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PK Mito3款不同颜色的探针：PK Mito Red/Orange/Deep Red

线粒体是细胞的动力来源，影响细胞稳态、增殖、死亡的关键信号通路。由于线粒体的动态行为和与其他细胞器的丰富相互作用，荧光显微镜的发展特别推动了线粒体研究线粒体。线粒体内膜 (inner membrane, IM）向内凹陷形成许多层状或管状的内嵴，其间距通常小于100 nm，导致传统荧光显微镜无法观察到其内部精细结构。因此，基于固定样本的电子显微镜技术一直作为捕捉线粒体膜结构的主流工具。近年来，活细胞线粒体纳米成像已从原理验证发展成为一种结构和功能研究的可行方法。其中，受激发射损耗纳米显微镜（STED）和结构光照明显微镜（SIM）已被报道用于活细胞的内嵴成像。然而，目前线粒体纳米结构的可视化大多局限于癌细胞的二维（2D）单色成像，正交策略尚未建立，且STED图像采集会受到细胞器的光损伤或快速光漂白的影响，很难观察到原生状态下的线粒体形态。

为解决上述痛点，艾美捷浦海景珊(Genvivo)的PK Mito线粒体探针，这款划时代的探针是基于北京大学陈知行团队于2020年发表于英国皇家化学会旗舰期刊Chemical Science的学术成果的转化，德国马普所的Stefan W. Hell教授（2014年诺贝尔化学奖得主）特别点赞PK Mito使用效果，他强调：“PK Mito高度还原了线粒体精细动态的细节。”

PK Mito能够特异性结合到各类细胞的线粒体上，与传统染料相比，PKMITO?系列线粒体染料能够实现超分辨率成像，使细胞轮廓更清楚，同时光毒性大幅度降低，能够在成像时最大程度保持线粒体状态，最大程度减少对生物细胞生理反应的影响，是绝佳的超分辨及长时程线粒体成像染料。  

目前PKMITO系列主要供应3款不同颜色的探针：

名称 货号 包装 适用范围

PK Mito Red PKMR-1 25nmol 荧光显微镜、Confocal、SIM

PK Mito Orange PKMO-1 25nmol 荧光显微镜、Confocal、SIM、STED

PK Mito Deep Red PKMDR-1 25nmol 荧光显微镜、Confocal、SIM

保存条件：-20℃，避光

保质期：1年

引文赏析：

Yang, Zhongtian, et al. "Cyclooctatetraene-conjugated cyanine mitochondrial probes minimize phototoxicity in fluorescence and nanoscopic imaging." Chemical Science(2020).

Liu, Tianyan, et al. "Multi-color live-cell STED nanoscopy of mitochondria with a gentle inner membrane stain." Proceedings of the National Academy of Sciences119.52 (2022): e2215799119.

PNAS封面文章：

https://www.amyjet.com/featured/pk-mito-2.shtml

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脂肪酸氧化研究丨Fatty Acid Oxidation (FAO)解决方案

脂肪酸氧化

脂肪酸每碳提供的ATP比葡萄糖等碳水化合物多。 在具有高能量需求的组织中，例如心脏组织，高达 50 - 70%的能量来自脂肪酸β-氧化，可转化脂肪 酸制乙酰辅酶A，同时产生FADH2和NADH 线粒体。

这种严格的有氧氧化途径由四个不同的步骤组成： 酰基辅酶A脱氢酶脱氢，烯酰辅酶A水合 水合酶，通过 3-羟基酰辅酶 A 脱氢酶和硫解酶脱氢 β-酮硫醇酶裂解。

检测精灵非放射性 粮农组织的测定基于底物辛酰辅酶A的氧化。生成 NADH与四唑盐INT还原为甲胺素偶联。 红色甲臜的强度与粮农组织的增加成正比 活动。测定溶液和底物应等分储存在 -80°C.

艾美捷Assay Genie脂肪酸氧化 (FAO) 检测试剂盒（BR00001）是一种高度灵敏的试剂盒 用于定量测量脂肪酸的比色法 细胞和组织中的氧化。

中文名称：脂肪酸氧化 (FAO) 检测试剂盒

英文名字：Fatty Acid Oxidation (FAO) Assay Kit

货号：BR00001

规格：48assays

这种独特的检测方法利用 高可溶性辛酰辅酶A底物，可实现 脂肪酸氧化与长链低溶性的测量 底物如18C不饱和脂肪酸油酸酯。

上图：脂肪酸氧化测定：组织 裂解物由健康的仓鼠心脏和 与心力衰竭相关的TO2仓鼠模型。裂解物 用于测定和脂肪酸氧化水平 量化。

下图：脂肪酸氧化测定： 辛酰辅酶A是底物，而不是反应的产物。

细胞/组织提取物的制备：

1.用冰冷的磷酸盐缓冲盐水（PBS）洗涤~106细胞两次， 并从细胞沉淀中完全去除PBS。细胞沉淀应 储存在-80℃.组织样品应用PBS彻底洗涤至 去除血细胞，这可能导致检测结果不一致。

2.通过稀释 1x 细胞裂解液制备足够的 10x 细胞裂解液 用冰冷的dH 2 O溶液。加入 50 – 100 μl 冰冷的 1x 细胞裂解 细胞沉淀溶液。通过上下移液提取细胞 （温和但彻底）。将裂解物留在冰上5分钟 间歇性轻微激动。如果裂解物是粘稠的，添加更多的1x细胞 裂解溶液并重复移液。在 以最大速度冷藏微量离心机5分钟。回收上清液 用于测定。将组织在 1x 细胞裂解液中匀浆，并裂解 通过离心澄清。每 25.0 毫升 5x 使用 ~1 毫克组织 用于组织匀浆的细胞裂解溶液。

3.进行蛋白质测定以确定样品蛋白质浓度。 通过用冰冷的 1x 稀释来标准化样品蛋白质浓度 细胞裂解液至1 – 3毫克/毫升。将蛋白质样品完全保存在冰上 次。冻融的粗蛋白裂解物可表现出酶还原 活动。裂解物应储存在-80℃。 注意：不要使用缓冲液 含有还原剂或SDS。

试剂解冻：

将解冻的粮农组织化验溶液和20倍粮农组织底物放在冰上。轻轻搅拌 移液前的溶液。重要的是要尽量减少时间 试剂解冻。使用后立即冷冻溶液。

对照溶液和反应溶液的制备：

1.对照溶液由1份dH 2 O和20份混合制备 粮农组织化验解决方案，例如25μldH 2 O与500μlFAO化验混合 溶液。测定过程中将新鲜制备的对照溶液保持在冰上。

2.反应溶液通过混合1份20x FAO底物和 20份粮农组织化验溶液，例如25μl 20x粮农组织底物与 500μl粮农组织测定溶液。将溶液放在冰上并立即使用。 每个蛋白质样品用50μl对照溶液和50μl处理 反应溶液分为两组。

艾美捷Assay Genie脂肪酸氧化 (FAO) 检测试剂盒的应用：

研究健康和病理状态（脂质代谢）的代谢途径和过程。

信号转导途径的研究。

遗传性疾病的研究，例如脂肪酸氧化障碍（FAODs）*。

心血管疾病的研究，例如心力衰竭。

胎儿发育过程中细胞能量代谢的研究。

脂肪酸氧化在癌症代谢中的影响。

*此试剂盒仅供研究使用，不能用于诊断人类疾病。

https://www.amyjet.com/products/BR00001.shtml

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马鲁肽试剂盒/司美格鲁肽试剂盒/Semaglutide ELISA

KRIBIOLISA索马鲁肽 ELISA试剂盒用于定量估计人血清和血浆中 Semaglutide 的免疫测定。

Semaglutide（商品名 Ozempic）是丹麦公司 Novo Nordisk 开发的用于治疗 2 型糖尿病的药物。它以名称 Ozempic 销售。作为胰高血糖素样肽-1 受体激动剂，它通过增加胰岛素的产生来降低血糖水平。它于 2012 年由诺和诺德 (Novo Nordisk) 的一组研究人员发现，作为利拉鲁肽的长效替代品。临床试验于 2015 年启动，3 期于 2016 年完成。2016 年 12 月申请 FDA 批准，2017 年 10 月 FDA 咨询委员会以 16-0 投票通过。它既可以作为注射剂使用，也可以作为口服剂使用。

艾美捷索马鲁肽试剂盒 / 司美格鲁肽试剂盒（KBI5030） ：

使用来自Krishgen在美国的供应商合作伙伴的抗独特型抗体，可确保更高的特异性和低交叉反应性。

回收率在 85 - 115% 之间 - 准备好与带有分离预包被孔的标准方案一起使用

根据美国 FDA 生物测定指南进行验证

针对基质效应进行了优化以确保更高的灵敏度。

保质期：1 年

Semaglutide ELISA 是一种用于测定 Semaglutide 的竞争性免疫测定法。抗 GLP-1 抗体包被在 96 孔板上。恒定浓度的生物素化 GLP-1 和不同浓度的未标记 Semaglutide 或样品竞争结合抗 GLP-1 抗体。捕获的生物素化 GLP-1 抗体随后与链霉亲和素-HRP 结合，在添加 TMB 底物后产生可溶性有色产物。通过将终止溶液分配到孔中来终止酶反应。溶液在 450 nm 处的光密度 (OD) 与标准品或样品中存在的结合 Semaglutide 分子的量成反比。

索马鲁肽试剂盒 / 司美格鲁肽试剂盒规格：

校准器范围：0 纳克/毫升-3000 纳克/毫升

敏感性：50 纳克/毫升

样品类型：血清和血浆

反应：人

运输条件：2 - 8 摄氏度

检测方法：色度

用法：仅供研究使用

研究领域：糖尿病

https://www.amyjet.com/products/KBI5030.shtml

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快速内切酶XhoI使用方法说明

快速内切酶XhoI背景：

FlyCut™ 酶是一系列能够快速消化DNA的工程限制性酶。所有FlyCut™酶在通用CutOne中显示出优异的活性™ 和CutOne™ 彩色缓冲液，能够在5~15分钟内消化DNA。这使得任何限制性酶的组合都能在一个反应管中同时工作，并消除了连续消化的需要。FlyCut™ 酶已通过多项严格的质量控制，可用于消化质粒、基因组和病毒DNA以及PCR产物。CutOne™ Color Buffer包括密度试剂以及红色和黄色跟踪染料，可以将反应混合物直接装载在凝胶上。CutOne的红色染料™ 彩色缓冲液在1%琼脂糖凝胶中与2.5kb双链DNA片段一起迁移，黄色染料在1%琼脂凝胶中与10bp双链DNA碎片一起迁移。

艾美捷快速内切酶XhoI：

Cat #: C-BSM583

Size: 500 rxns

Storage: -20°C

快速内切酶XhoI组成：

推荐反应条件：

1x CutOne“缓冲液；在37°C下培养；有关反应设置，请参阅“快速DNA消化方案”。

热灭活

在80°C下培养20分钟。

质量控制：

功能测试

A20μl在含有1μgλDNA（Hindli消化物）和1μl FlyCut’’Xhol的CutOne“缓冲液中的反应在37℃下孵育15分钟，通过琼脂糖凝胶电泳确定完全消化。

长时间培养/星形活性测定

在含有1μgλDNA（HindlI消化物）和1μl FlyCut“”Xhol的CutOne“”缓冲液中，在37℃下孵育3小时，20μl反应产生琼脂糖凝胶电泳测定的无可检测核酸酶降解的DNA模式。较长的孵化时间可能导致恒星活动。

结扎和清算

在37℃下用FlyCut“”Xhol消化10倍后，>95%的DNA片段可以在22℃下与T4 DNA配体连接。在这些连接的片段中，通过琼脂糖凝胶电泳测定，>95%可以用FlyCut“Xhol重新切割。

非特异性核酸内切酶活性

在含有1μg超螺旋质粒和1μl FlyCut“”Xhol的CutOne“”缓冲液中进行20μl反应，在37℃下培养4小时，通过琼脂糖凝胶电泳测定，转化为刻痕或线性形式的转化率<10%。

蓝/白筛选试验：

用1μl FlyCut消化含有lacZα基因的合适载体™ XhoI。将消化产物连接并转化为大肠杆菌感受态细胞。在含有X-Gal、IPTG和适当抗生素的Luria Bertani培养板上，成功连接的β-半乳糖苷酶基因可以表达并产生蓝色菌落，而中断基因（即降解的DNA末端）产生白色菌落。FlyCut™ 限制性内切酶必须产生少于1%的白色菌落。

使用方法：

1.快速DNA消化方案

① 按照指示的顺序在冰上混合反应组分

② 轻轻搅拌并向下旋转；

③在37°C下培养15分钟（质粒DNA）或15～30分钟（PCR产物）或30～60分钟（基因组DNA）；

④ 可选：在80°C下加热20分钟使酶失活；

⑤如果CutOne™ 在反应中使用颜色缓冲液，将反应混合物的等分试样直接装入凝胶中。

2.DNA的双重和多重消化

①每种酶使用1μl，并适当扩大反应条件；

②反应混合物中酶的总体积不应超过总反应体积的1/10；

③如果酶需要不同的反应温度，从需要较低温度的酶开始，然后加入第二种酶并在较高温度下孵育。

3.扩大质粒DNA消化反应

https://www.amyjet.com/products/C-BSM583-500rxns.shtml

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内切酶EcoRI, 无动物源性使用方法

内切酶EcoRI, 无动物源性背景：

经过基因工程改造的EcoRI，ADCF，能够在5~15分钟内消化DNA。它可用于鉴定质粒DNA、PCR产物和基因组。EcoRI，ADCF具有以下特点：在5到15分钟内快速消化，极好的酶活性冗余，易于处理底物过量或具有挑战性的模板消化。这种酶不含动物来源的成分

艾美捷内切酶EcoRI, 无动物源性：

Cat #: C-BSM2504S

Size: 5000 U

Storage: -20°C

内切酶EcoRI, 无动物源性组成：

单位定义：

一个单位定义为在37°C、50µL推荐反应缓冲液中1小时内消化1µgλDNA所需的EcoRI量

热灭活

在80°C下培养20分钟。

质量控制

净化

SDS-PAGE检测结果大于95%。

核酸内切酶残基

将20U的EcoRI与超螺旋质粒DNA在37°C下孵育4小时，DNA电泳中未检测到质粒的变化。

蓝/白筛选试验：

用1μl EcoRI消化含有locZa基因的合适载体。将消化产物连接并转化到大肠杆菌感受态细胞中。在含有X-Gal、IPTG和适当抗生素的Luria Bertani培养板上，成功门控的β-半乳糖苷酶基因可以表达并产生蓝色菌落，而中断的基因（即降解的DNA末端）产生白色菌落。ADCF限制性内切酶必须产生少于1%的白色菌落。

DNA酶残基

将20U的EcoRI与双链DNA在37°C下孵育16h，DNA电泳未检测到DNA的变化。

RNase残基

将20U的EcoRI与RNA在37℃下孵育1小时，电泳中未检测到RNA降解

结扎和清算

在最佳反应温度下用20U的EcoRI消化后，DNA片段可以在22°C下与T4 DNA连接酶（Fast）连接。在这些连接的片段中，通过琼脂糖凝胶电泳测定，大多数片段可以用EcoRl重新切割。

宿主DNA残基：

通过对大肠杆菌16S rDNA特异性的TaqMan-qPCR检测酶溶液中的核酸残基，检测到少于10pg的大肠杆菌基因组残基。

宿主蛋白残留：

通过ELISA测定大肠杆菌宿主蛋白低于50ppm。

无菌：

未检测到大肠杆菌。

内毒素残留量：

<10 EU/mg

https://www.amyjet.com/products/C-BSM2504S-5000U.shtml

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AF 680偶联试剂盒，出色的680nm可激发染料

AF 680偶联试剂盒背景：

FlyLink™ 染料是一系列高度水溶性的荧光染料，跨越可见光和近红外光谱，用于标记生物分子，特别是蛋白质和核酸。FlyLink™ 染料具有不同荧光染料的核心结构，覆盖了从UV到NIR的荧光光谱。对核心结构的创新修改使FlyLink™ 染料优于其他商业染料，具有许多创新的新特性。我们的试剂盒已经预先激活，可以直接用于偶联。FlyLink™ 标签套件是为准备FlyLink而设计的™直接来自蛋白质、肽和其他含有游离氨基的配体的缀合物。

艾美捷AF 680偶联试剂盒：

Cat #: D-AKE520/D-AKE530/D-AKE540/D-AKE560/D-AKE580

Size: 100 μg*3

Storage: Stored at -20°C for 6 months, protected from light

FlyLink™ 680:FlyLink™ 680是一种出色的680nm可激发染料，是Cy5.5、Dylight 680和Alexa Fluor 680的超级替代品。它是光谱相似的680nm染料中最亮的。它产生生物学上更特异的缀合物和更少的背景。

图5:FlyLink™ 680光谱图

样品制备：

待标记样品的初始浓度应高于2 mg/mL。提示蛋白浓度在2.5mg/mL以上。否则，在实验之前需要增加蛋白质浓度。待标记样品的成分（或储存缓冲液）应符合以下要求：（1）不含氨基成分，否则会影响偶联效果。（2） 少量BSA不会影响偶联效果。建议使用PBS作为存储缓冲液。（3） 如果样品中含有可能干扰标记的物质，建议用PBS代替缓冲液。具体方法如下。

将样品加入超滤膜中，加入200-150µL PBS。在12000 g、4°C、10分钟的温度下离心，然后滤出滤液。然后再次加入PBS，并在12000g，4°C，10分钟下离心。离心后，取出超滤管的内芯，将其置于干净的外管中，并在4000g，4℃，2分钟下离心以收集样品。

https://www.amyjet.com/products/D-AKE580-3.shtml

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AP偶联试剂盒的应用示例和FAQ

AP偶联试剂盒背景：

碱性磷酸酶（ALP或AKP）是一种通过水解磷酸单酯来去除底物分子上的磷酸基团并产生磷酸和游离羟基，从而使相应底物脱磷的酶。这些底物包括核酸、蛋白质、生物碱等。去除磷酸基团的过程称为去磷酸化。碱性磷酸酶是一种可以与待标记分子结合的磷酸酶。当与适当的底物孵育时，它将产生具有彩色、荧光或发光衍生物的标记分子缀合物，该缀合物可以被检测和定量分析。AP通常用于偶联物中，以确定分子靶标的存在，并经常用于ELISA、Western印迹和免疫组化。由于较高浓度的无机磷可以竞争性抑制碱性磷酸酶的活性，因此免疫实验中不应使用富含磷酸盐的PBS等系统，否则会导致高背景，可以使用TBS和其他不含磷酸盐的系统。FlyLink™ AP标记试剂盒使用戊二醛作为交联剂，通过一步法将酶抗体蛋白的氨基与戊二醛的两个醛基结合。AP可以直接标记在蛋白质、肽和其他含有游离氨基的配体上。联轴器产品可在4°C下储存一个月。

艾美捷AP偶联试剂盒：

Cat #: D-AKE110

Size: 100 μg x 3

Storage: Stored at 4°C for 6 months, protected from light

AP偶联试剂盒应用示例：

直接标记的一级抗体是有利的，因为它们消除了免疫测定程序中对二级试剂的需求，从而消除了应用中繁琐的额外培养和洗涤步骤。

图1:FlyLink示意图™ AP标签套件

适用样品：

标记生物分子，特别是蛋白质、肽和其他含有游离氨基的配体

AP偶联试剂盒FAQ：

Q1：由于抗体浓度低，反应体积超过了最佳偶联系统？

A1：如果浓缩后浓度仍低于2 mg/mL，则适当调整反应体积，但最终浓度应大于1 mg/mL。AP溶液与淬火液的比例应保持不变。

Q2：HRP分子的摩尔比只能在1:1到1:4之间？

A2：对于不同的分子，合适的摩尔比是不同的。对于抗体，我们建议它不应超过1:2。对于其他分子，你可以根据自己的要求尝试不同的口粮。

*该试剂仅用于科学研究领域，不适用于临床诊断或其他用途。

https://www.amyjet.com/products/D-AKE110-3.shtml

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生物素偶联试剂盒应用示例&FAQ

生物素偶联试剂盒背景：

生物素是一种水溶性B族维生素，分子量为244Da，由一个脲环与四氢噻吩环稠合而成。戊酸取代基连接到四氢噻吩环的一个碳原子上。生物素与阿维丁或链亲和素具有很高的亲和力，因此生物素-阿维丁系统作为一种多级信号放大系统，广泛应用于免疫检测，具有高灵敏度和强特异性。

FlyLink™ 生物素标记试剂盒设计用于直接从含有活性氨基的蛋白质、肽和其他配体制备生物素偶联物。我们试剂盒中提供的生物素已被预激活，可直接用于偶联。FlyLink™ 生物素标记试剂盒包含用于制备生物素标记分子的现成组件。

艾美捷生物素偶联试剂盒：

Cat #: D-AKE120

Size: 100 μg x 3

Storage: Stored at 4°C for 6 months, protected from light

AP偶联试剂盒应用示例：

直接标记的一级抗体是有利的，因为它们消除了免疫测定程序中对二级试剂的需求，从而消除了ELISA和Western印迹等应用中繁琐的额外培养和洗涤步骤。

图：原理图FlyLink™ 生物素标记试剂盒示意图

适用样品：

标记生物分子，特别是蛋白质、肽和其他含有游离氨基的配体

生物素偶联试剂盒FAQ：

Q1：浓缩后，样品浓度仍低于2 mg/mL？

A1：如果浓缩后样品浓度仍低于2 mg/mL，则可以适当调整标记系统的体积，但最终浓度应大于1 mg/mL。步骤（1）中生物素标记溶液的体积应为标记系统体积的10%。在步骤（2）中，可以不加入去离子水，并且活性生物素溶液的体积保持不变。你也可以根据自己的实验做出适当的调整。

Q2：如何针对待标记样品的不同分子量选择合适的纯化柱？

A2：纯化的柱适用于分子量为100KD至200KD的样品。如果样品的分子量大于200KD或小于100KD，则最好配备更合适的纯化柱尺寸。

Q3：待标记样品的分子量是否与生物素相似？

A3：如果样品的分子量与生物素相似，在完成本说明书对应的标记步骤后，加入30μL 0.5μM NH4Cl，在37°C下孵育10分钟，以猝灭游离的生物素，而无需纯化步骤。

Q4：不同分子量的分子有不同的耦合效应吗？

A4：对于分子量小于5KD的分子，偶联效果较差。你可以适当地增加分子的数量。

*该试剂仅用于科学研究领域，不适用于临床诊断或其他用途。

https://www.amyjet.com/products/D-AKE120-3.shtml