来宝网 2023/7/3点击484次
艾美捷人蛋白C（HCPC-0070）解决方案
人蛋白C背景：
维生素K依赖性酶原C蛋白在肝脏中合成为单链多肽，随后通过从前体分子。在血浆中观察到痕量的单链形式。轻链负责蛋白C与磷脂囊泡的钙依赖性结合，包含11个g-羧基谷氨酸(gla)残基、1个b-羟基天冬氨酸残基和2个表皮生长因子(EGF)同源结构域。丝氨酸催化三联体位于重链中，已鉴定出其中的2种形式。形式“a”和“b”已显示存在一个糖基化位点的差异，但未观察到“a”和“b”之间的功能区别。人C蛋白重链Arg-12（牛中的 Arg-14）的单次切割将酶原转化为丝氨酸蛋白酶，活化的C蛋白。这种切割由α- 凝血酶和内皮细胞表面之间的复合物催化 蛋白凝血调节蛋白。与其他维生素K依赖性凝血因子不同，活化蛋白通过催化因子Va和VIIIa的蛋白水解失活而起到抗凝血剂的作用。APC还通过与纤溶酶原激活剂抑制剂形成复合物来促进纤维蛋白溶解反应。牛蛋白C是通过修改Walker程序从新鲜的柠檬酸盐牛血浆制备的，如Haley等人所述使用常规层析技术从新鲜冷冻的柠檬酸盐血浆中制备小鼠蛋白C。使用免疫亲和层析和常规技术的组合从新鲜冷冻的柠檬酸盐人血浆中制备人蛋白C。蛋白C以50%（体积/体积）甘油/水的形式提供，应储存在-20°C下。通过SDS-PAGE分析确定纯度，并使用基于显色底物的测定法测量活性。
艾美捷人蛋白C#HCPC-0070参数：
本地化：等离子
血浆浓度：4-5µg/ml（人）（6）
5-10µg/ml（牛）（2）
作用方式：Zymogen；丝氨酸蛋白酶激活蛋白的前体
C（APC）
分子量：62000（人）（7）
5.8万（牛）（7）
62000（鼠）-根据人类价值推断
消光系数：E1 cm，280 nm=14.5（人）（7）
=13.7（牛）（7）
=14.5（鼠）-根据人类价值推断
等电点：4.4-4.8（人）（8）
4.2-4.5（牛）（8）
结构：两条链，Mr=4100和21000，二硫键连接，
NH2-末端gla结构域两个EGF结构域
碳水化合物百分比：23%（人体）（7）
14%（牛）（7）
翻译后修饰：11个gla残基（牛），
一种β-羟基天冬氨酸
人蛋白C文献参考：
1 . Esmon, C .T ., Progress in Thromb . and Hemostas ., 10, 25 (1984) .
2 . Stenflo, J ., Semin . in Thromb . and Hemostas ., 10, 109 (1984) .
3 . Walker, F .J ., et al., Biochim . Biophys . Acta, 571, 333 (1979) .
4 . Haley, P .E ., et al., J . Biol . Chem ., 264, 16303 (1989) .
5 . Jenny, R .J ., et al., Prep . Biochem ., 16, 227 (1986) .
6 . Griffen, J .H ., et al.,Blood, 60, 261 (1982) .
7 . Kisiel, W ., et al., Methods Enzymol ., 80, 320 (1981) .
8 . Discipio, R .G ., et al., Biochemistry, 18, 899 (1979) .
9 . Bajaj, S .P ., et al., Prep . Biochem ., 11, 397 (1981) .
10 . Kalafatis, M . et al., J . Biol . Chem ., 291, 1578 (2016)
来源：https://www.amyjet.com/products/HCPC-0070.shtml
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艾美捷牛活化蛋白C（BCAPC-1080）解决方案
牛活化蛋白C背景：
活化蛋白C(APC)是一种抗凝血丝氨酸蛋白酶，来源于双链维生素K依赖性酶原蛋白C。α-凝血酶和凝血调节蛋白之间的复合物催化蛋白C重链中Arg-12（牛中的 Arg-14）的单次切割，以生成APC。几种非生理相关的蛋白酶，如RVV-X激活剂、胰蛋白酶和PROTAC也能够激活蛋白C。APC作为抗凝剂起作用，催化辅助因子、因子Va和VIIIa的蛋白水解失活，从而抑制凝血酶原和Xase因子复合物。因子 Va和VIIIa的失活依赖于Ca2+和磷脂。维生素K依赖性辅助因子蛋白S通过与APC形成1:1复合物(Kd=6x10-9M)适度增加这种失活率。有几个因素会减弱 APC 的抗凝血活性。因子Xa通过竞争因子Va上的相似结合位点来保护因子Va免受APC的蛋白水解作用。凝血酶也被提议通过蛋白S的蛋白水解失活来调节 APC。依赖性蛋白C抑制剂 (PAI-3)、循环肝素非依赖性蛋白C抑制剂、血小板衍生蛋白C抑制剂和PAI-1。据报道，APC与两种类型的 PAI之间形成的复合物可解释输注APC或体内APC生成时观察到的纤维蛋白溶解增加。也可以使用氯甲基酮。活化的C蛋白是通过用凝血酶活化然后通过离子交换层析从纯化的C蛋白制备的。APC以50%（体积/体积）甘油/水的形式提供，应储存在-20°C下。通过 SDS-PAGE 分析确定纯度，并使用显色底物测定法测量活性。根据APC抗性测定的要求，还测试了所有 APC 生产批次延长正常人血浆 aPTT 的能力。该测试的结果以aPTT (+/- APC)比率(10nM APC) 的形式提供给每批次。
艾美捷牛活化蛋白C#BCAPC-1080参数：
本地化：等离子
作用方式：抗凝，灭活因子Va和VIIIa
分子量：56200（人）（5）
52650（牛）（5）
56200（鼠）-根据人类价值推断
消光系数：E1 cm，280 nm=14.5（人）（5）
=13.7（牛）（5）
=14.5（鼠）-根据人类价值推断
等电点：4.4-4.8（人）（9）
4.2-4.5（牛）（9）
结构：两条链，Mr=35000和21000，二硫键连接，
NH2-末端gla结构域两个EGF结构域
碳水化合物百分比：23%（人体）（5）
14%（牛）（5）
翻译后修饰：11个gla残基（牛），
一种β-羟基天冬氨酸
免费荧光基质：HTI目录号SN-54和SN-59
牛活化蛋白C文献参考：
1 . Kalafatis, M ., and Mann, K .G ., J . Biol . Chem ., 268, 27246 (1993) .
2 . Kalafatis, M ., et al., J . Biol . Chem ., 269, 31869 (1994) .
3 . Esmon, C .T ., Progress in Thromb . and Hemostas ., 10, 25 (1984) .
4 . Esmon, C .T ., J . Biol . Chem ., 264, 4743 (1989) .
5 . Kisiel, W ., et al., Methods Enzymol ., 80, 320 (1981) .
6 . Stenflo, J ., Semin . in Thromb . and Hemostas ., 10, 109 (1984) .
7 . Marlar, R .A ., Semin . in Thromb . and Hemostas ., 11, 387 (1985) .
8 . Walker, F .J ., et al., J . Biol . Chem ., 256, 11128 (1981) .
9 . Discipio, R .G ., et al., Biochemistry, 18, 899 (1979) .
10 . Dahlback, B ., and Hildebrand, B ., Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 91, 1396 (1994) .
11 . Svensson, P .J ., and Dahlback, B ., New Engl . J . Med ., 330, 517 (1994) .
来源：https://www.amyjet.com/products/BCAPC-1080.shtml
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艾美捷抗原修复液：简化 HIER 优化、无毒不易燃
AntiFix™ 通用抗原修复缓冲液专为福尔马林固定石蜡包埋 (FFPE) 组织的热诱导表位修复 (HIER) 而设计。该缓冲液使用专有试剂催化 FFPE 组织中甲醛交联的逆转以恢复抗原反应性。
艾美捷抗原修复液#BTM-22030特征：
在中性 pH 条件下对多种靶标进行出色的抗原修复
简化 HIER 优化
通过使用酪胺扩增的荧光染色进行验证
无毒不易燃
用福尔马林（甲醛）固定组织可以保留组织形态，但甲醛引起的蛋白质交联可以修饰抗体结合位点或表位，因此免疫组织化学无法再检测到它们。传统上，通过使用蛋白酶处理或通过在低 pH 柠檬酸盐缓冲液或高 pH Tris 缓冲液中加热载玻片来恢复表位反应性。不同表位的最佳去掩蔽方法各不相同，需要针对不同靶标使用多种缓冲液。
AntiFix™ 通用抗原修复缓冲液经过精心配制，可在中性 pH 条件下为各种靶标提供出色的热暴露，从而减少对缓冲液优化的需求。它已在使用 HRP 介导的酪胺信号放大的下一代荧光 CF® 染料对 FFPE 组织进行免疫荧光染色时得到验证。
抗原检索方案：
注：FFPE切片应烘焙在带正电的幻灯片上，以避免抗原回收过程中的组织损失
1.使用标准方案对FFPE切片进行除石蜡和再水合。
2.将幻灯片放入Coplin罐子或微波炉保险柜内的幻灯片架中
容器注意：微波会导致玻璃罐破裂。集装箱应在使用前测试耐热性。
3.准备1X AntiFix™ 组合1的通用抗原回收缓冲液体积为10X的缓冲液，含9体积的dH2O并完全混合。
4.添加足够的1X AntiFix™ 缓冲液以完全覆盖组织切片。通常，缓冲区被添加到磨砂幻灯片标签的级别。典型的5载玻片的Coplin玻璃罐的体积为40 mL，24载玻片的体积为200 mL架子染色皿。
5.加热缓冲区中的幻灯片。使用微波的两种加热方法（a）或下面描述多功能炊具（b）。微波是一种由来已久的技术HIER方法。一种带数字温度控制的厨房多功能锅（例如，Instant Pot®）是微波炉的一种方便的替代品。其他加热HIER常用的方法（如热水浴或商业倾斜室）。
注：用于纸巾加工的厨房设备应为专用设备用于研究实验室，根据您的要求贴上生物危害标签机构或地方法规。
a） 使用微波炉：保持载玻片容器未覆盖或松散覆盖以避免压力积聚。用微波炉加热幻灯片，直到缓冲液沸腾了。持续监控集装箱，继续煮10分钟，根据需要每30-60秒停止一次微波炉以防止缓冲液沸腾。煮沸10分钟后，让容器冷却至室温。
b） 使用多功能锅：放置随锅里的炊具。将滑动容器盖松以避免压力积聚。将滑动容器放在支架上，确保其固定安全地避免倾倒。把锅里装满水，使水位达到一半向上滑动容器。关上锅盖，在98°C下加热45分钟没有压力。热处理完成后，小心地移除将容器从锅中的热水中取出，冷却至室温温度
6.用dH2冲洗载玻片3次O完全移除缓冲区。
7.根据您的方案进行染色。
抗原修复液相关研究：
来源：https://www.amyjet.com/products/BTM-22030-50mL.shtml
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艾美捷免疫组化笔 SuperHT PAP Pen使用方法介绍
免疫组化笔 SuperHT PAP Pen在载玻片上的组织周围画一个防水圆圈，并通过将液体保持在单个液滴中来防止宝贵试剂的浪费。
艾美捷免疫组化笔 SuperHT PAP Pen#BTM-22006特征：
在载玻片上的组织样本周围绘制防水屏障
保存珍贵的抗体和试剂
屏障不溶于水性缓冲液、洗涤剂、酒精和丙酮
阻隔层在高达 120°C 的温度下保持稳定
笔含有疏水性有机溶剂
常规尺寸：4 毫米尖端，约 800 次应用
迷你尺寸：2.5 毫米尖端，约 400 次应用
免疫组化笔 SuperHT PAP Pen屏障不溶于水性缓冲液、清洁剂、酒精和丙酮，但可以用二甲苯去除。屏障在高达 120°C 的温度下是稳定的。
免疫组化笔 SuperHT PAP Pen使用方法：
第一次使用前，用阻隔液填充尖端。将尖端向下压在干净的玻璃杯上显微镜载玻片打开尖端瓣膜（图1）。继续往下压，直到看到尖端完全充满绿色液体。尖端一到就停止按压完全填充。石蜡脱蜡和再水化后应设置屏障章节。对于冷冻切片，在第一次切片之前，在幻灯片干燥时创建屏障缓冲培养步骤。若要创建屏障，请使用棉签（如有必要）。在部分（图2）。拉出挡板时，不要向下按压阀门。小心以防止Pap-Pen液体接触组织切片。让屏障干燥在浸入幻灯片或添加缓冲液之前15-30秒。立即干燥该区域如有必要，在屏障外添加刚好足够的缓冲液以填充屏障溢出。一个正方形的Parafilm®可以放在要展开的部分的顶部缓冲液均匀，防止蒸发。对于过夜孵育，载玻片应放置在加湿室中以防止蒸发。
图1：第一次使用前先填充笔尖。A、 笔尖包装干燥。B、 新闻提示向下靠在显微镜载玻片上，直到尖端完全充满绿色液体（C）。
图2：制造障碍。A、 在剖面周围画一个不间断的圆圈用巴氏笔。B、 将缓冲液移液到屏障中。添加足够的缓冲区填充屏障而不溢出（C）。
来源：https://www.amyjet.com/products/BTM-22006.shtml
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TSA试剂盒：HRP Goat Anti-Mouse and CF488A特征及常见问题
该试剂盒包含使用山羊抗小鼠 HRP 二抗和荧光 CF® 染料或生物素进行酪胺信号放大 (TSA) 以增加免疫荧光信号的试剂。
艾美捷TSA试剂盒：HRP Goat Anti-Mouse and CF488A特征：
将灵敏度提高多达 100 倍
使用较低的一抗浓度
增强挑战性样品中的信号，例如人类 FFPE 组织
从 6 种明亮且耐光的 CF® 染料或生物素中选择
TSA试剂盒：HRP Goat Anti-Mouse and CF488A组件：
CF® 染料或生物素-酪胺原液
HRP 山羊抗小鼠 IgG(高度交叉吸附)
BSA 用于阻塞
Tyramide Amplification Buffer Plus *
30% 过氧化氢*
酪胺扩增，有时也称为催化报告基因沉积 (CARD)，是一种酶介导的检测方法，它利用辣根过氧化物酶 (HRP) 的催化活性原位产生靶蛋白或核酸序列的高密度标记。据报道，与传统的亲和素-生物素检测相比，酪胺扩增方法的灵敏度提高了 100 倍。可进行多轮酪胺信号放大，进行多重检测；要了解更多信息，请参阅我们的技术提示：使用酪胺扩增试剂盒进行多色荧光成像。了解有关酪胺信号放大的更多信息。
试剂盒中提供的 HRP 山羊抗小鼠抗体已吸附牛、马、人、兔和猪血清，以最大限度地减少交叉反应；该抗体不会与大鼠交叉吸附。该试剂盒包括您选择的 6 CF® 染料酪酰胺或生物素酪酰胺。CF® 染料是 Biotium 的下一代荧光染料系列，与其他染料相比，在亮度和光稳定性方面具有优势。了解有关CF® 染料的更多信息。
另请参阅Biotium的带有 HRP 山羊抗兔的酪胺扩增试剂盒和带有 HRP 链霉亲和素的酪胺扩增试剂盒。
每个试剂盒包含用于染色 50-150 张玻片的试剂；可染色的实际样本数量取决于所使用的染色体积。
TSA试剂盒：HRP Goat Anti-Mouse and CF488A：
常见问题：
Biotium大多数产品在室温下可稳定保存数日，因此产品很可能仍能正常工作。为了安全起见，建议在处理大量样品或珍贵样品之前，先进行小规模的阳性对照实验，以确认该产品仍然适用于您的应用。
Biotium知道的一个例外是 GelGreen™，它比 Biotium大多数其他荧光染料对光照更敏感。如果 GelGreen™ 长时间（数天至数周）暴露在环境光下，其颜色将从深橙色变为砖红色。如果发生这种情况，GelGreen 将不再适用于凝胶染色。
来源：https://www.amyjet.com/products/BTM-33000.shtml
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艾美捷IHC底物：HIGHDEF DAB Chromogen实例展示
HIGHDEF®DAB色原/底物组可与基于过氧化物酶的免疫染色系统结合使用。来自抗体检测系统的过氧化物酶与过氧化氢底物反应使其降解，然后与DAB反应，使其沉淀在阳性位点并产生深棕色。
IHC底物：HIGHDEF DAB Chromogen:用于HRP免疫组织化学染色系统的棕色色原
1.强烈、清晰的颜色发展
2.与高通量系统兼容
艾美捷IHC底物：HIGHDEF DAB Chromogen#ENZ-ACC105-0200基本参数：
应用：IHC
原位杂交
内容：HIGHDEF®DAB色原，HIGHDEF®DAB底物缓冲液
数量：为1000次测试提供的材料
装运：蓝色冰未冷冻
长期储存：+4°C
科学背景：3,3’-二氨基联苯胺（DAB）是一种广泛用于免疫过氧化物酶染色的色原，与氨基乙基咔唑（AEC）相比，它的灵敏度提高，背景降低，因此在病理学家中得到了广泛的接受。用DAB染色的标本可以脱水，清除并安装以永久保存记录。HIGHDEF®DAB色原/底物组比传统的DAB工作溶液更灵敏和稳定。
RUO-仅供研究使用
IHC底物：HIGHDEF DAB Chromogen实例展示：
图1：对表达人突变APP和PS1的转基因小鼠大脑的福尔马林固定石蜡包埋组织切片进行双重IHC染色。用POLYVIEW®PLUS AP（抗兔）试剂（产品号ENZ-ACC110）和HIGHDEF®Green AP色原/底物（产品号ENZ-ACC130）对组织切片进行α-淀粉样蛋白染色，并用POLYVIEW®PLUS HRP（抗小鼠）试剂（产品号ENZ-ACC104）和HIGHDEF DAB色原/底物组（产品号ENZ-ACC105）对磷酸化tau进行染色。图片由比利时布鲁塞尔自由大学神经解剖学和神经病理学实验室Karelle Leroy Laboratoire d'histologie博士提供。
图2：对患有阿尔茨海默病的人脑的福尔马林固定石蜡包埋组织切片进行双重IHC染色。用POLYVIEW®PLUS AP（抗兔）试剂（产品号ENZ-ACC110）和HIGHDEF®Green AP色原/底物（产品号ENZ-ACC130）对组织切片进行α-淀粉样蛋白染色，并用POLYVIEW®PLUS HRP（抗小鼠）试剂（产品号ENZ-ACC104）和HIGHDEF DAB色原/底物组（产品号ENZ-ACC105）对磷酸化tau进行染色。图片由比利时布鲁塞尔自由大学神经解剖学和神经病理学实验室Karelle Leroy Laboratoire d'histologie博士提供。
部分文献参考：
The novel TAK1 inhibitor handelin inhibits NF-κB and AP-1 activity to alleviate elastase-induced emphysema in mice: H.J. Yun; Life Sci. 319, 121388 (2023);
A novel C-terminal heat shock protein 90 inhibitor that overcomes STAT3-Wnt-β-catenin signaling-mediated drug resistance and adverse effects: H.J. Lee, et al.; Theranostics 12, 105 (2022);
Novel Allosteric Inhibitors of Deoxyhypusine Synthase against Malignant Melanoma: Design, Synthesis, and Biological Evaluation: K.L. Liu, et al.; J. Med. Chem. 1021, 582 (2021),
来源;https://www.amyjet.com/products/ENZ-ACC105-0200.shtml
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艾美捷氢氧化铝佐剂的应用和结果示例说明
氢氧化铝是氢氧化铝2%的湿凝胶（胶体），作为即用型悬浮液提供。
氢氧化铝是批准的预防性疫苗中最常用的佐剂，因为它具有出色的安全性和增强保护性体液免疫应答的能力。80多年来，人们已经观察到铝化合物通过仓库效应和直接激活免疫细胞起作用。通过疏水和静电相互作用吸附或包埋聚集体中的抗原有利于高局部抗原浓度和改善抗原呈递细胞（APC）的摄取。
氢氧化铝是一种结晶氢氧化铝，在生理pH值（pI=11）下带正电荷，适用于吸附带负电荷的酸性蛋白质（如白蛋白）。
艾美捷氢氧化铝佐剂（AH0250）的应用：
通过释放Th2相关细胞因子（IL2，IL-4，IL-5...）和Th13相关抗体（IgG2和IgE）刺激Th1反应。它增加Ag特异性CD4 + T细胞增殖并促进NALP3炎症小体活化和半胱天冬酶1介导的IL-1和IL-18释放。
推荐的FOR：刺激Th2反应，抗体产生。
OZ Biosciences的VaxOZ佐剂仅用于研究用途。
氢氧化铝佐剂结果示例：
上图：先天免疫系统细胞对注射Ag+/-明矾佐剂的反应。注射吸附在小鼠明矾（OVA-明矾）上的卵清蛋白（OVA）诱导单核细胞趋化蛋白（MCP1;CCL2），中性粒细胞趋化素KC（CXCL1）和嗜酸性粒细胞趋化素-1（CCL11）与单独接受OVA的小鼠相比（改编自Kool M.等人，J Exp Med. 2008; 205（4）：869-82）。
下图：明矾诱导的先天炎症反应。小鼠腹腔注射卵清蛋白（OVA）或OVA-氢氧化铝。24H后，通过流式细胞术在腹膜灌洗中测定中性粒细胞，嗜酸性粒细胞和单核细胞以及树突状细胞的数量（改编自Kool M.等人，J Immunol. 2008; 181（6）：3755-9）。
来源：https://www.amyjet.com/products/OZB-AH0250.shtml
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艾美捷不完全弗氏佐剂（IFA）应用实例说明
不完全弗氏佐剂（IFA）是一种油包水乳液，类似于完全弗氏佐剂 （CFA），无需添加热杀灭分枝杆菌（丁酸分枝杆菌）。
IFAVax由矿物油和乳化剂的混合物组成，比例为85%v/v油和15%v/v乳化剂。重要的是，IFAVax不是预先形成的乳液，因此必须与等体积的抗原水溶液混合，然后在使用前乳化。乳化剂为甘露糖醇单油酸酯，由甘露醇作为亲水残基，油酸（不饱和C18脂肪酸）作为疏水部分组成的酯。
OZ Biosciences的VaxOZ佐剂仅用于研究用途。
艾美捷不完全弗氏佐剂（IFA）#OZB-IFA0100规格和应用：
10毫升
5x10毫升
10x10毫升
应用：与主要诱导Th1反应的CFA相反，缺乏分枝杆菌成分的IFA引发Th2反应，因此炎症性较小。Th2结果的参与部分是由于库效应允许抗原在注射部位逐渐和连续释放，并有效提高抗体滴度。弗氏佐剂旨在提供刺激强持续免疫反应所必需的抗原的持续释放。
推荐的FOR：刺激Th2反应，抗体产生。
不完全弗氏佐剂（IFA）结果示例：
上图：用卵清蛋白（OVA）或OVA + IFA免疫的小鼠的抗体反应。所有同种型（A）或IgG1亚类（B）的OVA特异性抗体在用可溶性OVA或用IFA吸附的OVA免疫后几天由ELISA发现（改编自Albuquerque D等人）。疫苗 2011;20（2）： 1-5）.
下图：有或没有IFA佐剂的血清抗体对免疫原的反应比较。小鼠在PBS或IFA中用100μg抗体免疫。通过ELISA在第7天（A）和第14天（B）测定抗体滴度。改编自加文等。科学 2006;314.
来源：https://www.amyjet.com/products/OZB-IFA0100.shtml
