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高灵敏度艾美捷小鼠肿瘤坏死因子α-ELISpot试剂盒

肿瘤坏死因子-a（TNF-a）由许多不同的细胞类型产生，例如单核细胞，巨噬细胞，T细胞和B细胞。在TNF-a的许多作用中，有针对细菌感染，细胞生长调节，免疫系统调节和参与败血症性休克的保护。

艾美捷小鼠肿瘤坏死因子α-ELISpot试剂盒非常适合对实验便捷性与灵敏度有高要求的客户。该试验设计用于计数分泌该分析物的细胞。该试剂盒提供，预包被单克隆抗体的ELISpot板，生物素化的检测抗体，链霉抗生物素蛋白-ALP和即用型BCIP/NBT-plus底物。

艾美捷小鼠肿瘤坏死因子α-ELISpot试剂盒组分：

Biotinylated detection mAb (MT11B10)

Streptavidin-ALP

Substrate (BCIP/NBT-plus)

2 Pre-coated MSIP white plates (mAbs MT1C8/23C9)

图：ELISpotPLUS试剂盒包含预涂有单克隆抗体、检测抗体、链霉亲和素酶缀合物和ELISpot底物的平板。小瓶顶部的颜色可能不同。

相关文献：

Chen，G.等人（2019）。mTOR途径基因的异常DNA甲基化促进糖尿病肾病中免疫细胞的炎症激活。肾脏Int。

Chida，J.等人（2018）。朊蛋白保护小鼠免受甲型流感病毒的致命感染。PLoS病理学。

艾美捷小鼠肿瘤坏死因子α-ELISpot试剂盒相关研究：

3511-1H-6 ELISA Flex: Mouse TNF-α (HRP) for 6 plates

3511-4HPW-2 ELISpot Plus: Mouse TNF-α (HRP) 2 plates

来源：https://www.amyjet.com/products/3511-4APW-2.shtml

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艾美捷小鼠肿瘤坏死因子α-ELISpot试剂盒使用指南

ELISpot Plus for enumeration of cells secreting TNF-α

This kit is ideal for users who want a convenient and sensitive assay. The assay is designed for the enumeration of cells secreting mouse TNF-α. The kit includes ELISpot plates pre-coated with monoclonal antibody, biotinylated detection antibody, Streptavidin-ALP and ready-to-use BCIP/NBT-plus substrate.

Pre-coated plates reduce assay time and minimize variability.

艾美捷小鼠肿瘤坏死因子α-ELISpot试剂盒基本参数：

中文名称：小鼠肿瘤坏死因子α-ELISpot试剂盒

英文名字：ELISpot Plus: Mouse TNF-alpha (ALP)

编号：3511-4APW-2

规格：2plates

应用程序：ELISpot

反应性：老鼠

BCIP/NBT加基质（25 ml）

检测抗体在含0.02%叠-氮化钠的无菌过滤（0.2μm）PBS中提供。Streptavidin ALP以0.1M Tris缓冲液和0.002%Kathon CG提供。小瓶已过满，以确保回收规定量。

存储：在环境温度下运输。到达时，所有试剂应在4-8°C下冷藏储存。板材应保持在室温下。

艾美捷小鼠肿瘤坏死因子α-ELISpot试剂盒使用指南：

A ELISpot板的制备（无菌条件）

1.从密封包装中取出平板，用无菌PBS（200μl/孔）洗涤4次。

2.用含有10%与细胞悬浮液相同血清的培养基（200μl/孔）调节平板。在室温下培养至少30分钟。

B在平板中培养细胞（无菌条件）

1.取出培养基，加入刺激物，然后加入细胞悬浮液。或者，细胞和刺激物可以在加入平板之前混合。

2.将平板置于37°C的含5%CO2的加湿培养箱中，培养12-48小时。在此期间不要移动板，并采取措施避免蒸发（例如，用铝箔包裹板）。

C斑点检测

1.通过清空平板去除细胞，并用PBS（200μl/孔）洗涤5次。

2.在含有0.5%胎牛血清（PBS-0.5%FCS）的PBS中将检测抗体（MT11B10生物素）稀释至0.5μg/ml。加入100μl/孔，在室温下孵育2小时。

3.如上所述清洗板（步骤C1）。

4.将Streptavidin ALP（1:1000）在PBS-0.5%FCS中稀释，并加入100μl/孔。在室温下孵育1小时。

5.如上所述清洗板（步骤C1）。

6.通过0.45μm过滤器过滤即用基质溶液（BCIP/NBT plus），并添加100μl/孔。直到出现明显的斑点。

7.通过在自来水中大量冲洗来阻止颜色发展。如果需要，移除暗渠（板下的软塑料）并冲洗膜的下侧。

8.让盘子保持干燥。在ELISpot读取器或解剖显微镜中检查和计数斑点。

9.在室温下将盘子存放在黑暗中。

来源：https://www.amyjet.com/products/3511-4APW-2.shtml

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ImmunoChemistry艾美捷自噬试验，红色解决方案

ImmunoChemistry艾美捷ICT的自噬测定，红色使研究人员能够检测和监测活细胞中自噬的体外发育。自噬探针是细胞渗透性的，插入自噬体和自溶体的脂质膜时发出红色荧光。可以使用流式细胞仪读取结果。

自噬是一种保守的溶酶体循环过程，细胞通过该过程分解自身的成分，如蛋白质、脂质和碳水化合物。这一过程在维持体内稳态和破坏细胞内病原体方面发挥着重要作用。此外，自噬可以在饥饿或压力时上调，为细胞提供额外的营养。自噬的失调对癌症、感染和退行性疾病有影响。自噬是一个三阶段的过程。首先，降解的细胞质成分被隔离，导致自噬体的形成。接下来，自噬体与溶酶体融合形成自噬体或自溶体。最后，发生自噬体内容物的降解。

ImmunoChemistry艾美捷自噬试验，红色化学性质：

目标自噬

激发/发射590 nm/620 nm

分析方法流式细胞术

样品类型细胞培养

存储自噬探针≤-20°C，2-8°C时的其他部件

ImmunoChemistry艾美捷自噬试验，红色组分：

Kit 9156: 50 Tests

Autophagy Probe, Red, 1 vial, #6701

10X Cellular Assay Buffer, 15 mL, #6694

Fixative, 6 mL, #636

Kit Manual

Kit 9157: 200 tests

Autophagy Probe, Red, 4 vials, #6701

10X Cellular Assay Buffer, 60 mL, #6695

Fixative, 6 mL, #636

Kit Manual

相关文献：

Tazi, N;Semlali, A;Loubaki, L;Alamri, A;Rouabhia, M. Cannabis smoke condensate induces human gingival epithelial cell damage through apoptosis, autophagy, and oxidative stress. Archives of oral biology. 2022 September 1; doi: 10.1016/j.archoralbio.2022.105498.

Czarnomysy R, Radomska D, Muszyńska A, Hermanowicz JM, Prokop I, Bielawska A, Bielawski K. Evaluation of the Anticancer Activities of Novel Transition Metal Complexes with Berenil and Nitroimidazole. Molecules. 2020 Jun 21;25(12):2860. doi: 10.3390/molecules25122860. Abstract

ImmunoChemistry Technologies简称"ICT",提供各种细胞蛋白酶、细胞凋亡与细胞毒性检测试剂盒等研究工具，同时包含高质量高灵敏度的 ELISA开发试剂。艾美捷科技是ImmunoChemistry的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/brand/Immunochemistry.shtml

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ImmunoChemistry艾美捷细胞内总ROS活性测定方案

ImmunoChemistry艾美捷ICT的细胞内总ROS活性测定为评估氧化应激抑制剂和活化剂的效力提供了一个很好的筛选选择，并将有助于确定氧化应激如何调节不同的细胞内途径。该产品可评估细胞内ROS活性的总体水平，并可使用流式细胞仪进行分析。

活性氧（ROS）是正常氧代谢的天然副产物，在细胞信号传导中起着重要作用。然而，在氧化应激相关状态下，ROS水平会显著增加。ROS的积累导致细胞结构的严重损伤。氧化应激在心血管疾病、糖尿病、骨质疏松症、中风、炎症性疾病、许多神经退行性疾病和癌症中的作用已经得到充分证实。ICT的细胞内总ROS活性测定为评估氧化应激抑制剂和活化剂的效力提供了一个很好的筛选选择，并将有助于确定氧化应激如何调节不同的细胞内途径。该试剂盒评估细胞内ROS活性的总体水平，但不确定氧化应激事件产生的特定活性氧分子。分析中的关键试剂是一种称为Total ROS Green的专利染料。这种染料迅速穿透膜结构并在细胞内积聚。在ROS存在下，非荧光的总ROS绿色染料分子被ROS分子形式的各种迭代氧化。在氧化状态下，总ROS绿色染料分子获得荧光性质，使其能够通过流式细胞术检测，作为细胞内ROS活性相对水平的指标。

ImmunoChemistry艾美捷细胞内总ROS活性测定化学性质：

目标ROS

激发/发射490 nm/520 nm

分析方法流式细胞术

样品类型细胞培养

储存总ROS绿色和DMSO≤-20°C，测定缓冲液≤2-8℃

ImmunoChemistry艾美捷细胞内总ROS活性测定组分：

Total ROS Green, lyophilized, 1 vial, #6688

DMSO, 200 µL, 1 vial, #6689

Assay Buffer, 10X, 15 mL, #686

Kit Manual

相关文献：

Kaproń B, Czarnomysy R, Wysokiński M, Andrys R, Musilek K, Angeli A, Supuran CT, Plech T. 1,2,4-Triazole-based anticonvulsant agents with additional ROS scavenging activity are effective in a model of pharmacoresistant epilepsy. J Enzyme Inhib Med Chem. 2020 Dec;35(1):993-1002. doi: 10.1080/14756366.2020.1748026.

ImmunoChemistry Technologies简称"ICT",提供各种细胞蛋白酶、细胞凋亡与细胞毒性检测试剂盒等研究工具，同时包含高质量高灵敏度的 ELISA开发试剂。艾美捷科技是ImmunoChemistry的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

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ImmunoChemistry艾美捷基本细胞毒性试验试剂盒测定方案

ImmunoChemistry艾美捷基本细胞毒性试验试剂盒是一种通过流式细胞仪测定细胞毒性的单管双色试验。该试验使用绿色荧光细胞染色剂CFSE标记靶细胞，使用红色活/死活性染料7-AAD识别细胞毒性试验样品中存在的死细胞。使用流式细胞仪分析结果。

细胞裂解活性是清除细胞内病原体和癌细胞的重要过程。ICT的基本细胞毒性分析试剂盒允许您评估细胞培养中的细胞溶解活性。基本细胞毒性检测试剂盒包括两种荧光试剂：CFSE和7-AAD。CFSE是一种绿色荧光膜染色剂，用于识别目标细胞群。加入未染色的效应细胞并与靶细胞孵育。然后加入7-AAD，一种红色荧光活/死染色剂，通过结合膜受损细胞的DNA将所有坏死细胞染成红色。目标细胞和效应细胞群可以很容易地区分，流式细胞仪可以很容易识别活细胞和坏死细胞。

ImmunoChemistry艾美捷基本细胞毒性试验试剂盒化学性质：

试剂名称7-AAD，CFSE

靶细胞介导的细胞毒性

激发/发射7-AAD–546 nm/647 nm CFSE–492 nm/520 nm

分析方法流式细胞术

样品类型细胞培养

存储CFSE≤ -20°C，2-8°C时的其他部件

ImmunoChemistry艾美捷基本细胞毒性试验试剂盒组分：

Kit 969: 125 Tests

CFSE target cell stain, 1 vial, #6162

7-AAD vital stain, 1 vial, #6163

10X Assay Buffer, 30 mL, #6161

Kit Manual

Kit 970: 250 Tests

CFSE target cell stain, 1 vial, #6162

7-AAD vital stain, 2 vials, #6163

10X Assay Buffer, 60 mL, #685

Kit Manual

相关文献：

Huang H, Zhang Y, Gallegos V, Sorrelle N, Zaid MM, Toombs J, Du W, Wright S, Hagopian M, Wang Z, Hosein AN, Sathe AA, Xing C, Koay EJ, Driscoll KE, Brekken RA. Targeting TGFβR2-mutant tumors exposes vulnerabilities to stromal TGFβ blockade in pancreatic cancer. EMBO Mol Med. 2019 Nov 7;11(11):e10515. doi: 10.15252/emmm.201910515. Epub 2019 Oct 14.

ImmunoChemistry Technologies简称"ICT",提供各种细胞蛋白酶、细胞凋亡与细胞毒性检测试剂盒等研究工具，同时包含高质量高灵敏度的 ELISA开发试剂。艾美捷科技是ImmunoChemistry的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

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ImmunoChemistry艾美捷总细胞毒性试验试剂盒方案

ImmunoChemistry艾美捷总细胞毒性试验试剂盒是一种单管三色试验，用于定量评估细胞凋亡和坏死引起的细胞介导的细胞溶解活性。该试验采用绿色荧光细胞染色剂CFSE标记靶细胞，红色活/死活力染料7-AAD用于识别细胞毒性试验样品中存在的死细胞，橙红色SR-FLICA试剂SR-VAD-FMK用于测量靶细胞群中的半胱天冬酶活性。使用流式细胞仪分析结果。

细胞裂解活性是清除细胞内病原体和癌细胞的重要过程。ICT的总细胞毒性检测试剂盒允许您评估细胞培养中的细胞溶解活性。总细胞毒性测定试剂盒包括三种荧光试剂：CFSE、7-AAD和SR-FLICA。CFSE是一种绿色荧光膜染色剂，用于识别目标细胞群。加入未染色的效应细胞并与靶细胞孵育。SR-LFICA试剂与细胞一起孵育以鉴定那些含有活性胱天蛋白酶的细胞。然后加入7-AAD，一种红色荧光活/死染色剂，通过结合膜受损细胞的DNA将所有坏死细胞染成红色。通过流式细胞术，量化四种细胞群：活细胞、早期凋亡细胞、晚期凋亡细胞和坏死细胞。总细胞毒性试剂盒中的这种进一步的细胞分化导致更准确的细胞溶解活性评估。

ImmunoChemistry艾美捷总细胞毒性试验试剂盒化学性质：

试剂名称7-AAD、CFSE、SR-VAD-FMK

靶细胞介导的细胞毒性，多胱天蛋白酶

激发/发射7-AAD–546 nm/647 nm CFSE–492 nm/520 nm SR-FLICA–565 nm/600 nm

分析方法流式细胞术

样品类型细胞培养

存储CFSE≤ -20°C，2-8°C时的其他部件

协议：

准备样品和对照品

用diH2O稀释1:10的分析缓冲液并过滤消毒。

用200µL DMSO重新配制CFSE，并用1X测定缓冲液稀释1:250。

向目标细胞中加入200µL CFSE，使其呈绿色，并在室温下孵育15分钟。

清洗目标细胞并调整细胞浓度。

向靶细胞中加入效应细胞并孵育4-6小时。

用100µL DMSO重组SR-FLICA并稀释1:12.6。

添加10µL SR-FLICA，将凋亡细胞标记为橙红色，并在37°C下孵育45分钟。

用260µL DMSO重组7-AAD，并用1X测定缓冲液稀释1:10。

加入20µL 7-AAD标记坏死细胞为红色，并在冰上孵育10分钟。

运行对照并用流式细胞仪进行分析。通过分析FL-1（绿色）与FL-3（红色）来识别目标细胞。创建FL-2（橙色-红色）与FL-3（红色）的绘图。CFSE在492nm激发，在520-540nm发射；7-AAD在546nm激发并在647nm发射；SR-FLICA在565nm激发，在600nm发射。

ImmunoChemistry艾美捷总细胞毒性试验试剂盒组分：

Kit 971: 125 Tests

SR-FLICA Reagent (SR-VAD-FMK), 1 vial, #6221

CFSE target cell stain, 1 vial, #6162

7-AAD vital stain, 1 vial, #6163

10X Assay Buffer, 30 mL, #6161

Kit Manual

Kit 972: 250 Tests

SR-FLICA Reagent (SR-VAD-FMK), 2 vials, #6221

CFSE target cell stain, 1 vial, #6162

7-AAD vital stain, 2 vials, #6163

10X Assay Buffer, 60 mL, #685

Kit Manual

ImmunoChemistry Technologies简称"ICT",提供各种细胞蛋白酶、细胞凋亡与细胞毒性检测试剂盒等研究工具，同时包含高质量高灵敏度的 ELISA开发试剂。艾美捷科技是ImmunoChemistry的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

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ImmunoChemistry艾美捷绿色活/死染色解决方案

ImmunoChemistry艾美捷绿色活/死染色是一种活细胞不渗透、绿色荧光发射DNA染料，用于生存能力、细胞凋亡和坏死研究以及固定细胞核染色。本产品与坏死或渗透化细胞的dsDNA/细胞核结合，可与活细胞染料结合使用，用于活/死鉴别。使用流式细胞仪或荧光显微镜分析样品。

绿色活/死染色是一种用于区分活细胞和死细胞的不透膜荧光活性染色剂。这种绿色活/死染色剂是一种重要的染料，具有完整的细胞膜排斥特性，类似于流行的红色荧光活性染料碘化丙啶（PI）、7-氨基放线菌素D（7-AAD）和DRAQ7™. 与红色荧光DNA染料一样，绿色活/死染色因其极性而被排除在完整的健康细胞之外。在存在表现出受损膜完整性的细胞时，绿色活/死染色穿透细胞和核膜屏障，并以类似于PI和7-AAD的方式紧密插入DNA。当与DNA结合时，它在绿色发射范围内获得极大增强的荧光电势（>2000X）。这些重要的重要染料特性使绿色活/死染色能够用于基于流式细胞术的方案和显微镜分析技术，以评估样本细胞群中晚期凋亡、坏死和膜受损细胞的百分比。绿色荧光发射允许新的染料组合用于理解细胞死亡和凋亡，例如与红色SR-FLICA®检测、远红色FLICA 660半胱天冬酶检测和其他可见范围荧光标记配体一起使用。绿色活/死染色只染色死细胞和渗透细胞的细胞核。绿色活/死染色不会进入完整的活细胞。细胞可以固定或渗透，以使用绿色活/死染色作为核复染剂。绿色活/死染色的毒性可忽略不计，可用于长期生存能力测定，以评估细胞毒性和细胞凋亡。对于显微镜应用，绿色活/死染色将作为IF、IHC、高含量筛选和基于细胞的分析中固定细胞和组织样本的DNA复染剂。

ImmunoChemistry艾美捷绿色活/死染色试剂化学性质：

目标死亡细胞，坏死

当与核酸结合时，激发/发射495 nm/>512 nm

分析方法流式细胞术、荧光显微镜

样品类型细胞培养

储存-20°C

以500µM提供

ImmunoChemistry艾美捷绿色活/死染色试剂流式细胞术：

每个50µL小瓶足以进行1000次流式细胞仪测试。

在微型离心机中短暂旋转解冻的小瓶，以去除可能被困在瓶盖中的任何试剂。

在PBS中稀释1:100的绿色活/死染色浓缩储备溶液（500µM），以制备5000 nM的工作溶液。例如，向990µL PBS中加入10µL储备浓缩液。只准备实验所需的东西。应立即使用工作溶液，并丢弃任何剩余的稀释溶液。

用1:100稀释的5000 nM工作溶液加标样品。例如，用5µL工作溶液加标0.495 mL样品。

在室温下避光培养样品约10分钟。

使用488nm蓝色激光和530/30（FL1）发射滤光片设置或类似设置的流式细胞仪进行分析。

荧光显微镜

每个50µL小瓶足以容纳100个微量滴定板孔。

在微型离心机中短暂旋转解冻的小瓶，以去除可能被困在瓶盖中的任何试剂。

在PBS中稀释1:100的绿色活/死染色浓缩储备溶液（500µM），以制备5000 nM的工作溶液。例如，向990µL PBS中加入10µL储备浓缩液。只准备实验所需的东西。应立即使用工作溶液，并丢弃任何剩余的稀释溶液。

用1:10稀释的5000 nM工作溶液加标样品。例如，用50µL工作溶液加标0.45 mL样品。

在室温下避光培养样品约10分钟。

当与DNA结合时，绿色活/死染色的峰值吸收为495nm，最大发射为512nm。使用最接近这些设置的光学过滤器，用荧光显微镜进行可视化。

ImmunoChemistry Technologies简称"ICT",提供各种细胞蛋白酶、细胞凋亡与细胞毒性检测试剂盒等研究工具，同时包含高质量高灵敏度的 ELISA开发试剂。艾美捷科技是ImmunoChemistry的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/brand/Immunochemistry.shtml

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ImmunoChemistry艾美捷高级钙素AM细胞活力试剂盒方案

ImmunoChemistry艾美捷ICT的Advanced Calcein AM Cell Viability Kit将Calcein AM与7-AAD相结合，可轻松同时标记单个样本中的活细胞、膜受损细胞和死细胞。钙黄绿素AM用于检测绿色荧光的活细胞，而7-AAD用于检测红色荧光的坏死或晚期凋亡细胞。可以使用流式细胞仪或荧光显微镜分析样品。

评估细胞活力是评估新药物治疗和潜在细胞毒性治疗的关键步骤。ICT的Advanced Calcein AM Cell Viability Kit将Calcein AM与7-AAD相结合，可轻松同时标记单个样本中的活细胞、膜受损细胞和死细胞。钙黄绿素AM是一种透膜的荧光试剂，因其在评估不同细胞群体的相对细胞生存状态方面的效用而被广泛认可。钙黄绿素AM的整体疏水性使其能够以浓度梯度依赖的方式轻易穿过细胞膜的脂质双层结构。一旦进入细胞内，疏水性和非荧光钙黄素AM就会被活细胞中活跃的细胞内酯酶迅速水解。这导致两个非极性乙酰氧基甲酯（AM）基团的裂解和去除。一旦AM基团被裂解，产生的极性（亲水性）且现在具有荧光能力的钙黄绿素染料分子被有效地保留在细胞膜的范围内。由于细胞膜的疏水性脂质双层组成，极性染料分子自然会被排除在被动扩散回细胞之外。死亡细胞缺乏活性酯酶，不能裂解钙黄嘌呤AM。细胞膜完整性的丧失，通常表明坏死或晚期细胞凋亡，可以使用活性染色染料7-AAD（一种红色荧光活/死染色剂）来检测。这种染料很容易穿透细胞膜受损的细胞，与富含GC的DNA区域紧密结合。将这两种不同类型的荧光细胞状态指示试剂组合在一次测试中，通过能够识别绿色荧光钙黄绿素阳性细胞群中7-AAD阳性细胞与7-AAD阴性细胞的百分比，可以更好地分辨活细胞群和死细胞群。可以使用流式细胞仪或荧光显微镜分析样品。

ImmunoChemistry艾美捷高级钙素AM细胞活力试剂盒化学性质：

试剂名称Calcein AM，7-AAD

靶向细胞内酯酶，富含GC的DNA

激发/发射494 nm/520 nm、546 nm/647 nm

分析方法流式细胞术、荧光显微镜、荧光平板读取器

样品类型细胞培养

存储Calcein AM≤-20°C，2-8°C时的其他部件

ImmunoChemistry艾美捷高级钙素AM细胞活力试剂盒组分：

Calcein AM Reagent, 1 vial, #6696

7-Aminoactinomycin D (7-AAD) vital dye, 0.26 mg, 2 vials, #6163

Hoechst 33342, 1 vial, #639

10X Cellular Assay Buffer, 60 mL, 1 bottle, #6695

Kit Manual

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ImmunoChemistry艾美捷细胞内GSH测定试剂盒方案

用ImmunoChemistry艾美捷细胞内GSH测定评估细胞内谷胱甘肽水平的变化。这种全细胞谷胱甘肽测定采用专有的硫醇敏感染料ThioBright™ 绿色，以监测游离形式谷胱甘肽（即GSH）浓度的相对变化。通过流式细胞术分析荧光信号。

谷-胱-甘肽，γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酸甘氨酸或GSH，是细胞中最丰富的非蛋白质硫醇。GSH参与细胞内许多重要生化过程的调节。GSH最初被认为是对抗自由基副产物的毒性积累的关键细胞内还原力来源，它还参与解毒和清除外源/内源性毒素和烷化剂。GSH作为一种细胞信号剂，参与DNA合成和细胞增殖调节。由于细胞死亡的遗传保守分子过程，细胞内GSH水平可通过细胞凋亡（细胞内足够的GSH储存）或坏死或自噬（细胞内耗尽的GSH存储）促进细胞死亡途径。检测到实验细胞群体中细胞内GSH浓度相对于阴性（健康细胞）对照的下降通常表明细胞凋亡诱导事件。由于细胞内GSH耗竭与细胞凋亡过程的发生之间存在着强烈的相关性，ImmunoChemistry（ICT）的细胞内GSH-Assay为评估细胞凋亡抑制剂和激活剂的效力提供了良好的筛选选择。该试剂盒提供了所有必要的试剂和易于遵循的方案，以使用流式细胞术分析方法评估细胞内GSH水平的变化。关键分析试剂是专有的硫醇敏感染料ThioBright™ 绿色，它能快速穿透细胞膜结构，主要聚集在活细胞的胞浆中。在含有游离硫醇的分子如GSH的存在下™ 绿色染料分子与GSH靶分子共价结合，并转化为荧光形式的染料。在与细胞死亡过程相关的氧化应激或GSH耗竭期间，绿色荧光染料形式的胞浆浓度显著降低。细胞内GSH浓度的降低直接转化为死亡或氧化应激细胞群中绿色荧光输出的容易监测的降低。

ImmunoChemistry艾美捷细胞内GSH测定试剂盒化学性质：

目标谷胱甘肽（GSH）

分析方法流式细胞术

样品类型细胞培养

储存-20°C

协议：

准备样品和对照品。

重组ThioBright™ 用500µL二甲基亚砜（DMSO）制成绿色，产生200X浓缩原液。

以1:200的比例向每个样品中添加ThioBright Green。例如，向995µL培养细胞中添加5µL。

培养15-30分钟。

可选：旋转和沉淀细胞，去除上清液，并轻轻重悬于测定缓冲液或其他等渗缓冲液中。

如果需要，用其他污渍标记，如Hoechst、碘化丙啶、7-AAD或抗体。

用流式细胞仪分析。硫亮绿在490 nm激发，在525 nm发射。

ImmunoChemistry艾美捷细胞内GSH测定试剂盒组分：

ThioBright™ Green, 1 vial, #6636

Assay Buffer, 100 mL, #6637

DMSO, 500 µL, #6638

Kit Manual

ImmunoChemistry Technologies简称"ICT",提供各种细胞蛋白酶、细胞凋亡与细胞毒性检测试剂盒等研究工具，同时包含高质量高灵敏度的 ELISA开发试剂。艾美捷科技是ImmunoChemistry的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/brand/Immunochemistry.shtml

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ImmunoChemistry艾美捷牛膜联蛋白V-荧光素凋亡检测试剂盒方案

ImmunoChemistry艾美捷牛膜联蛋白V-荧光素细胞凋亡检测试剂盒提供了一种经验证的方法，可使用重组荧光素结合的牛膜连蛋白V和碘化丙啶（PI）快速、轻松地区分两个死亡细胞群和活细胞群。这些细胞将被膜联蛋白V-荧光素（绿色荧光）和碘化丙啶（红色荧光）双重标记。结果可通过流式细胞仪进行分析。

膜联蛋白V是具有血管抗凝血活性的钙和磷脂结合蛋白家族的成员。体外实验结果表明，它可能通过与凝血酶原竞争磷脂酰丝氨酸（PS）结合位点而在抑制凝血中发挥作用。在健康细胞中，PS通常保存在细胞膜的内小叶（胞质侧）。当细胞发生凋亡时，最早的可检测指标之一是膜不对称性的丧失。PS不再局限于膜的胞质部分，而是转移到外小叶，并暴露在细胞表面。免疫化学技术公司的牛膜联蛋白V-荧光素细胞凋亡检测试剂盒提供了一种经验证的方法，可使用重组荧光素结合的牛膜连蛋白V和碘化丙啶（PI）快速、轻松地区分两个死亡细胞群和活细胞群。具有完整细胞膜和表面暴露PS（凋亡的一个显著特征）的细胞将被膜联蛋白V-荧光素染色为阳性。PI包含在试剂盒中，用于识别已丧失质膜完整性的晚期凋亡细胞。这些细胞将被膜联蛋白V-荧光素和碘化丙啶双重标记（绿色和红色荧光）。假设没有治疗或细胞周期相关事件暂时暴露正常内化的带负电荷的PS实体，具有完整质膜的活的非凋亡细胞将排除PI，并且将保持不被膜联蛋白V-荧光素探针染色。该试剂盒还包括一种特殊配制的钙基结合缓冲液，这是发生膜联蛋白V结合所需的。使用流式细胞仪分析结果。

ImmunoChemistry艾美捷牛膜联蛋白V-荧光素凋亡检测试剂盒化学性质：

靶细胞凋亡

激发/发射膜联蛋白V-荧光素–494 nm/521 nm PI–536 nm/617 nm

分析方法流式细胞术

样品类型细胞培养

储存2-8°C

协议：

准备样品和对照品。

用DiH2O稀释10X结合缓冲液1:10。

在冰冷的培养基或PBS中清洗细胞两次，然后以5 x 105–1 x 106细胞/mL的速度重新悬浮在冰冷的1X结合缓冲液中。

在1mL膜联蛋白重组缓冲液（1X）中重组牛膜联蛋白V-荧光素。

在PBS中稀释重组膜联蛋白V-荧光素1:5。

将稀释的Annexin V-Fluorescein以约1:10添加到每个样品中。

在PBS中稀释PI 1:10。

以约1:20的比例向每个样品中加入稀释的PI。

在冰上孵育15分钟，避光。

向每个样本添加400µL 1X绑定缓冲液。

用流式细胞仪分析。膜联蛋白V-荧光素在494nm激发，在521nm发射。PI在536nm激发，在617nm发射。

ImmunoChemistry艾美捷牛膜联蛋白V-荧光素凋亡检测试剂盒组分：

Bovine Annexin V-Fluorescein, lyophilized, 1 vial, #6641

Annexin Reconstitution Buffer, 1X, 1 mL, 1 vial, #6639

Annexin Binding Buffer, 10X, 10 mL, 3 bottles, #6640

Propidium Iodide, 250 µg/mL, 1 mL, 1 vial, #638

ImmunoChemistry Technologies简称"ICT",提供各种细胞蛋白酶、细胞凋亡与细胞毒性检测试剂盒等研究工具，同时包含高质量高灵敏度的 ELISA开发试剂。艾美捷科技是ImmunoChemistry的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/brand/Immunochemistry.shtml