜色缓冲液，则将反应混合物的等分试样直接加载在凝胶上。
2.DNA的双重和多重消化
① 使用每种酶1μl，并适当扩大反应条件；
② 反应混合物中酶的总体积不应超过总反应体积的1/10；③如果酶需要不同的反应温度，从需要较低温度的酶开始，然后加入第二种酶并在较高温度下孵育。
3.扩大质粒DNA消化反应
在推荐的反应条件下，该酶可在5~15分钟内消化单位底物。酶的极适反应温度为37°C。
当底物DNA被DAM甲基化酶甲基化时，这种限制性酶的切割可能被阻断或受损。
当底物DNA被EcoBI甲基化酶甲基化时，这种限制性酶的切割可能被阻断或受损。
该酶可以在80°C下孵育20分钟进行热灭活。孵育3小时不会显示星形活性，但孵育时间较长可能会导致星形活性。
https://www.amyjet.com/products/C-BSM533-50rxns.shtml
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快速内切酶EagI，快速精确完成DNA切割
快速内切酶是一系列经过基因工程重组、能够在 5~15 分钟内精确完成 DNA 切割的限制性内切酶，适用于质粒DNA、PCR 产物或基因组 DNA 等的快速酶切。快速内切酶具有如下特点：5~15 分钟内即可完成酶切；共用一种酶切 Buffer，大大简化酶切反应体系；良好的酶活冗余度，轻松应对底物过量或困难模板酶切。
艾美捷快速内切酶EagI：
Cat #: C-BSM535
Size: 25 rxns
Storage: -20°C
在推荐的反应条件下，快速内切酶EagI可在5~15分钟内消化单位底物。酶的极适反应温度为37°C。
当底物DNA被CpG甲基化酶甲基化时，这种限制性酶的切割可能被阻断或受损。
该酶可以在80°C下孵育20分钟进行热灭活。孵育3小时不会显示星形活性，但孵育时间较长可能会导致星形活性。
使用方法：
1。快速DNA消化方案
①将下列反应组分按所示顺序在冰上混合：
a. 对于纯化的PCR产物。如果PCR产物未纯化，则应将10倍CutOne“”缓冲液的量减少到2μl，以减少未纯化PCR产物中的剩余金属离子。如果用于克隆，我们建议在消化前纯化PCR产物，因为一些DNA聚合酶的核酸外切酶活性可能会改变切割DNA的末端。②轻轻搅拌并向下旋转；③在37°C下培养15分钟（质粒DNA）或15～30分钟（PCR产物）或30～60分钟（基因组DNA）；
④ 可选：在80℃下加热20分钟使酶失活；
⑤ 如果在反应中使用CutOne“”颜色缓冲液，则将反应混合物的等分试样直接加载在凝胶上。
2.DNA的双重和多重消化
① 使用每种酶1μl，并适当扩大反应条件；
② 反应混合物中酶的总体积不应超过总反应体积的1/10；③如果酶需要不同的反应温度，从需要较低温度的酶开始，然后加入第二种酶并在较高温度下孵育。
3.扩大质粒DNA消化反应
https://www.amyjet.com/products/C-BSM535-25rxns.shtml
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快速内切酶EcoRI：高端快速限制性内切酶
快速内切酶EcoRI是一系列高端快速限制性内切酶之一，可实现在 5–15 分钟内快速完成质粒 DNA、PCR 产物或基因组 DNA 等的快速酶切。在通用的 CutOne™ 或 CutOne™ Color Buffer 中都具有优良的活性。
艾美捷快速内切酶EcoRI：
Cat #: C-BSM536
Size: 600 rxns
Storage: -20°C
用1μl FlyCut消化含有lacZα基因的合适载体™ EcoRI。将消化产物连接并转化为大肠杆菌感受态细胞。在含有X-Gal、IPTG和适当抗生素的Luria Bertani培养板上，成功连接的β-半乳糖苷酶基因可以表达并产生蓝色菌落，而中断基因（即降解的DNA末端）产生白色菌落。FlyCut™ 限制性内切酶必须产生少于1%的白色菌落。
在推荐的反应条件下，该酶将在5“15分钟内消化单位底物。酶的合适反应温度为37”C。当底物DNA被ECOBI甲基化时，该限制性酶的切割可能会被阻断或受损。当底物脱氧核糖核酸被ECOBI甲化酶甲基化时该酶的切割也可能被阻断或损坏。该酶可以加热在80°C下孵育20分钟灭活。孵育3小时不会显示星形活性，但孵育时间较长可能会导致星形活性
快速内切酶EcoRI使用方法：
1.快速DNA消化方案
①将以下反应组分按所示顺序在冰上混合：
a对于纯化的PCR产物。如果PCR产物未纯化，则10×CutOne的量™ 缓冲液应减少到2μl，以减少未纯化的PCR产物中剩余的金属离子。我们建议在消化用于克隆之前纯化PCR产物，因为一些DNA聚合酶的核酸外切酶活性可能会改变切割DNA的末端。
②轻轻混合并向下旋转；
③ 在37°C下培养15分钟（质粒DNA）或15～30分钟（PCR产物）或30～60分钟（基因组DNA）；
④ 可选：80°C加热20分钟灭活酶；⑤l如果在反应中使用CutOne“”颜色缓冲液，则将反应混合物的等分试样直接加载在凝胶上。
2.DNA的双重和多重消化
① 使用每种酶1μl，并适当扩大反应条件；
② 反应混合物中酶的总体积不应超过总反应体积的1/10；
③如果酶需要不同的反应温度，从需要较低温度的酶开始，然后加入第二种酶并在较高温度下孵育。
3.扩大质粒DNA消化反应
https://www.amyjet.com/products/C-BSM536-600rxns.shtml
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快速内切酶EcoRV，优良的活性，快速内切
快速内切酶EcoRV,一种酶切缓冲液,简化酶切反应,良好的酶活冗余度,轻松处理底物过量或困难模板的酶切,酶切产物可直接点胶电泳。组分：FlyCut™ EcoRV，10× CutOne™ Buffer，10× CutOne™ Color Buffer，保存建议-20℃
艾美捷快速内切酶EcoRV：
Cat #: C-BSM537
Size: 200 rxns
Storage: -20°C
用1μl FlyCut消化含有lacZα基因的合适载体™ EcoRV。将消化产物连接并转化为大肠杆菌感受态细胞。在含有X-Gal、IPTG和适当抗生素的Luria Bertani培养板上，成功连接的β-半乳糖苷酶基因可以表达并产生蓝色菌落，而中断基因（即降解的DNA末端）产生白色菌落。FlyCut™ 限制性内切酶必须产生少于1%的白色菌落。
在推荐的反应条件下，这种酶将在5”15分钟内消化单位底物。酶的合适反应温度为37”C。当底物DNA被羧甲基化时，用这种限制性酶的切割可能会被阻断或受损通过80cf或20分钟的孵育灭活at。孵育3小时不显示星形活性，但较长的孵育可能导致星形活性。
使用方法：
1.快速DNA消化方案
①将以下反应组分按所示顺序在冰上混合：
a.对于纯化的PCR产物。如果PCR产物未纯化，则10×CutOne的量™ 缓冲液应减少到2μl，以减少未纯化的PCR产物中剩余的金属离子。我们建议在消化用于克隆之前纯化PCR产物，因为一些DNA聚合酶的核酸外切酶活性可能会改变切割DNA的末端。
②轻轻混合并向下旋转；
③ 在37°C下培养15分钟（质粒DNA）或15～30分钟（PCR产物）或30～60分钟（基因组
DNA）；
④ 可选：在80°C下加热20分钟使酶失活；
⑤ l如果在反应中使用CutOne“”颜色缓冲液，则将反应混合物的等分试样直接加载在凝胶上。
2.DNA的双重和多重消化
① 每种酶使用1μl，并适当扩大反应条件；
② 反应混合物中酶的总体积不应超过总反应体积的1/10；
③如果酶需要不同的反应温度，从需要较低温度的酶开始，然后加入第二种酶并在较高温度下孵育。
3.扩大质粒DNA消化反应
https://www.amyjet.com/products/C-BSM537-200rxns.shtml
