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艾美捷Viro-MICST试剂工作原理解决方案

i-MICST技术（integrated Magnetic Immuno-Cell Sorting and Transfection/ Transduction，集成磁性免疫细胞分选和转染/转导）是一种新平台，可以在磁性细胞纯化柱上直接对细胞进行基因修饰。该技术将细胞分离和基因修饰结合在一个简单、高效和可靠的集成系统中。

Viro-MICST试剂专为i-MICST技术设计，可直接在磁性细胞纯化柱上高效特异地转导靶细胞。  

为什么使用Viro-MICST试剂

与常规转导方法相比，艾美捷Viro-MICST试剂可提高低滴度病毒制剂的转导效率，并可帮助您减少细胞操作步骤，节省时间和载体材料。

在一个可靠的集成系统中分离和转导细胞；

在低MOI下，有高转导效率；

转导过程的加速和吸附的同步化；

适用于敏感细胞类型，如原代细胞和干细胞。

Viro-MICST工作原理：

MICST 技术要求：

磁性细胞分离系统（非OZ Biosciences提供）；

Viro-MICST试剂用于捕获病毒并感染磁性细胞纯化柱内的细胞。

Viro-MICST是一种新的特异性磁性纳米颗粒制剂，由OZ Biosciences的Magnetofection技术与Miltenyi Biotec的MACS 技术联合开发的演变而来。

Viro-MICST试剂与病毒结合。由于磁性标记的靶细胞和病毒-Viro-MICST复合物两者都被磁场保留在柱中，因此病毒可以相互作用并高效感染靶细胞。

i-MICST protocol分两步过程：

磁性标记细胞在非修饰柱上的预富集步骤。

Viro-MICST程序。这一步可以达到高纯度，同时感染目标细胞群。

。

Viro-MICST试剂试剂相关研究：

#VMX050 VIRO-MICST TRANSDUCTION REAGENT SAMPLE 转导和感染增强剂 所有病毒载体

#VMX250 VIRO-MICST 250 TRANSDUCTION REAGENT 转导和感染增强剂 所有病毒载体

#VMX500 VIRO-MICST 500 TRANSDUCTION REAGENT 转导和感染增强剂 所有病毒载体

#VMX1000 VIRO-MICST 1000 TRANSDUCTION REAGENT 转导和感染增强剂 所有病毒载体

#VMXS100 ViroMICST Stem 100 transductions 转导和感染增强剂 干细胞

#VMXS300 ViroMICST Stem 300 transductions 转导和感染增强剂 干细胞

来源：https://www.amyjet.com/brand/Viro-MICST.shtml

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新型CHAMP技术丨艾美捷Helix-IN DNA转染试剂方案

基本原理：

这种新型CHAMP技术的特殊性来自于双功能阳离子生物聚合物由三个部分组成，每个部分具有不同的特性和功能。

（1）聚合物附近的第一部分将DNA结合和缩合到前所未有的水平，并有助于细胞质递送。

（2）第二部分是pH响应性和可切割的接头，通过促进内体膜的不稳定来改善细胞传递。

（3）具有确定和优化的分子量的第三部分用作DNA屏蔽和核摄取促进剂。 每个部分的分子量和长度（对于每种类型的聚合物是唯一的）是与整体转染效率相关的重要参数。  

工作原理：

保护和血清稳定性

OZ Biosciences的新型CHAMP聚合物Helix-IN的设计使带正电荷的复合物在溶液中保持稳定，不会随时间推移而聚集。

对CHAMP聚合物的结构、多胺组成和接枝密度进行微调和优化，以将聚合物放置在溶解度不受时间影响的精确界面处。此外，亲水基团被巧妙地布置在聚合物中，以降低与带负电荷的血清蛋白（白蛋白......）的相互作用，从而更有效地定义基因载体。

聚合物保持完整，DNA被保护免受降解...

这种带正电荷的双功能聚合物具有增强的DNA结合性能，可以在一定程度上保护DNA；正的DNA/聚合物电荷比使DNA与聚合物结合，在保护核酸不被血清酶降解方面发挥关键作用。OZ Biosciences设计了这种聚合物，即使在50%胎牛血清中37°C孵育24小时也不会观察到DNA降解。  

细胞摄取

阳离子复合物主要通过静电相互作用与细胞膜结合，并且大多数复合物通过内吞作用途径（巨胞饮作用、吞噬作用、内吞作用）被细胞摄取。有文献记载内吞作用的途径之一是由网格蛋白介导的。

一旦被内吞，复合物被内吞在早期的核内体中，pH从7.4（细胞表面）下降至6.0（核内体腔内）。随着核内体进入晚期，pH值将降至5。  

内体逃逸和DNA释放

聚合物通过与“质子海绵”效应相关的阳离子聚合物缓冲能力逃避核内体并将其携带物释放到核中。

在酸性介质中充当弱碱的可质子化胺使核内体内的pH不稳定：一旦进入核内体，特异性ATP酶会产生大量质子流入，这些质子被聚合物缓冲。大量和持续的质子流动伴随着氯离子的被动进入，导致水的积累。因此，囊泡膨胀直到内体破裂，其内容物被递送到细胞质中。

第一聚合物嵌段起此作用。此外，pH响应性和可切割的疏水部分增加了补充功能。实际上，隐藏在生理pH值下的连接体在酸性pH值下会暴露出来，导致其裂解和疏水区暴露，从而促进内体膜融合/不稳定。

在这个阶段，几个重要的缺陷可能会影响转染效率：（1）DNA从核内体逃逸的能力是转染的主要限制之一；（2）通常认为，DNA必须迅速导入细胞核以避免细胞质降解；（3）核内体(也在细胞表面)中存在细胞传感器，可以识别外源核酸并诱导抑制转染的保护性反应。  

运输和核内部化

一旦从核内体释放出来，多聚体必须经由微管或通过核输入机制迀移到细胞核。通常，大分子DNA（>3000bp）和聚合物几乎保持不动，因为向细胞质的扩散依赖于尺寸大小，并且许多细胞质核酸酶会降解核酸。由于仍与双功能聚合物的第三部分结合，较小的带正电荷的聚合物可以与阴离子微管或马达蛋白相互作用，或以隐形模式扩散，直到它们发生核摄取。在所有这些过程中，DNA被掩盖并被保护不被降解。

永生化细胞进入核的最明显方式是在有丝分裂期间，发生细胞物质的再分布并且核膜被破坏，然而，并非所有细胞都遵循增殖模式。到目前为止，对复合物载体的核导入知之甚少。 一旦DNA到达细胞核，它就会从带正电荷的聚合物的第二部分释放出来，分子量和接枝设计的目的是改善转染。

艾美捷 HELIX-IN DNA转染试剂 研究：

HX10100 HELIX-IN DNA TRANSFECTION REAGENT 100uL 基因表达 用于细胞系和难转染细胞的广谱转染试剂

HX10500 HELIX-IN DNA TRANSFECTION REAGENT 500uL 基因表达 用于细胞系和难转染细胞的广谱转染试剂

HX11000 HELIX-IN DNA TRANSFECTION REAGENT 1mL 基因表达 用于细胞系和难转染细胞的广谱转染试剂

HELIX-IN DNA转染试剂应用：

主要用途是用于体外和体内应用的DNA转染。CHAMP技术增加了转染量：更多的DNA进入细胞，DNA以隐形模式寻址到细胞核，而不会引起细胞的警觉和应激......该试剂是优先粘附的永生化细胞系的理想选择，如HEK-293，NIH-3 T3，CHO，COS，HeLa，MCF 7，MEF，RPE-1，C2C12....

它非常适合多个DNA的共转染。在体内，DNA被浓缩并保护成小的多聚物，限制免疫应答，并能够通过循环系统导航，直到它们被递送。  

如何使用HELIX-IN聚合物转染试剂？

该protocol是一个非常简单明了的程序，大体流程如下：

根据细胞类型，转染试剂以1：1至3：1的比例（每?g DNA 1?L至每?g DNA 3?L）直接与DNA混合。孵育30分钟后，Polyplexes和boost被添加到细胞上。   

这30分钟的孵育时间是该方案的基石，允许完全压缩和保护DNA。

在纳米颗粒/DNA复合物自组装过程中，至少等待30分钟才能使共聚物和DNA形成稳定的超分子纳米颗粒。由于共聚物的多部分性质，形成和稳定复合物的时间略长于“简单”聚合物，“简单”聚合物形成更快（10-20分钟）。

HELIX-IN DNA转染试剂引用文章鉴赏：

Solinger, J.A., Rashid, HO. & Spang, A. FERARI and cargo adaptors coordinate cargo flow through sorting endosomes. Nature Communications13, 4620 (2022).（使用OZ Biosciences的HELIX-IN聚合物转染试剂）

Cadena del Castillo, C.E., Hannich, J.T., Kaech, A. et al. Patched regulates lipid homeostasis by controlling cellular cholesterol levels. Nature Communications12, 4898 (2021). （使用OZ Biosciences的HELIX-IN聚合物转染试剂）

Liu, X., Salokas, K., Weldatsadik, R.G. et al. Combined proximity labeling and affinity purification?mass spectrometry workflow for mapping and visualizing protein interaction networks. Nature Protocols15, 3182–3211 (2020). （使用OZ Biosciences的HELIX-IN聚合物转染试剂）

Liu, X., Salokas, K., Tamene, F. et al. An AP-MS- and BioID-compatible MAC-tag enables comprehensive mapping of protein interactions and subcellular localizations. Nature Communications9, 1188 (2018).（使用OZ Biosciences的HELIX-IN聚合物转染试剂）

来源：https://www.amyjet.com/brand/helix-in-dna-transfection.shtml

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艾美捷白细胞介素-2（IL-2）参数说明及相关研究

白细胞介素-2（IL-2）是一种白细胞介素，是免疫系统中的一种细胞因子信号分子。它是一种15.5 - 16 kda的蛋白质，调节负责免疫的白细胞（白细胞，通常是淋巴细胞）的活动。白细胞介素-2是机体对微生物感染的自然反应的一部分，用于区分外来(“非自身”)和“自身”。IL-2通过与IL-2受体结合介导其作用，IL-2受体由淋巴细胞表达。  

艾美捷白细胞介素-2（IL-2）详细信息：

IL-2 人 鼠 猪

货号 C01004 C02004 C03003

规格 5、20、100 ug 5、20、100 ug 5、20、100 ug

GMP编号 C01004-GMP ———— ————

GMP规格 100ug、1mg ———— ————

制造和测试 内毒素水平

通过LAL方法每0μg蛋白质<01.1 EU。

活性

通过其诱导CTLL-2细胞增殖的能力来衡量。教育署50这种效果是<0.2纳克/毫升。

重组人IL-2的比活性约为>2.5×107IU / mg.

通过其在NK细胞中诱导增殖的能力来衡量。教育署50这种效果为 <46 ng/mL。

纯度

>98%，由SDS-PAGE分析确定。通过Ni-NTA色谱法纯化。

配方

将蛋白质从含有1X PBS，pH 8.0的溶液冻干。

复溶建议在无菌H中复溶

冻干蛋白2O至浓度不低于100μg/ mL，并将储备溶液孵育至少20分钟以确保充分重新溶解。

储存冻干蛋白应储存

在-20°C。 本产品在收到后可稳定保存一年，并按照说明进行处理和储存。复溶后，蛋白质等分试样应储存在-20°C或-80°C。 避免反复冻融循环。

注意

请在蛋白质复溶后一个月内使用完毕。

白细胞介素-2（IL-2）相关研究：

→ 克罗耶兹GMP ® IL-18（白细胞介素-18），人类

→ T7 RNA聚合酶转录缓冲液套装

→ dCas9-VP64

来源：https://www.amyjet.com/brand/interleukin-2-2.shtml

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艾美捷小鼠实时定量PCR DNA损伤分析试剂盒解决方案

DNA损伤分析试剂盒，用于检测受损小鼠体内和体外的8.2 kb线粒体DNA，采用实时荧光定量PCR对复制DNA进行定量，并进行QPCR分析。使用每个8.2 kb标准的阈值周期值（CT）和DNA浓度（对数标度）创建标准曲线。使用线性回归分析，根据PCR获得的CT值确定样品的DNA浓度。高水平的8.2 kb产物表示较少的mtDNA损伤。   

艾美捷小鼠实时定量PCR DNA损伤分析试剂盒#DD2M：

小鼠实时定量PCR DNA损伤分析试剂盒|Mouse Real-time PCR DNA Quantitation after QPCR DNA Damage Analysis Kit，用于通过在QPCR分析后使用实时PCR定量复制的DNA来测定小鼠体内和体外受损的8.2kb线粒体DNA。该试剂盒允许对多达20个样品（40个反应）进行重复分析。

小鼠实时定量PCR DNA损伤分析试剂盒关联研究：

Rat Real-time PCR DNA Damage Kit 大鼠实时PCR DNA损伤试剂盒 DD2R

Mouse Mitochondrial DNA Copy Number Kit 小鼠线粒体DNA拷贝数试剂盒 MCN3

Human Real-time PCR DNA Damage Kit 人实时PCR DNA损伤试剂盒 DD2H

小鼠实时定量PCR DNA损伤分析试剂盒引文赏析：

Representative References: Human and Mouse Gupta SS, Sharp R, Hofferek C, Kuai L, Dorn GW 2nd, Wang J, Chen M. NIX-Mediated Mitophagy Promotes Effector Memory Formation in Antigen-Specific CD8 + T Cells. Cell Rep. 2019 Nov 12;29(7):1862-1877.e7. doi: 10.1016/j.celrep.2019.10.032. PMID: 31722203; PMCID: PMC6886713.   

Singh K, Singh IN, Diggins E, Connors SL, Karim MA, Lee D, Zimmerman AW, Frye RE. Developmental regression and mitochondrial function in children with autism. Ann Clin Transl Neurol. 2020 May;7(5):683-694. doi: 10.1002/acn3.51034. Epub 2020 Apr 28. PMID: 32343046; PMCID: PMC7261756.  

来源：https://www.amyjet.com/products/DD2M.shtml

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艾美捷小鼠PCR DNA损伤分析试剂盒说明书

简介：

这种DNA损伤分析试剂盒用于测定损伤的8.2kb小鼠体内和体外线粒体DNA，通过用QPCR分析后的实时PCR。该试剂盒可对多达20个样本进行重复分析（40个反应）。

艾美捷小鼠PCR DNA损伤分析试剂盒#DD2M组分：

▪ 含聚合酶的2X浓缩QPCR缓冲液（450µL）

▪ QPCR引物混合物【正向引物和反向引物各2μM】（225μL）

▪ QPCR检测DNA[50纳克/μL]（10μL）

▪ 5X增强剂（180μL）

▪ 8.2 kb实时标准[1ng/uL]（25μL）

▪ 实时引物混合物【正向引物和反向引物各5μM】（100μL）

小鼠PCR DNA损伤分析试剂盒标准曲线：

使用阈值循环值（CT）和DNA创建标准曲线8.2kb标准品中每一个的浓度（对数标度）。使用线性回归分析，根据您的CT值确定样本的DNA浓度通过PCR获得。高水平的8.2kb产物代表较少的mtDNA损伤。

小鼠PCR DNA损伤分析试剂盒文献参考：

Gupta SS, Sharp R, Hofferek C, Kuai L, Dorn GW 2nd, Wang J, Chen M. NIX-Mediated

Mitophagy Promotes Effector Memory Formation in Antigen-Specific CD8 + T Cells. Cell Rep.

2019 Nov 12;29(7):1862-1877.e7. doi: 10.1016/j.celrep.2019.10.032. PMID: 31722203; PMCID:

PMC6886713.

Singh K, Singh IN, Diggins E, Connors SL, Karim MA, Lee D, Zimmerman AW, Frye RE.

Developmental regression and mitochondrial function in children with autism. Ann Clin Transl

Neurol. 2020 May;7(5):683-694. doi: 10.1002/acn3.51034. Epub 2020 Apr 28. PMID: 32343046;

PMCID: PMC7261756.

来源：https://www.amyjet.com/products/DD2M.shtml

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艾美捷线粒体DNA拷贝数试剂盒解决方案

人、小鼠和大鼠的实时PCR DNA线粒体定量

人类目录#MCN1

大鼠目录#MCN2

鼠标目录#MCN3

艾美捷线粒体DNA拷贝数试剂盒#MCN3用于测定人线粒体DNA拷贝数，通过线粒体（mt）和细胞核（n）DNA的比较，在体内和体外通过实时PCR测量。该试剂盒可对多达22个样本（44反应）。

线粒体DNA拷贝数试剂盒组分：

•96孔带盖PCR板

•rtPCR反应混合物。

•用于量化线粒体DNA的已验证引物。

•用于量化细胞核DNA的已验证引物。

•从总DNA中分离的阳性对照（1.825纳克/µl）。

线粒体DNA拷贝的比较正常人和糖尿病患者视网膜中的数量患者。桑托斯等人，自由基生物学&医学51:1849-18602011。

线粒体DNA拷贝数试剂盒部分文献参考：

1. Yi, CX et al. (2017) TNFα drives mitochondrial stress in POMC neurons in obesity. Nature Communications 8:15143 | DOI: 10.1038/ncomms15143.

2. SP Singh, JA McClung, L Bellner, J Cao, M Waldman, J Schragenheim, M Arad, E Hochhauser,JR Falck, JA Weingarten, SJ Peterson and NG Abraham. 2018. Cardiovasc Pharm Open Access 6: 233

3. I Horikawa, K Park, K. Isogaya, Y Hiyoshi, H Li, K. Anami, AI Robles, AM Mondal K Fujita, M Serrano and CC Harris. 2017. D133p53 represses p53-inducible senescence genes and enhances the generation of human induced pluripotent stem cells. Cell Death and Differentiation, 2017, 1-12.

来源：https://www.amyjet.com/products/MCN3.shtml

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艾美捷DREAMFECT GOLD 500 转染试剂——简单、快速且易用

DREAMFECT GOLD转染试剂能够以非常高的效率转染所有类型的核酸。基于三通技术，与其他转染试剂相比，DreamFect™ Gold可提供大量的核酸，从而获得更高的蛋白表达。它是完全可生物降解的，不会干扰细胞机制。因此，在每次实验中都保持高细胞活力，并避免任何潜在的二次效应。

艾美捷DREAMFECT GOLD 500 转染试剂 #OZB-DG80500特点：

高蛋白表达水平

高核酸递送

可生物降解 - 避免二次效应

瞬时稳定转染

适用于所有核酸类型

血清兼容

简单、快速且易于使用

DREAMFECT GOLD 500 转染试剂规格：

500 μL：用 125 μg DNA 转染 250-1 次

<1000 μL：用 250 μg DNA 转染 500-1 次

5 x 1000 μL：用 1250 μg DNA 转染 2500-1 次

储存： -20°C

运输条件：室温

DREAMFECT GOLD 500 转染试剂结果示例;

图 1：不同细胞系中的RFP表达。 在7孔板中每孔转染Cos-1（A）和HeLa（B）细胞系（10x5 0细胞/孔），每孔转染5.4 μgpRFP质粒DNA和24 μLDreamFect金试剂。转染后24小时用荧光显微镜监测RFP表达。

图2：DreamFect Gold 优于所有经过测试的转染试剂。 在1孔板中每孔转染10 μ gpLacZ质粒DNA和5 μLDreamFect金试剂的细胞系（1x424个细胞/孔）。其他转染试剂根据制造商的说明进行检测。转染后24小时使用OZ Biosciences的ONPG β-半乳糖苷酶检测试剂盒（目录#G010001）测量β-半乳糖苷酶表达。

来源：https://www.amyjet.com/products/OZB-DG80500.shtml

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艾美捷脂质转染试剂的优势及解决方案

脂质转染（Lipofection）是一种基于脂质的转染技术，属于生物化学方法，包括聚合物、DEAE葡聚糖和磷酸钙。脂质转染原理是将核酸与阳离子脂质制剂结合。由此产生的分子复合物，称为脂质体，然后被细胞吸收。脂质转染的主要优点是效率高，能够在广泛的细胞类型中转染所有类型的核酸，易于使用，可重复性强，毒性低。此外，该方法适用于所有转染应用（瞬时、稳定、共转染、反向、顺序或多次转染……）、高通量筛选测定，并且在一些体内模型中也显示出良好的效率。  

工作原理：

（1）DNA转染机制：

用于脂质转染的脂基试剂通常由合成的阳离子脂质组成，其通常与辅助脂质如DOPE（L-α-二油酰磷脂酰乙醇胺）或胆固醇混合。这些脂质混合物在生理pH值下以整体带正电荷的脂质体或胶束形式组装，并能够通过静电相互作用与带负电荷的核酸形成复合物（脂质复合物）。脂基转染试剂与核酸的结合使核酸受到紧密压缩和保护，这些阳离子复合物主要通过内吞作用内化。一旦进入细胞，有两种导致核酸释放到细胞质中的机制。一种依赖于多阳离子残基的核内体缓冲能力（称为“质子海绵效应”）。另一种是细胞带负电荷的脂质中和转染试剂的阳离子残基导致内体膜不稳定的能力。最后，导致核摄取DNA（siRNA不需要）随后基因表达的细胞和分子事件仍然是高度推测性的。然而，细胞分裂对转染效率的重要性有利于有丝分裂过程中核膜破坏促进DNA核摄取的假设。尽管如此，通过脂质转染也可以实现原代细胞（非分裂）和体内的转染，这表明DNA可以进入发生基因表达的细胞核。

（2）Tee-技术（Tee-Technology）：

阳离子脂质体（脂质复合物）和聚合物（多聚体）是最常用的非病毒基因递送系统。 Tee-Technology（触发内体逃逸）结合并利用这两种实体的特性来实现极其高效的核酸传递到细胞中。实际上，这种新一代的脂多胺含有亲脂性部分，如脂质，和带电荷的多胺部分，如阳离子聚合物。这些部分协同作用以确保核酸的紧密压缩和保护，以及核内体膜的非常有效的不稳定，这允许大量核酸在细胞质中释放和DNA的核摄取。特别关注完全可生物降解实体的合成。通过这种方式，转染试剂不会干扰细胞机制，在每次实验中都能保持高细胞活力，并避免任何潜在的副作用。

Tee-技术的主要优势在于：

纳米颗粒中DNA的压缩被细胞有效地内化；

核酸对核酸酶降解的保护作用；

有效的膜不稳定性和DNA递送；

即使在核酸含量较低的情况下也具有高效性；

生物降解性。

艾美捷脂质转染试剂#DG80500、#DF40500、#LL70500等的应用：

转染效率与高基因表达水平或高基因沉默和最小化细胞毒性相结合取决于多个关键参数。这些因素包括细胞类型、质粒DNA特征（大小、启动子、报告基因）和纯度、siRNA序列和纯度、细胞培养条件（含或不含血清的培养基、细胞数量、无污染......）、核酸和试剂的量、转基因检测等等。 因此，转染试剂需要根据待递送的核酸（DNA、siRNA、mRNA、ODN、shRNA等）和使用的细胞类型进行专门设计，以达到最佳效率。在此背景下，OZ Biosciences开发了几种出色的转染试剂：

DreamFect Gold：适用于所有核酸，获得卓越的转基因表达水平

DreamFect：适用于所有核酸，适用于所有细胞，包括悬浮细胞系

Lullaby：用于siRNA应用

VeroFect：用于Vero细胞转染

FlyFectin：用于昆虫细胞转染

EcoTransfect：用于流行的细胞系和低成本的常规转染  

如何使用脂质转染试剂？

该protocol是一个非常简单明了的程序，大体流程如下：

制备DNA和转染试剂溶液。

将它们混合在一起并孵育20分钟。

添加到您的细胞中。

脂质转染试剂相关引用文章鉴赏：

Ferrari, R., Martin, G., Tagit, O. et al. MT1-MMP directs force-producing proteolytic contacts that drive tumor cell invasion. Nature Communications10, 4886 (2019).. （使用OZ Biosciences的Lullaby脂质转染）

Karousis, E.D., Gurzeler, LA., Annibaldis, G. et al. Human NMD ensues independently of stable ribosome stalling. Nature Communications11, 4134 (2020). （使用OZ Biosciences的Lullaby脂质转染）

Ramsay, E.P., Abascal-Palacios, G., Dai?, J.L. et al. Structure of human RNA polymerase III. Nature Communications11, 6409 (2020).  （使用OZ Biosciences的Lullaby脂质转染）

来源：https://www.amyjet.com/brand/lipofection.shtml