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附文献丨人蛋白C（HCPC-0070）参数说明

蛋白C(protein C, PC)是机体一种重要的依赖维生素K生理性抗凝蛋白（其辅因子蛋白S），活化蛋白C(activated protein C, APC)的主要抗凝血、抗血栓功能包括：灭活活化凝血因子V（FVa）和活化凝血因子Ⅷa活化凝血因子（FⅧa）、限制活化凝血因子Xa（FXa）与血小板结合、增强纤维蛋白溶解、增加抗凝血酶与凝血酶结合而加强抗凝。另一方面，当FV基因突变时（FV Leiden突变），可引起活化蛋白C抵抗(activated protein C resistance，APCR)，致使血栓形成。

PC检测包括：蛋白C活性(protein C activity，PC∶A)检测和蛋白C抗原检测。

艾美捷人蛋白C#HCPC-0070参数：

本地化：等离子

血浆浓度：4-5µg/ml（人）（6）

5-10µg/ml（牛）（2）

作用方式：Zymogen；丝氨酸蛋白酶激活蛋白的前体

C（APC）

分子量：62000（人）（7）

5.8万（牛）（7）

62000（鼠）-根据人类价值推断

消光系数：E1 cm，280 nm=14.5（人）（7）

=13.7（牛）（7）

=14.5（鼠）-根据人类价值推断

等电点：4.4-4.8（人）（8）

4.2-4.5（牛）（8）

结构：两条链，Mr=4100和21000，二硫键连接，

NH2-末端gla结构域两个EGF结构域

碳水化合物百分比：23%（人体）（7）

14%（牛）（7）

翻译后修饰：11个gla残基（牛），

一种β-羟基天冬氨酸

人蛋白C文献参考：

1 .  Esmon, C .T ., Progress in Thromb . and Hemostas ., 10, 25 (1984) .

2 .  Stenflo, J ., Semin . in Thromb . and Hemostas ., 10, 109 (1984) .

3 .  Walker, F .J ., et al., Biochim . Biophys . Acta, 571, 333 (1979) .

4 .  Haley, P .E ., et al., J . Biol . Chem ., 264, 16303 (1989) .

5 .  Jenny, R .J ., et al., Prep . Biochem ., 16, 227 (1986) .

6 .  Griffen, J .H ., et al.,Blood, 60, 261 (1982) .

7 .  Kisiel, W ., et al., Methods Enzymol ., 80, 320 (1981) .

8 .  Discipio, R .G ., et al., Biochemistry, 18, 899 (1979) .

9 .  Bajaj, S .P ., et al., Prep . Biochem ., 11, 397 (1981) .

10 . Kalafatis, M . et al., J . Biol . Chem ., 291, 1578 (2016)

来源：https://www.amyjet.com/products/HCPC-0070.shtml

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蛋白C相关疾病研究&人蛋白C（HCPC-0070）介绍

蛋白C的抗凝途径，作为TFPI(组织因子途径抑制物)和抗凝血酶的附属物，是凝血级联反应中另一重要抑制物。基本组成包括蛋白C和它的辅因子蛋白S，两者都是依赖维生素K的止血蛋白质，共同水解灭活凝血加速剂(因子Ⅴa和Ⅷa)。

正常值:

PC活性 70%～140%

PC浓度 70%～140%(3～6mg/L)

可疑因子Ⅴ莱顿 正常蛋白C活化率≤0.8

高于正常值：

升高：游离蛋白S浓度降低引起C4b结合蛋白浓度增高，即蛋白S总浓度和活性正常而游离蛋白S抗原浓度和活性降低。

低于正常值：

降低：蛋白C、蛋白S活性降低与临床有关，其遗传缺陷有两种形式。

Ⅰ型：由于合成减少使两种蛋白浓度和活性降低。

Ⅱ型：存在无功能蛋白，即浓度正常而活性显著降低。

蛋白C相关疾病研究：

小儿出血性疾病

血栓性血小板减少性紫癜

妊娠合并血栓性疾病

遗传性蛋白S缺陷症

抗活化的蛋白C症

蛋白C检查作用：

蛋白C检查对血栓形成的诊断有辅助作用。

蛋白C检查过程：

蛋白C浓度测定(免疫化学)与蛋白C活性测定方法(生理止血活性)是不同的。在某些条件下如急性反应期，两种方法结果不一致。　　

(1)酶免法：测定蛋白C抗原浓度。　

(2)凝固法：在凝固法中，测定目标为蛋白C抗凝活性，即对因子Ⅷa和因子Ⅴa灭活能力。　

(3)氨基溶解法：这种方法是用发色底物来测定蛋白C酶活性。与凝固法不同是磷脂结合部位发生改变，如口服抗凝药治疗时较明显，不产生任何影响。

艾美捷人蛋白C#HCPC-0070相关介绍：

血浆浓度：4-5µg/ml（人）（6）

5-10µg/ml（牛）（2）

作用方式：Zymogen；丝氨酸蛋白酶激活蛋白的前体

C（APC）

分子量：62000（人）（7）

5.8万（牛）（7）

62000（鼠）-根据人类价值推断

消光系数：E1 cm，280 nm=14.5（人）（7）

=13.7（牛）（7）

=14.5（鼠）-根据人类价值推断

等电点：4.4-4.8（人）（8）

4.2-4.5（牛）（8）

结构：两条链，Mr=4100和21000，二硫键连接，

NH2-末端gla结构域两个EGF结构域

碳水化合物百分比：23%（人体）（7）

14%（牛）（7）

翻译后修饰：11个gla残基（牛），

一种β-羟基天冬氨酸

人蛋白C文献参考：

1 .  Esmon, C .T ., Progress in Thromb . and Hemostas ., 10, 25 (1984) .

2 .  Stenflo, J ., Semin . in Thromb . and Hemostas ., 10, 109 (1984) .

3 .  Walker, F .J ., et al., Biochim . Biophys . Acta, 571, 333 (1979) .

4 .  Haley, P .E ., et al., J . Biol . Chem ., 264, 16303 (1989) .

5 .  Jenny, R .J ., et al., Prep . Biochem ., 16, 227 (1986) .

6 .  Griffen, J .H ., et al.,Blood, 60, 261 (1982) .

7 .  Kisiel, W ., et al., Methods Enzymol ., 80, 320 (1981) .

8 .  Discipio, R .G ., et al., Biochemistry, 18, 899 (1979) .

9 .  Bajaj, S .P ., et al., Prep . Biochem ., 11, 397 (1981) .

10 . Kalafatis, M . et al., J . Biol . Chem ., 291, 1578 (2016)

来源：https://www.amyjet.com/products/HCPC-0070.shtml

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艾美捷蛋白C&活化蛋白C解决方案

蛋白C（protein C，PC）是一种维生素K依赖性酶原，主要在肝脏中合成，在生理情况下，凝血酶-血栓调节蛋白复合物可水解蛋白C,形成活化蛋白C(Activated Protein C, APC),APC主要作用是活化后可灭活凝血因子Ⅷa与凝血因子Ⅴa，抑制血液凝固。  

蛋白C相关研究:

HCPC-0070 Human Protein C 人蛋白C

BCPC-1070 Bovine Protein C 牛蛋白C

MCPC-5070 Mouse Protein C 小鼠蛋白C

活化蛋白C相关研究:

HCAPC-0080 Human Activated Protein C 人活化蛋白C

HCAPC-DEGR Human Actitated Protein C-DEGR 人活化蛋白C(活性部位阻断)

BCAPC-1080 Bovine Activated Protein C 牛活化蛋白C

BCAPC-DEGR Bovine Activated Protein C-DEGR 牛活化蛋白C(活性部位阻断)

MCAPC-5080 Mouse Activated Protein C 小鼠活化蛋白C

条带依次为1ug(NR非还原)，Marker，1ug(R还原) marker条带从上至下为：191kDa, 97kDa, 64kDa, 51kDa, 39kDa, 28kDa, 19kDa, 14kDa

来源：https://www.amyjet.com/brand/protein-c.shtml

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BioXCell 多种不同的抗小鼠PD-1体内抗体克隆方案

PD1(programmed cell death 1,PD-1/CD279)是一种单体糖蛋白，由288个氨基酸残基组成，分子量约为50~55kDa，也称为程序性死亡受体1，是激活型T细胞的一种表面受体。目前被证实的PD1配体有两个，分别是程序性死亡配体1(programmed cell death ligand 1,PD-L1/B7-H1)和PD-L2(programmed cell death ligand 2,PD-L1/B7-DC)，其中PD-L1的调控作用最为突出。许多肿瘤细胞高表达PD-L1分子，其与PD-1分子结合后，会激活PD-1信号通路，使T细胞功能受损，致使T细胞杀伤作用显著降低，肿瘤细胞得以趁机逃脱。而PD-1抗体可通过与PD-1的特异性结合，阻断PD-L1与PD-1 的结合，从而使免疫系统能够发现并杀死肿瘤细胞。

艾美捷BioXCell拥有多种不同的抗小鼠PD-1体内抗体克隆：RMP1-14、29F.1A12和J43，这三种抗体都可通过与 PD-1 结合，在空间上阻断 PD-1 与 PD-1 配体的结合，从而阻断PD-1信号（如上图所示）。

克隆号 RMP1-14 29F.1A12 J43

货号 BE0146 BE0273 BE0033-2

亚型 IgG2a, κ IgG2a IgG

应用 体内阻断PD-1/PD-L信号 体内阻断PD-1/PD-L信号，体外PD-1中和，IHC(冰冻)，IF，WB，FC 体内阻断PD-1/PD-L信号，体外PD-1中和，WB

免疫原 用小鼠PD-1 cDNA转染叙利亚仓鼠BKH细胞 PD-1-Ig融合重组蛋白 用小鼠PD-1 cDNA转染叙利亚仓鼠BKH细胞

纯度 >95% >95% >95%

同型对照 BE0089 BE0089 BE0091

稀释缓冲液 IP0070 IP0070 IP0065

PD-1体内抗体选择建议：

BE0146在体内阻断 PD-1 信号方面发表文献最多。但是BE0146应用仅限于体内阻断 PD-1/PD-L 信号传导。BE0273在体内PD-1 阻断方面也有比较多的发表文献，且也可用于体外PD-1 中和、IHC，IF，WB，FC等体外应用。BE0033-2在体内阻断PD-1/PD-L信号也有很多参考文献（不过跟BE0146和BE0273比起来相对较少），也可用于体外PD-1 中和、WB。如果除了进行体内实验，还需要进行体外实验的研究人员可以选择BE0273或者BE0033-2。

来源：https://www.amyjet.com/brand/4637.shtml

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GelRed核酸染料：无毒，灵敏度高、信噪比高

溴化乙锭（Ethidium bromide，EB）是应用早且成熟的核酸染料，并且由于其价格便宜、灵敏度高，早期被实验者广泛应用。但其分子量小，很轻易就能穿透细胞膜，属于诱变剂，具有高致癌性，对人体潜在危害非常大。实验者使用时需要谨慎再谨慎。

Biotium的GelRed（红色）和GelGreen（绿色）是荧光染料领域高灵敏、低毒性和超安全的荧光核酸凝胶染色试剂。它可替代溴化乙锭（EB），并且灵敏度远高于EB，同时不需要脱色处理。由于GelRed和EB有相同的光谱特性，因此用它替代EB时不需要更换成像系统。

GelRed既可用于预制凝胶也可用于电泳后染色。通常电泳后染色的灵敏度更高，并能排除染料对DNA迁移的干扰 。使用 GelRed进行电泳后染色，操作简单，不需要脱色和特殊溶液。只要将染料稀释在0.1M NaCl 中，并将凝胶置于染色液中，30分钟后就可以观察。染色液在室温下极为稳定，可以多次反GelRed&GelGreen,GelRed核酸染料,Biotium复使用。相比而言，预制凝胶由于不需要额外染色过程，因此染料用量更少，更为简单经济。

艾美捷GelRed核酸染料的特点：

Gelred其水溶染色剂通过美国环保局安全认定，废弃物可直接倒入下水道，而不会造成任何环境污染。  

GelRed核酸染料主要特点：

无 毒 性：GelRed独特的油性和大分子量特点使其不能穿透细胞膜进入细胞内，艾姆斯氏试验结果也表明，该染料的诱变性远小于EB。其水溶染色剂通过美国环保局安全认定，废弃物可直接倒入下水道，而不会造成任何环境污染。

灵敏度高：适用于各种大小片段的电泳染色，对核酸迁移的影响小于SYBR Green I。

稳定性高： 可以使用微波炉加热，可以在室温下保存。

信噪比高：样品荧光信号强，背景信号低。

操作简单：与EB一样，在预制胶和电泳过程中不必担心染料降解；而电泳后染色过程也只需30分钟且无需脱色或冲洗 ，即可直接用紫外凝胶透射仪观察。

适用范围广：适用于预制凝胶（胶染法）和凝胶电泳后染色（泡染法）。

与标准凝胶成像系统完美兼容 ：使用 312nm 激发的UV凝胶成像系统时， GelRed可以完美的替代EB。

来源：https://www.amyjet.com/featured/gelredgelgreen.shtml

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GelRed&GelGreen核酸染料：超灵敏DNA染料易于处理

GelRed和GelGreen是安全的核酸凝胶染料，旨在取代高度有毒的溴乙酸乙酯(EtBr)和其他所谓的安全凝胶染料。这些凝胶染料由于细胞膜不可渗透而是无毒和无致突变性的。Ames试验确认GelRed和GelGreen在远高于用于凝胶染色的浓度时是无致突变性的。此外，环境安全测试表明GelRed和GelGreen对水生生物是无毒的，可以通过下水道或普通垃圾处理。

艾美捷GelRed&GelGreen核酸染料

——超灵敏DNA染料易于处理

● 比ETBR更安全

比EtBr和SYBRSafe灵敏得多。

通过了排放到下水道或普通垃圾中的环境安全测试。

经Ames试验和其他试验证明无致突变性和无细胞毒性。

● 广泛的仪器兼容性极其稳定

● 应用灵活性

用于预制或电泳后染色。

使用GelRed的UV和EtBr设置。

GelRed⑧和GelGreenDNA染料在室温下稳定，可长期储存。

对带有SYBR③设置的GelGreen⑧使用UV或蓝色LED。兼容克隆和测序。

您的凝胶染料有多安全？

许多溴化乙锭 (EtBr) 替代品作为安全产品在市场上销售。事实上，许多所谓的“安全”凝胶染料含有众所周知的染料，可以结合活细胞中的 DNA，具有细胞毒性作用。GelRed 和 GelGreen 是高度敏感的凝胶染色剂，由于不透细胞膜，因此设计为无毒和无致突变性，因此它们不能进入活细胞。

EtBr、SYBR Safe 和其他产品的更安全替代品

几十年来，EtBr 一直是用于核酸染色的主要染料，因为它价格低廉且通常具有足够的灵敏度。然而，EtBr 是一种高度致突变物质。与去污和废物处理相关的安全隐患和成本最终会使核酸染料的使用变得昂贵。出于这个原因，近年来，各种溴化乙锭替代 DNA 凝胶染料已在市场上销售。尽管这些可供选择的核酸染色染料在市场上以低诱变性销售，但它们通常不得不牺牲染料的其他方面。例如，SYBR Safe 的灵敏度非常有限，而 SYBR Green 和 SYBR Gold 的稳定性远低于 EtBr。此外，许多所谓的“安全”DNA 染料，如 Midori Green、GreenSafe、SafeView™ 和 RedSafe™，不仅灵敏度低，但也很容易穿透活细胞与 DNA 结合，有些具有细胞毒性。

GelRed 和 GelGreen 不容易穿透细胞。HeLa 细胞在 37°C 下与 1X SYBR Safe、GelRed 或 GelGreen 孵育 30 分钟。SYBR Safe 快速结合活细胞中的 DNA，导致亮绿色核染色。GelRed 和 GelGreen 无法结合活细胞中的 DNA，表现为没有荧光无毒、无诱变性、处置无害。

为了使 GelRed 和 GelGreen 安全，Biotium 的科学家使用了一个新颖但非常简单的概念：通过防止染料进入活细胞来降低基因毒性。我们相信，通过拒绝其与活细胞中的基因组 DNA 接触的机会，可以使 DNA 结合染料不致突变或基本上不致突变。因此，我们设计了 GelRed 和 GelGreen 的化学结构，使染料无法穿过细胞膜。Ames 测试证实 GelRed 和 GelGreen 在远高于其用于凝胶染色的工作浓度的浓度下是非诱变性的。此外，环境安全测试表明，GelRed 和 GelGreen 对水生生物无害且无毒。因此，GelRed 和 GelGreen 可以丢弃到下水道或扔进普通垃圾桶。

来源：https://www.amyjet.com/featured/gelredgelgreen.shtml

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GelRed&GelGreen核酸染料：比 EtBr、SYBR Safe更灵敏

事实上，许多所谓的“安全”凝胶染料含有众所周知的染料，可以结合活细胞中的 DNA，具有细胞毒性作用。GelRed 和 GelGreen 是高度敏感的凝胶染色剂，由于不透细胞膜，因此设计为无毒和无致突变性，因此它们不能进入活细胞。

为了使 GelRed 和 GelGreen 安全，Biotium 的科学家使用了一个新颖但非常简单的概念：通过防止染料进入活细胞来降低基因毒性。我们相信，通过拒绝其与活细胞中的基因组 DNA 接触的机会，可以使 DNA 结合染料不致突变或基本上不致突变。因此，我们设计了 GelRed 和 GelGreen 的化学结构，使染料无法穿过细胞膜。Ames 测试证实 GelRed 和 GelGreen 在远高于其用于凝胶染色的工作浓度的浓度下是非诱变性的。此外，环境安全测试表明，GelRed 和 GelGreen 对水生生物无害且无毒。因此，GelRed 和 GelGreen 可以丢弃到下水道或扔进普通垃圾桶。

GelGreen、GelRed、SYBR Green I 和 EtBr 在 +1 移码沙门氏菌指示菌株 TA98 中的致突变性比较，其中存在 S9 组分。* 表示 EB 未在此浓度下进行测试。# 表示 SYBR Green I 在此浓度下有毒。

GelRed 和 GelGreen 作为预制凝胶染色剂或凝胶后染色剂都非常敏感。GelRed 比 EtBr 敏感得多，并且与 SYBR Gold 不同，GelRed 还可以用作高度敏感的预制凝胶染料。GelRed 也可用作方便的预染上样缓冲液。GelGreen 的光谱与 SYBR Safe 相似，但灵敏度更高，可与 DarkReader 等蓝光凝胶成像系统一起使用。PAGE GelRed 专为丙烯酰胺凝胶中的 DNA 染色而设计。GelRed 和 GelGreen DNA 染料的另一个主要优势是它们卓越的稳定性。您可以像处理 EtBr 一样存储和处理这两种核酸染色染料。为方便起见，GelRed 和 GelGreen 也提供预包被的琼脂糖形式。

艾美捷GelRed&GelGreen核酸染料特征：

比 EtBr、SYBR Safe 和其他产品更灵敏

用于预制或后染色

兼容下游克隆和测序

GelRed 提供 6X 上样缓冲液形式

用于丙烯酰胺凝胶的 PAGE GelRed

GelRed：使用紫外透照仪和 EtBr 过滤器

GelGreen：使用 UV 或蓝色 LED 和 SYBR 过滤器，或我们的新型 Gel-Bright™ LED 照明器

为您的应用选择合适的染色剂：

产品/方法 程序 好处 缺点 推荐给

使用GelRed Prestain Plus 6X DNA Loading Dye进行 DNA 预染色 GelRed 加载缓冲液在加载前直接添加到 DNA 样本中 • 快速简单：一步上样和 DNA 染色

• 染料浓度较低，操作更安全

• 可以重新运行凝胶以使用空泳道

• 不推荐用于 PAGE、DGGE、EMSA 或 PFGE 凝胶

• 上样大量 DNA（超过 ~100 ng/条带）或某些限制性消化时，染料可能会导致条带迁移问题

• 常规琼脂糖凝胶

• 建议加载 50-200 ng ladder 或 2-5 uL PCR 产物（~100 ng/条带或更少）

使用GelRed 10,000X 水溶液或GelGreen 10,000X 水溶液进行预制染色

GelRed 或 GelGreen 在凝胶浇铸前与熔化的琼脂糖混合 熟悉的协议，快速的结果

使用GelRed Agarose LE或GelGreen Agarose LE进行预制染色

提供的琼脂糖预涂有 GelRed 或 GelGreen，只需溶解、加热和倾倒 更安全更方便，无需处理浓缩染料

使用GelRed 10,000X 水溶液或GelGreen 10,000X 水溶液

或 – GelRed 3X 水溶液进行电泳后染色

凝胶中不添加荧光染料，电泳后在 3X GelRed 或 3X GelGreen 溶液中染色

• 最准确的大小/最清晰的条带

• 染色溶液可重复使用

• 通过添加 NaCl 提高灵敏度 电泳后额外的染色步骤（最多 30 分钟）（一些客户报告说如果染料不重复使用，仅 5 分钟后结果良好）

• 高度准确的条带大小

• 凝胶中每条带含有超过 ~100 ng DNA

• 分析限制性酶切

使用PAGE GelRed 10,000X 或 1X 水溶液对 PAGE 凝胶进行电泳后染色 凝胶中不添加荧光染料，电泳后在1X PAGE GelRed溶液中染色

• 专为聚丙烯酰胺凝胶的高效渗透和染色而设计

• 与经典的 GelRed 一样，安全且环保 大约额外的染色步骤。电泳后30分钟 PAGE 凝胶中的核酸染色

来源：https://www.amyjet.com/featured/gelredgelgreen.shtml

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GelRed&GelGreen：灵敏度碾压EtBr、SYBR Safe

几十年来，EtBr 一直是用于核酸染色的主要染料，因为它价格低廉且通常具有足够的灵敏度。然而，EtBr 是一种高度致突变物质。与去污和废物处理相关的安全隐患和成本最终会使核酸染料的使用变得昂贵。出于这个原因，近年来，各种溴化乙锭替代 DNA 凝胶染料已在市场上销售。尽管这些可供选择的核酸染色染料在市场上以低诱变性销售，但它们通常不得不牺牲染料的其他方面。例如，SYBR® Safe 的灵敏度非常有限，而 SYBR® Green 和 SYBR® Gold 的稳定性远低于 EtBr。此外，许多所谓的“安全”DNA 染料，如 Midori Green、GreenSafe、SafeView™ 和 RedSafe™，不仅灵敏度低，但也很容易穿透活细胞与 DNA 结合，有些具有细胞毒性。

溴化乙锭 (EtBr) 和 GelRed® 在预制凝胶染色中的比较，使用 TBE 缓冲液中的 1% 琼脂糖凝胶。1 kb Plus DNA Ladder (Invitrogen) 的两倍系列稀释液从左到右以 200 ng、100 ng、50 ng 和 25 ng 的量加载。使用 300 nm 透照仪对凝胶成像，并使用 EtBr 滤光片拍照。GelGreen® 是 SYBR® Safe 无法比拟的（图1）

图1：GelGreen® 和 SYBR Safe 在 1% 琼脂糖/TBE 凝胶电泳后染色的比较。1 kb Plus DNA Ladder (Invitrogen) 的两倍连续稀释（200 ng、100 ng、50 ng 和 25 ng）。使用 254 nm 紫外透照仪对凝胶成像，并使用 SYBR 滤光片拍照。:

图2：GelRed® 和 GelGreen® 与 DNA 的激发和发射光谱。

艾美捷GelRed&GelGreen核酸染料：

产品名称 目录编号 尺寸

GelRed® 10,000X 水中 41003-T 0.1 毫升（试用装）

41003 0.5 毫升

41003-1 10毫升

GelGreen® 10,000X 水中 41005 0.5 毫升

41005-1 10毫升

GelRed® 3X 水溶液 41001 4 公升

6X GelRed® Prestain 上样缓冲液，橙色示踪染料 41010 1毫升

GelRed® Prestain Plus 6X DNA 上样染料 41011 1毫升

GelRed® 琼脂糖 LE 41029-5G 5克

41029-50G 50克

GelGreen® 琼脂糖 LE 41030-5G 5克

41030-50G 50克

来源：https://www.amyjet.com/featured/gelredgelgreen.shtml