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曲妥珠单抗丨艾美捷曲妥珠单抗Trastuzumab相关研究

曲妥珠单抗的药理作用：

曲妥珠单抗是一种重组DNA衍生的人源化单克隆抗体，选择性地作用于人表皮生长因子受体-2(HER2)的细胞外部位。此抗体属IgGl型，含人的框架区，及能与HER-2结合的鼠抗-p185 HER2抗体的互补决定区。

人源化的抗HER2抗体是由悬养于无菌培养基中的哺乳动物细胞(中国仓鼠卵巢细胞CHO)产生的，用亲合色谱法和离子交换法纯化，包括特殊的病毒灭活的去除程序。

HER2原癌基因或C-erbB2编码一个单一的受体样跨膜蛋白，分子量185kDa，其结构上与表皮生长因子受体相关。在原发性乳腺癌患者中观察到有25%-30%的患者HER2过度表达。HER2基因扩增的结果是这些肿瘤细胞表面HER2蛋白表达增加，导致HER2受体活化。

研究表明，HER2过度表达的肿瘤患者较无过度表达的无病生存期短。HER2的过度表达可通过以下方法诊断：对肿瘤组织块以免疫组化为基础的评价法，组织或血浆样品的ELISA法或荧光原位杂交法（FISH）。

曲妥珠单抗是抗体依赖的细胞介导的细胞毒反应（ADCC）的潜在介质。在体外研究中，曲妥珠单抗介导的ADCC被证明在HER2过度表达的癌细胞中比HER2非过度表达的癌细胞中更优先产生。

艾美捷曲妥珠单抗Trastuzumab是人源化IgG1κ单克隆抗体，其以高亲和力选择性结合人表皮生长因子受体2蛋白HER2的细胞外结构域。曲妥珠单抗通过重组DNA技术在哺乳动物细胞（中国仓鼠卵巢）中产生。

生物仿制药-研究级艾美捷曲妥珠单抗Trastuzumab化学性质：

英文名称：Trastuzumab Biosimilar - Research Grade

编号：ICH4013

规格：0.1mg

同种型：IgG1κ

其他名字：受体酪氨酸蛋白激酶erbB-2，MLN 19，HER2，HER2/neu

宿主：CHO细胞

物种反应性：人类

特异性：检测人ErbB2。该非治疗性抗体使用与治疗性抗体曲妥珠单抗相同的可变区序列。

浓度：0.2毫克/毫升

存储：当储存在2-8℃时，该别藻蓝蛋白（APC）缀合物是稳定的。不要冻结。

应用：流式细胞术，IHC

ichorbio的曲妥珠单抗生物仿制药仅用于研究用途（RUO）：它不用于诊断或治疗程序

存储：在2-8°C无菌储存时稳定至少一周。对于长期储存，无菌分装在工作体积中，不稀释，储存在-80°C。避免反复冻融循环。

以上，就是有关于艾美捷曲妥珠单抗Trastuzumab的相关研究。

来源：https://www.amyjet.com/products/ICH4013.shtml

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说明书丨艾美捷MTT细胞增殖检测试剂盒介绍

概述：

MTT细胞增殖检测试剂盒（MTT Cell Proliferation Assay）被广泛应用于细胞增殖和细胞毒性检测。MTT可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成结晶状的深紫色产物Formazan，在特定溶剂存在的情况下，可以被完全溶解，然后通过酶标仪可以测定570 nm波长附近的吸光度。

艾美捷CytoSelectMTT细胞增殖检测提供了用于测量和监测细胞增殖的比色格式。该试剂盒包含足够的试剂，可用于评估96孔板中的960个测定或24孔板中的192个测定。可以将细胞铺板，然后用影响增殖的化合物或试剂处理。然后用增殖试剂检测细胞，通过细胞还原酶将其在活细胞中从黄色的四唑MTT转变为紫色的甲maz形式（图1）。细胞增殖的增加伴随着信号的增加，而细胞增殖（和信号）的下降可以表明化合物的毒性作用或次佳的培养条件。该测定原理是基本的，并且可以应用于大多数真核细胞系，包括粘附和非粘附细胞以及某些组织。这种细胞增殖试剂可用于检测细菌，酵母，真菌，原生动物以及培养的哺乳动物和鱼类细胞中的增殖。

图1：活细胞中黄色MTT和紫色福尔马林产物的化学结构。

艾美捷MTT细胞增殖检测试剂盒组分：

1. MTT Cell Proliferation Assay Reagent (Part No. 125201): One 10 mL bottle of MTT reagent.

2. Detergent Solution (Part No. 125202): One 100 mL bottle of Detergent Solution.

艾美捷MTT细胞增殖检测试剂盒测定方案：

1.制备含有0.1-1.0 x 106的细胞悬液培养基中的细胞/ml。

2.将每孔100μL加入96孔细胞培养板或每孔500μL加入24孔细胞培养物中有或没有待测化合物的板。细胞在37°C和5%培养24-96小时加湿培养箱中的二氧化碳。

3.加入10μlCytoSelect™ MTT细胞增殖测定试剂，如果使用96-孔板，或24孔板的每个孔50µL。

4.在37°C和5%CO2下孵育平板3-4小时，直至可见紫色沉淀（细胞在光学显微镜下可以更精确地观察到沉淀物）

5.在96孔板的每孔中加入100μL去污剂溶液，或在24孔板的每孔中加入500μL去污剂溶液盘子。

6.在室温下孵育2小时至避光过夜。

注意：在井中与洗涤剂溶液长时间孵育可能导致沉淀或浑浊可以增加背景。如果观察到沉淀，将板在37℃加热10-20分钟并搅拌溶解沉淀物。

7.使用540-570nm作为主波长读取吸光度。

MTT细胞增殖检测试剂盒引用文献（部分）：

1. Uranowska, K. et al. (2021). Expression of chondroitin sulfate proteoglycan 4 (CSPG4) in melanoma cells is downregulated upon inhibition of BRAF. Oncol Rep. 45(4):14. doi:10.3892/or.2021.7965.

2. Housein, Z. et al. (2021). In vitro anticancer activity of hydrogen sulfide and nitric oxide alongside

nickel nanoparticle and novel mutations in their genes in CRC patients. Sci Rep. 11(1):2536. doi:10.1038/s41598-021-82244-x.

3. Yoshiya, S. et al. (2020). Impact of Capicua on Pancreatic Cancer Progression. Ann Surg Oncol.doi: 10.1245/s10434-020-09339-z.

来源：https://www.amyjet.com/products/CBA-252.shtml

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中英文说明书丨艾美捷细胞失巢凋亡检测试剂盒介绍

Assay Principle

Cells are cultured in poly-Hema coated plate or control plate. Cell viability is determined by MTT or

Calcein AM. Anoikis propelled cell death is measured by Ethidium Homodimer (EthD-1). EthD-1 is

an excellent marker for measuring dead cells. EthD-1 is a red fluorescent dye that can only penetrate

damaged cell membranes. EthD-1 will fluoresce with a 40-fold enhancement upon binding ssDNA,

dsDNA, RNA, oligonucleotides, and triplex DNA. Background fluorescence levels are very low

because the dyes are virtually non-fluorescent before interacting with cells.

Kit Components

1. Anchorage Resistant Plate (Part No. 108001): One 24-well Poly-Hema coated plate.

2. Calcein AM (500X) (Part No. 108002): One vial – 50 µL in DMSO.

3. Ethidium Homodimer (EthD-1) (500X) (Part No. 108003): One vial – 50 µL.

4. Detergent Solution (Part No. 108004): One bottle – 25.0 mL.

5. MTT Solution (Part No. 113502): Three tubes – 1.0 mL each.

Storage

Store the Calcein AM and Ethidium Homodimer at -20ºC. Store all other components at 4ºC.

艾美捷细胞失巢凋亡检测试剂盒提供比色和荧光格式测量锚定非依赖性生长并监测失巢细胞死亡。该套件包含足够的试剂用于在Poly-Hema涂层的24孔板中测定24个样品。活细胞是用MTT或Calcein AM检测。用埃塞俄比亚同二聚体（EthD-1）检测细胞死亡。细胞在聚Hema涂层板或对照板中培养。通过MTT或钙素AM。通过Ethidium Homodimer（EthD-1）测量失巢细胞死亡。EthD-1是一种用于测量死细胞的优良标记。EthD-1是一种红色荧光染料，只能穿透受损的细胞膜。EthD-1在结合ssDNA时将以40倍的增强发出荧光，dsDNA、RNA、寡核苷酸和三链DNA。背景荧光水平非常低因为染料在与细胞相互作用之前实际上是非荧光的。

艾美捷细胞失巢凋亡检测试剂盒组分：

1.抗锚固板（零件号108001）：一块24孔Poly-Hema涂层板。

2.钙黄素AM（500X）（零件号108002）：一小瓶–50µL DMSO。

3.埃塞俄比亚同二聚体（EthD-1）（500X）（零件号108003）：一小瓶–50µL。

4.洗涤剂溶液（零件号108004）：一瓶–25.0 mL。

5.MTT溶液（零件号113502）：三管，每管1.0 mL。

艾美捷细胞失巢凋亡检测试剂盒相关研究：

1. CBA-081: CytoSelect™ 96-Well Anoikis Assay

2. CBA-230: Cellular Senescence Detection Kit (SA-β-Gal Staining)

3. CBA-231: 96-Well Cellular Senescence Assay (SA β-Gal Activity)

4. CBA-232: Quantitative Cellular Senescence Assay (SA β-Gal)

5. CBA-240: CytoSelect™ Cell Viability and Cytotoxicity Assay

下图显示了CytoSelect的典型结果细胞失巢凋亡检测试剂盒。以下数据仅供参考。该数据不应用于解释实际后果。

图：人前胸成纤维细胞BJ-TERT细胞的失活测定。BJ-TERT细胞以50000个细胞/孔接种在组织培养对照板或Poly-Hema涂层板中。细胞是允许培养24小时。通过MTT和Calcein AM测定细胞活力用EthD-1染色失巢样细胞死亡。

细胞失巢凋亡检测试剂盒部分文献引用：

1. Lu, S. et al. (2016). Expression of α-fetoprotein in gastric cancer AGS cells contributes to invasion

and metastasis by influencing anoikis sensitivity. Oncol Rep. 35:2984-2990.

2. Lee, H.W. et al. (2013). Tpl2 kinase impacts tumor growth and metastasis of clear cell renal cell

carcinoma. Mol Cancer Res. 11:1375-1386.

3. Sisto, M. et al. (2009). Fibulin-6 expression and anoikis in human salivary gland epithelial cells:

implications in Sjogren's syndrome. Int. Immunol. 21:303-311.

4. Liu, H. et al. (2008). Cysteine-rich protein 61 and connective tissue growth factor induce deadhesion and anoikis of retinal pericytes. Endocrinology 149:1666-1677.

来源：https://www.amyjet.com/products/CBA-080.shtml

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中英文说明书丨艾美捷细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒

The Cellular Senescence Assay Kit provides an easy-to-use and efficient method to determine cellular

senescence. SA-β-galactosidase catalyzes the hydrolysis of X-gal, which produces a blue color. Each

kit provides sufficient quantities to perform up to 50 assays in 35 mm dishes.

Kit Components

1. 100X Fixing Solution (Part No. 40010): One tube – 1.5 mL of 25% Glutaraldehyde

2. Staining Solution A (Part No. 40011): One tube – 1.5 mL of 500 mM Potassium Ferrocyanide

3. Staining Solution B (Part No. 40012): One tube – 1.5 mL of 500 mM Potassium Ferricyanide

4. Staining Solution C (Part No. 40015): One bottle – 4.5 mL of 1 M Citrate-Na2HPO4 Buffer, pH

6.0, 50 mM MgCl2

5. Staining Solution D (Part No. 40016): One bottle – 4.0 mL of 5 M NaCl

6. X-gal Solution (Part No. 40014): Two tubes – 1.5 mL of 40 mg/mL X-gal in DMF in each tube

Storage

Store X-gal solution protected from light at -20ºC. Store all other components at 4ºC.

Preparation of Reagents

• 1X Fixing Solution: Prepare a 1X Fixing Solution by diluting the provided 100X stock 1:100 in 1X

PBS. Store the diluted solution at room temperature for up to six months.

• Cell Staining Working Solution: Prepare FRESH cell staining working solution based on the

number of samples. The chart below is suggested for samples in 35 mm plate, and may be

modified accordingly to suit other culture plate sizes.

艾美捷细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒提供了一种有效的方法来可视化衰老相关（SA）ß-半乳糖苷酶。SA-ß-Gal催化X-gal的水解，在衰老细胞中产生蓝色。使用标准光学显微镜可视化结果。

艾美捷细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒基本参数：

全称：细胞衰老检测试剂盒（细胞衰老相关β-半乳糖苷酶染色法）

英文：Cellular Senescence Detection Kit (SA-β-Gal Staining)

编号：CBA-230

规格：50assays/5 x 50 assays

保存：4ºC

艾美捷细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒试剂的制备

•1X固定溶液：通过将提供的100X原液稀释成1:100的1X溶液，制备1X固定溶液

PBS。将稀释的溶液在室温下储存六个月。

•细胞染色工作溶液：根据

样本数量。以下图表适用于35mm板中的样品

相应地修改以适合其他培养板尺寸。

分析方案（35mm皿）：

1.从表达SA-ß-Gal的衰老细胞中吸出培养基。

2.用3 mL 1X PBS洗涤细胞两次，并吸出最终洗涤液。

3.加入2mL 1X固定溶液。在室温下孵育5分钟。

4.取出固定溶液，用3mL 1X PBS洗涤固定细胞三次。

5.吸入最后一次洗涤液，并通过添加2 mL新鲜制备的细胞完全覆盖细胞染色工作溶液。

6.在37ºC避光条件下培养细胞4小时至过夜。

7.取出细胞染色工作溶液，然后用3 mL 1X洗涤染色细胞两次PBS并将细胞储存在1X PBS中。对于长期储存，用1X PBS覆盖细胞20%甘油。储存在4ºC。

注：通过将染色样品与DMSO。

8. 使用光学显微镜计数蓝色染色的衰老细胞。

细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒文献参考：

1. Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons Press.

2. Campisi, J. (2000) In Vivo 14, 183-188.

3. Dimri, G. P., X. Lee, G. Basile, M. Acosta, G. Scott, C. Roskelley, E. E. Medrano, M. Linskens, I.

Rubelj, O. Pereira-Smith, M. Peacocke, and J. Campisi. (1995) Proc. Natl. Acad. Sci. USA

92:9363-9367.

来源：https://www.amyjet.com/products/CBA-230.shtml

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中英文说明书丨艾美捷CTLA-4体内抗体介绍

The Cellular Senescence Assay Kit provides an easy-to-use and efficient method to determine cellular

senescence. SA-β-galactosidase catalyzes the hydrolysis of X-gal, which produces a blue color. Each

kit provides sufficient quantities to perform up to 50 assays in 35 mm dishes.

Kit Components

1. 100X Fixing Solution (Part No. 40010): One tube – 1.5 mL of 25% Glutaraldehyde

2. Staining Solution A (Part No. 40011): One tube – 1.5 mL of 500 mM Potassium Ferrocyanide

3. Staining Solution B (Part No. 40012): One tube – 1.5 mL of 500 mM Potassium Ferricyanide

4. Staining Solution C (Part No. 40015): One bottle – 4.5 mL of 1 M Citrate-Na2HPO4 Buffer, pH

6.0, 50 mM MgCl2

5. Staining Solution D (Part No. 40016): One bottle – 4.0 mL of 5 M NaCl

6. X-gal Solution (Part No. 40014): Two tubes – 1.5 mL of 40 mg/mL X-gal in DMF in each tube

Store X-gal solution protected from light at -20ºC. Store all other components at 4ºC

Preparation of Reagents

• 1X Fixing Solution: Prepare a 1X Fixing Solution by diluting the provided 100X stock 1:100 in 1X

PBS. Store the diluted solution at room temperature for up to six months.

• Cell Staining Working Solution: Prepare FRESH cell staining working solution based on the

number of samples. The chart below is suggested for samples in 35 mm plate, and may be

modified accordingly to suit other culture plate sizes.

衰老细胞表现出常见的生化标志物，如酸性衰老相关的ß-半乳糖苷酶（SA-ß-Gal）活性的表达。虽然衰老主要表现在培养的细胞，也有证据表明它发生在体内。表达衰老标志物的细胞

如SA-ß-Gal已在正常组织中被鉴定。

ichorbio艾美捷抗CTLA-4体内抗体-低内毒素（9D9）提供了一种易于使用且有效的方法来测定细胞衰老衰老。β-半乳糖苷酶催化X-gal水解，产生蓝色。每个试剂盒提供了足够的量，可以在35mm的培养皿中进行多达50次测定。

ichorbio艾美捷抗CTLA-4体内抗体化学性质：

同种型对照：小鼠体内低内毒素IgG2b同型对照[MPC-11]（ICH2250）

针对同一目标的抗体：抗CTLA-4体内抗体-低内毒素[9H10]（ICH1084），抗CTLA-4体内抗体-低内毒素[UC10-4F10-11]（ICH1085），抗CTLA-4体内抗体-超低内毒素[9H10]（ICH1084UL）

规格：1mg，5mg，25mg，50mg和100mg

同种型：小鼠IgG2b

其他名字：Ctla4，细胞毒性T淋巴细胞蛋白4，CD152

Uniprot：P09793

宿主：老鼠

物种反应性：老鼠

特异性：抗CTLA-4体内抗体-低内毒素（9D9）识别小鼠CTLA-4上的表位

净化方法：根据种类和同种型，使用多步亲和层析方法如蛋白A或G纯化该单克隆抗体。

抗原分布：活化的T细胞

背景：T细胞活化的负调节剂

浓度：1.0-5.0毫克/毫升

存储：当在2-8℃下储存时，该抗体稳定至少4周。对于长期储存，在不稀释的情况下分装在工作体积中并储存在-20°C或-80°C。避免反复冻融循环。

应用：蛋白质印迹，功能测定

当使用ichorbio的CTLA-4低内毒素抗体克隆9D9进行体内研究时，建议每只小鼠使用50-250μg。

纯度：>通过SDS-PAGE和HPLC测定为95%

内毒素：≤ 通过LAL方法测定的1.0Eu/mg

聚合：聚合级别≤ 5%

仅供研究使用。不用于诊断或治疗程序。

以上，就是有关ichorbio艾美捷抗CTLA-4体内抗体的相关说明。

来源：https://www.amyjet.com/products/ICH1096.shtml

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Kamiya丨Kamiya艾美捷人血红蛋白ELISA说明书

Kamiya艾美捷人血红蛋白ELISA预期用途：

人血红蛋白ELISA是一种高度灵敏的双位点酶联免疫分析（ELISA）人类生物样品中血友病蛋白的测定。仅供研究使用。不用于诊断程序。

引用：

血红素（HX）是已知蛋白质中与血红素结合亲和力最高的血浆蛋白。主要是在肝脏中表达，属于急性期反应物，其合成在炎症后被诱导。本ELISA可用于测量血清、组织提取物和其他生物液体中的血友病。

Kamiya艾美捷人血红蛋白ELISA原理：

双抗体夹心ELISA的原理如图1所示。在本试验中样品与吸附在聚苯乙烯微量滴定仪表面的抗血友病抗体反应井。通过洗涤去除未结合的蛋白质后，与辣根过氧化物酶缀合的抗HX抗体（HRP）。这些酶标记的抗体与先前结合的HX形成复合物。跟随另一个洗涤步骤，通过添加显色底物3,3'，5,5'来测定与免疫吸附结合的酶-TMB。结合酶的数量直接随样品中HX的浓度而变化测试；因此，在450nm处的吸光度是测试样品中HX浓度的量度。HX的数量在测试样品中，可以从由校准器构建的校准曲线中插值，并校正样品稀释。

Kamiya艾美捷人血红蛋白ELISA组件：

1.浓缩稀释剂

一瓶含有50mL 5X浓缩稀释液流动缓冲液。

2.浓缩洗涤液

一瓶含有50mL 20X浓缩洗涤液。

3.酶抗体结合物浓缩物

一个小瓶含有150µL的100X浓缩亲和纯化的抗人血友病抗体，该抗体与

稳定缓冲液中的HRP。

4.TMB基板溶液

一瓶含有12mL TMB和过氧化氢的柠檬酸缓冲液（pH 3.3）。

5.停止解决方案

一瓶含12 mL 0.3 M硫酸。

警告：避免接触皮肤。

6.微量滴定板

12个可拆卸的8个井条，位于井支架框架内。用亲和纯化的抗人HX涂覆孔。

7.人血红蛋白校准仪

一个装有冻干人血凝素校准品的小瓶。

需要但未提供的材料

•用于配制和分配稀释液的精密移液管（2µL至200µL）

•试管

•微孔板洗涤器/吸气器

•蒸馏或去离子水

•微孔板读取器

•用于制备试剂和缓冲溶液的各种玻璃器皿

•计时器

•用于样本采集的离心机

•血浆采集抗凝剂

Kamiya基于免疫比浊技术的临床诊断和研究免疫分析工具，用于脂质评估、凝血、炎症、糖尿病、营养评估和血清蛋白测量。艾美捷科技是Kamiya的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/brand/Kamiya.shtml

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Kamiya丨Kamiya艾美捷大鼠成纤维细胞生长因子2说明书

Kamiya艾美捷大鼠成纤维细胞生长因子2，碱性（FGF2）ELISA预期用途：

该试剂盒是一种夹心酶免疫分析法，用于在体外定量测量大鼠FGF2血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解物、细胞培养上清液和其他生物液体。对于仅供研究使用。

Kamiya艾美捷该试剂盒组件：

试剂  数量

预涂，即用96孔条形板1

校准器2

校准稀释剂1×20 mL

检测试剂A 1×120μL

检测试剂B 1×120μL

测定稀释剂A 1×12 mL

测定稀释剂B 1×12 mL

TMB基质1×9 mL

停止溶液1×6 mL

洗涤缓冲液（30X浓缩液）1×20 mL

96口井的封板器4

存储：

所有试剂应按照小瓶上的标签保存。校准器、检测试剂A、检测试剂B和96孔带板应在收到后储存在-20°C，而其他试剂温度应为4°C。未使用的板条应保存在密封袋中，并提供干燥剂尽量减少接触潮湿空气。打开的测试试剂盒将在1个月内保持稳定，前提是将其储存为如上所述。

Kamiya艾美捷大鼠成纤维细胞生长因子2试验原理：

本试剂盒中提供的微孔板已预涂有FGF2特异性抗体然后将样品加入到适当的微孔板孔中，加入生物素缀合的抗体接下来，将与辣根过氧化物酶（HRP）缀合的阿维丁添加到每个微孔板孔中培养。加入TMB底物溶液后，仅含有FGF2、生物素缀合的孔抗体和酶结合的Avidin将呈现颜色变化。通过加入硫酸溶液终止，并测量颜色变化在450nm±10nm的波长下进行分光光度测定。样品中FGF2的浓度为然后通过将样品的外径与校准曲线进行比较来确定。

试剂制备：

使用前，将所有套件组件和样品置于室温（18-25°C）。如果不使用该套件一次性用完，请只取出本次实验的试纸和试剂，剩下的在所需条件下使用试纸条和试剂。

用1.0 mL校准品稀释剂重新配制校准品，在室温下保持10分钟，轻轻摇动（不要起泡）。储备溶液中校准品的浓度为4000 pg/mL。请首先将储备溶液稀释至1000 pg/mL，稀释后的校准品为最高值校准器（1000 pg/mL）。然后准备7支含有0.5 mL校准稀释剂的试管，并使用稀释的校准器，以根据下图所示的图片产生双稀释系列。混合每根管子在下一次转移之前彻底清除。设置7个稀释校准器点，250 pg/mL、125 pg/mL、62.5 pg/mL，31.2 pg/mL和15.6 pg/mL，以及最后一支带校准仪的EP管稀释剂为空白，为0 pg/mL。

化验程序：

1.确定稀释校准品、空白和样品的孔。准备7口井用于校准器，1口井用于空白的将100µL稀释的校准品（读取试剂制备）、空白和样品加入适当的井。用板密封剂覆盖。在37°C下孵育1小时。

2.去除每个井的液体，不要清洗。

3.向每个孔中加入100µL检测试剂A工作溶液，用平板覆盖孔密封并在37°C下孵育1小时。

4.吸入溶液，并使用喷射瓶用350µL 1X冲洗溶液冲洗每个孔，多通道移液管、歧管分配器或自动清洗机，并静置1~2分钟。删除通过将板扣在吸水纸上，将所有孔中的液体完全保留。完全清洗3时间。最后一次洗涤后，通过抽吸或滗析去除剩余的洗涤缓冲液。反转把它放在盘子里，用吸水纸吸住。

5.向每个孔中加入100µL检测试剂B工作溶液，用平板覆盖孔密封并在37°C下孵育30分钟。

6.如步骤4所述，重复抽吸/洗涤过程共5次。

7.向每个孔中加入90µL基质溶液。用新的板材密封剂覆盖。培养10-20 37°C时为分钟（不要超过30分钟）。避光。加入后，液体会变成蓝色基板溶液的。

8.向每个孔中加入50µL停止溶液。加入停止溶液后，液体将变黄。轻敲盘子的侧面，混合液体。如果颜色变化不均匀，请轻按以确保充分混合。

9.去除盘子底部的水滴和指纹，确认没有气泡在液体表面上。然后，运行微板读取器并在450 nm处进行测量立即。

Kamiya基于免疫比浊技术的临床诊断和研究免疫分析工具，用于脂质评估、凝血、炎症、糖尿病、营养评估和血清蛋白测量。艾美捷科技是Kamiya的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/brand/Kamiya.shtml

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Kamiya丨Kamiya艾美捷AREG酶联免疫吸附试验原理

Kamiya艾美捷AREG酶联免疫吸附试验预期用途：

该试剂盒是一种用于体外定量测量大鼠AREG的夹心酶免疫测定法血清、血浆和其他生物流体。仅供研究使用。不用于诊断程序。

存储：

所有试剂应按照小瓶上的标签保存。校准器、检测试剂A、检测试剂B和96孔带板应在收到后储存在-20°C。这个未使用的胶带应保存在密封袋中，并提供干燥剂，以尽量减少受潮空气打开的测试试剂盒将保持稳定，直到显示的到期日期，前提是按照规定储存在上面。

Kamiya艾美捷AREG酶联免疫吸附试验原理：

本试剂盒中提供的微量滴定板已预先涂有AREG特异性抗体。然后将校准物或样品加入适当的微量滴定板孔中，加入生物素偶联物AREG特异性抗体制剂。接下来，结合辣根过氧化物酶（HRP）的阿维丁是添加到每个微孔板孔中并孵育。然后向每个孔中加入TMB基质溶液。只有那些含有AREG、生物素结合抗体和酶结合Avidin的孔将表现出颜色的变化。通过加入硫酸溶液终止酶-底物反应并且在450nm±10nm的波长下用分光光度法测量颜色变化。然后通过将样品的外径与校准曲线。

校准器：

用1.0 mL校准品稀释剂重新配制校准品，在室温下保持10分钟，轻轻摇动（不要起泡）。储备溶液中校准品的浓度为2000 pg/mL。请准备7支含有0.5 mL校准稀释剂的试管，并制作一个双稀释系列如下图所示。在下一次转移之前，彻底混合每根管。设置7个点稀释的校准品，如2000 pg/mL、1000 pg/mL，500 pg/mL和250 pg/mL以及125 pg/mL或62.5 pg/mL，

31.2 pg/mL，最后一支带有校准稀释剂的EP管为空白，为0 pg/mL。

Kamiya艾美捷该试剂盒样品制备：

1.用户应计算整个过程中可能使用的样本量测验请提前预留足够的样品。

2.分析前请预测浓度。如果这些值不在校准曲线，用户必须为其特定实验确定最佳样品稀释度。

3.如果手册中未指明样品，则进行初步实验以确定套件是必要的。

4.通过化学裂解缓冲液制备的组织或细胞提取样品可能导致意外的ELISA由于某些化学品的影响而导致的结果。

5.由于来自其他来源的抗原与用于Kamiya的试剂盒（例如，抗体靶向构象表位而非线性表位），一些天然或Kamiya的试剂盒可能无法识别来自其他制造商的重组蛋白。

6.受细胞活力、细胞数量和采样时间等因素的影响试剂盒可能检测不到细胞培养上清液。

7.建议在试验中使用不长时间储存的新鲜样品。否则，蛋白质降解并且在这些样品中可能发生变性并最终导致错误的结果。

Kamiya基于免疫比浊技术的临床诊断和研究免疫分析工具，用于脂质评估、凝血、炎症、糖尿病、营养评估和血清蛋白测量。艾美捷科技是Kamiya的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/brand/Kamiya.shtml

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Kamiya丨Kamiya艾美捷小鼠BDNF ELISA原理分析

Kamiya艾美捷小鼠BDNF ELISA预期用途：

小鼠BDNF ELISA用于定量测定小鼠细胞培养物上清液、细胞裂解物、细胞培养物中的BDNF，

血清和血浆（肝素、EDTA、柠檬酸盐）。仅供研究使用。

引言：

脑源性神经营养因子（BDNF）是一种由皮层神经元诱导的生存因子，是生存所必需的大脑中纹状体神经元的数量。它是一种分泌蛋白，分子量为27.8kDa，由247个氨基酸组成酸。众所周知，它能促进神经元的存活和分化。BDNF具有基本的氨基酸序列同一性神经生长因子（NGF）。BDNF和神经营养因子-3（NT-3）是最近克隆的两种神经营养因子与NGF同源。在成人大脑中检测到BDNF和NT-3基因的mRNA产物，这表明这些蛋白质参与成人神经系统的维持。BDNF和其他神经营养因子至关重要参与长期增强（LTP）。BDNF介导的LTP在突触后被诱导。BDNF对中枢神经系统中的5-羟色胺能（5-HT）神经元。BDNF在法规中具有重要的维护功能在基础状态和禁食状态下，焦虑相关行为和通过中枢介质摄入的食物。它扮演了一个角色用于治疗脊柱损伤后呼吸功能不全等呼吸障碍。BDNF的成熟形式在所有检查的哺乳动物，以及编码人类BDNF至第11号染色体p13条带的基因。

Kamiya艾美捷小鼠BDNF ELISA原理：

小鼠BDNF预包被ELISA（酶联免疫吸附测定）试剂盒是一种固相免疫测定试剂盒设计用于用预涂有BDNF特异性抗体的96孔带板测量小鼠BDNF。这个检测抗体是对BDNF特异性的生物素化抗体。捕获抗体是来自大鼠的单克隆抗体，检测抗体为山羊多克隆抗体。该试剂盒包含具有免疫原的重组小鼠BDNF：校准器表达系统：sf21；免疫原序列：H129-R247。试剂盒经分析验证使用试剂。为了测量小鼠BDNF，向孔中加入校准物和样品，然后加入生物素化检测抗体。洗用PBS或TBS缓冲液洗涤孔，并加入阿维丁-生物素过氧化物酶复合物（ABC-HRP）。洗去无界ABC-HRP与PBS或TBS缓冲液混合，并加入TMB。TMB是HRP的底物，将被催化产生蓝色产品，加入酸性停止溶液后变为黄色。黄色产物的密度为线性与样品中的小鼠BDNF成比例。使用读板器读取每个孔中黄色产品的密度，以及将样品井读数与校准曲线进行比较，以确定小鼠BDNF在样品。

Kamiya艾美捷小鼠BDNF ELISA组件：

1.抗小鼠BDNF预涂96孔条微孔板：1（8孔12条）

2.小鼠BDNF校准器：10 ng/管x 2

3.小鼠BDNF生物素化抗体（100X）：130µL

4.阿维丁生物素过氧化物酶复合物（100X）：130µL

5.样品稀释剂：30mL

6.抗体稀释剂：12 mL

7.阿维丁生物素过氧化物酶稀释剂：12 mL

8.显色剂（TMB）：10mL

9.停止溶液：10mL

10.封板器：4

11.洗涤缓冲液浓缩液（25X）：20 mL

Kamiya小鼠BDNF ELISA试剂盒校准曲线：

校准曲线仅用于演示。应为每组样本生成校准曲线分析

Kamiya基于免疫比浊技术的临床诊断和研究免疫分析工具，用于脂质评估、凝血、炎症、糖尿病、营养评估和血清蛋白测量。艾美捷科技是Kamiya的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/brand/Kamiya.shtml

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Kamiya丨Kamiya艾美捷小鼠脱细胞素ELISA说明书

Kamiya艾美捷小鼠脱细胞素ELISA预期用途：

该试剂盒是一种夹心酶免疫分析法，用于体外定量测定小鼠bTC血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解物和其他生物液体。仅供研究使用。

存储：

所有试剂应按照小瓶上的标签保存。校准器、检测试剂A、检测试剂B和96孔带板应在收到后储存在-20°C，而其他试剂温度应为4°C。未使用的板条应保存在密封袋中，并提供干燥剂尽量减少接触潮湿空气。打开的测试试剂盒将在1个月内保持稳定，前提是将其储存为如上所述。

Kamiya艾美捷小鼠脱细胞素ELISA试验原理：

该试剂盒中提供的微孔板已预先涂有bTC特异性抗体。校准器或然后将样品加入到适当的微孔板孔中，加入生物素缀合的抗体bTC。接下来，将与辣根过氧化物酶（HRP）偶联的阿维丁添加到每个微孔板孔中培养。加入TMB底物溶液后，仅含有bTC、生物素缀合物的孔抗体和酶结合的Avidin将呈现颜色变化。酶底物反应是通过加入硫酸溶液终止，并测量颜色变化在450nm±10nm的波长下进行分光光度测定。样品中bTC的浓度为然后通过将样品的外径与校准曲线进行比较来确定。

Kamiya艾美捷小鼠脱细胞素ELISA试剂制备：

使用前，将所有套件组件和样品置于室温（18-25°C）。如果不使用该套件一次性用完，请只取出本次实验的试纸和试剂，剩下的在所需条件下使用试纸条和试剂。

校准器：

用1.0 mL校准品稀释剂重新配制校准品，在室温下保持10分钟，轻轻摇动（不要起泡）。储备溶液中校准品的浓度为20000 pg/mL。请首先将储备溶液稀释至1000 pg/mL，稀释后的校准品为最高值校准器（1000 pg/mL）。然后准备7支含有0.5 mL校准稀释剂的试管，并使用稀释的校准器，以根据下图所示的图片产生双稀释系列。混合每根管子在下一次转移之前彻底清除。设置7个稀释校准器点，250 pg/mL、125 pg/mL、62.5 pg/mL，31.2 pg/mL和15.6 pg/mL，以及最后一支带校准仪的EP管稀释剂为空白，为0 pg/mL。

注：

1.测定前15分钟内准备校准品。请不要在37°C下溶解试剂

2.不允许直接在井中进行连续稀释。

3.避免起泡并轻轻混合，直到晶体完全溶解。最小化由于移液引起的不精确性，使用小容量，并确保移液器经过校准。它是建议吸移一次超过10µL。

4.重组校准品、检测试剂A和检测试剂B只能使用一旦

5.如果洗涤液浓缩液（30X）中已形成晶体，则加热至室温并混合直到晶体完全溶解。

6.受污染的水或试剂制备容器会影响检测结果。

样品制备：

1.Kamiya只负责试剂盒本身，但不负责化验过程中消耗的样品。这个用户应计算整个测试中可能使用的样本量。请保留提前提供足够的样品。

2.分析前请预测浓度。如果这些值不在校准曲线，用户必须为其特定实验确定最佳样品稀释度。

3.血清/血浆样品需要约5倍稀释。建议5倍稀释为40µL样品+160µL PBS。样品应用0.01 mol/L PBS（PH=7.0-7.2）稀释。

4.如果手册中未指明样品，则进行初步实验以确定套件是必要的。

5.通过化学裂解缓冲液制备的组织或细胞提取样品可能导致意外的ELISA由于某些化学品的影响而产生的结果。

6.由于来自其他来源的抗原和我们试剂盒中使用的抗体之间可能不匹配（例如，抗体靶向构象表位而非线性表位），一些天然或重组Kamiya的产品可能无法识别来自其他制造商的蛋白质。

7.受细胞活力、细胞数量或采样时间等因素的影响试剂盒可能检测不到培养上清液。

8.建议在试验中使用未经长时间储存的新鲜样品。否则，蛋白质这些样品可能发生降解和变性，最终导致错误的结果。

Kamiya基于免疫比浊技术的临床诊断和研究免疫分析工具，用于脂质评估、凝血、炎症、糖尿病、营养评估和血清蛋白测量。艾美捷科技是Kamiya的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/brand/Kamiya.shtml