循环肿瘤细胞——Abnova 解决方案来啦_武汉艾美捷科技有限公司

循环肿瘤细胞——Abnova 解决方案来啦

来宝网 2022/7/6点击812次

循环肿瘤细胞——Abnova 解决方案来啦

艾美捷Abnova 使用整合式系统对循环肿瘤细胞进行具备再现性及效率的富集、计数，并可分离得到高纯度的循环肿瘤细胞。此类液态活检是辨识追踪肿瘤的转变及转移的精准工具，在个人化医疗的新时代，对于肿瘤的诊断、预后、治疗及监测，具有重大的临床影响。

艾美捷 Abnova 循环肿瘤细胞流程图：

样本需求：

人类全血：于室温下至少需有7.5ml体积收集在K2-EDTA（紫盖）中。

运输：运输过程中需于室温环境下，于样本收集后6小时内进行。

艾美捷 Abnova 循环肿瘤细胞细胞富集、计数与分离（CTCatch™）：

检体的准备：经由密度梯度离心之后的全血。

正向富集：藉由表面抗体正向选择，富集循环肿瘤细胞。

细胞计数：以免疫萤光法/萤光原位杂交法 (FISH)，鉴别循环肿瘤细胞的生物标记。

细胞分离：显微操作分离循环肿瘤细胞，以进行全基因体放大（WGA）及下游分析。

分析方法：

免疫荧光法

mutaFISH™

aCGH

次世代定序 (Abnova NGS Solution)

Abnova 循环肿瘤细胞报告交付（7个工作天内）：

提供一份循环肿瘤细胞检体的解释报告。

用于富集循环肿瘤细胞的抗体系列

基于生物标记所辨识的循环肿瘤细胞数量

用于下游分析而分离出的循环肿瘤细胞数量

客户要求的额外蛋白质生物标记及基因特性分析

项目/内容：

检测项目方案 1 方案 2 方案 3 方案 4

CTC富集与计数 V V V V

CTC mutaFISH™ V

CTC 细胞分离 V V

CTC WGA V V

CTC Sanger 定序 V

CTC 次世代定序 V

Abnova通过基因组学手段生产出的几万种重组蛋白和抗体，极大的扩展了生物试剂应用的视野和多样性。致力于推动生命科学研究发展与药物研发等领域。艾美捷科技是Abnova的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/brand/abnova-china-distributor.shtml

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Abnova循环肿瘤DNA丨全血分离，基因组DNA萃取分析

艾美捷Abnova 具备能对ctDNA进行萃取、纯化、文库制备与次世代定序的串流平台。ctDNA液态活检是一种对癌症的鉴定、追踪癌症转型与转移的精准工具，于精准医疗的时代中，此工具对癌症诊断、预后、治疗或是监测均具有重要的临床意义。

艾美捷 Abnova 客制化循环肿瘤DNA工作流程：

样本需求：

人类全血：于室温下至少需有4ml体积全血收集于EDTA管（紫盖）中。

运输：运输过程中需于室温环境下。

DNA制备：在收集的同一天从全血样品的血浆部分中提取基因组DNA，并在4℃下储存。

艾美捷 Abnova 全血分离，基因组DNA萃取，样本库制备，次世代定序和基因突变分析：

DNA萃取：从血浆层中提取基因组DNA，然后进行DNA纯化和定量。

文库制备：将基因组DNA的片段和尺寸化后转换为双链DNA，再连接寡核苷酸衔接子，并定量样本库的产物。

次世代定序：对感兴趣的突变基因内热点与外显子的定序。

基因突变分析：利用已发表的文献和公共数据库对癌症基因突变与种系变异进一步注释与比较。

分析方法：

次世代定序 (Abnova NGS Solution)

Abnova 循环肿瘤细胞报告交付（14个工作天内）：

提供一份癌症基因突变的解释报告。

用于辨识癌症基因突变的基因

利用次世代定序所得到的癌症基因突变的基因序列以及基因不同变异中的基因序列

对癌症突变的注释以及其与已知数据的比较

按客户的要求所进行另外的突变基因定序

项目/内容：

1、癌症基因

与肿瘤有关的可操作基因项目 V2——癌症基因与变异

ALK KIT

BRA FKRAS

EGFR NRAS

ERBB2 PDGFRA

ERBB3 PIK3CA

ESR1 RAF1

2、与肿瘤有关的可操作基因项目 V3——癌症基因与变异

AKT1 GNA11

ALK GNAQ

BRAF HRAS

CTNNB1 KIT

DDR2 KRAS

EGFR MAP2K1

ERBB2 MAP2K2

ERBB3 MET

ERBB4 NOTCH1

ESR1 NRAS

FBXW7 PDGFRA

FGFR1 PIK3CA

FGFR2 RAF1

FGFR3 SMAD4

FLT3 STK11

来源：https://www.amyjet.com/brand/abnova-china-distributor.shtml

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Abnova异种原位移殖肿瘤模型——艾美捷解决方案

各种小鼠模型已被开发并广泛应用于癌症研究。为了在临床前和临床研究中评估癌症治疗的效果，通常使用人类肿瘤异种移植模型，将将人细胞株移植到免疫不全老鼠的人肿瘤移植模型。特别是将人体肿瘤细胞移植到发生癌症的小白鼠脏器中（orthotopicaly implantation）为了给肿瘤细胞带来影响肿瘤的成长、分化、药剂反应的器官型相互作用的微小环境，需要证明新的癌症治疗药对特定肿瘤的效果。正位肿瘤模型为组织部位特异性病理学提供了更多的临床相关性，因此为化疗药物提供了前瞻性评估。

艾美捷Abnova 为研究人员建立了多个正位人类肿瘤模型，以评估用于癌症治疗的新化合物的体内疗效，8种最常见的人类癌症的更多原位模型正在开发中。通过将荧光素酶表达细胞系直接注射到活体小鼠的相关器官中，可以轻松检测原位植入的肿瘤细胞，并且可以通过IVIS®生物宿主成像系统在体内监测肿瘤对抗癌化合物的反应。

艾美捷 Abnova 异种原位移殖肿瘤模型特色：

与皮下异种移植相比，增加了临床相关性

重组相关的肿瘤微环境

评估肿瘤与基质的相互作用

抗肿瘤治疗的特定部位研究

用来模拟转移性疾病的临床过程

艾美捷 Abnova 异种原位移殖肿瘤模型服务：

用优质的外科技术进行肿瘤细胞的正位植入

8种主要肿瘤类型（肺、乳腺、结肠、前列腺、肝脏、胰腺、卵巢和脾脏）

体内正位异种移植模型的肿瘤生长评估

使用定制注射方式进行药物治疗：皮下注射、腹腔注射或静脉注射。

为标准的正位疗效研究提供稳定的细胞系

Abnova荧光素标记的肿瘤细胞系可用于动物模型预试验/实验

Abnova 为人类细胞系开发的原位小鼠模型：

人类的癌症肿瘤细胞系小鼠品系小鼠器官

肝癌 HepG2 NOD-SCID/Nude 肝脏

肺癌 A549 NOD-SCID/Nude 肺脏

肺癌 CL1-5 NOD-SCID/Nude 肺脏

前列腺癌 PC3 NOD-SCID/Nude 前列腺

艾美捷 Abnova 实例介绍：

左图：麻醉的Nude小鼠原位肝脏肿瘤的荧光素酶表达

（使用的稳定细胞系：HepG2-Luc）。

右图：麻醉的NOD-SCID小鼠原位肺部肿瘤的荧光素酶表达

（使用的稳定细胞系：A549-Luc）

来源：https://www.amyjet.com/brand/abnova-china-distributor.shtml

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Abnova 体外转录 mRNA工作流程和加帽方法介绍

体外转录（IVT）mRNA被广泛用于基础研究和应用，为快速和可控地诱导目标蛋白提供了一个有前途的基因表达系统。基于其安全性和高效性，IVT mRNA是一种强大的方法，在再生医学、疫苗接种、细胞工程和蛋白质替代疗法中具有潜在的应用。具有内部表观遗传修饰的IVT RNA合成需要DNA模板、酶、核苷酸和缓冲剂成分。不熟悉IVT mRNA技术或寻找快速而有效的服务？

艾美捷 Abnova有较为丰富的IVT mRNA服务，包括DNA模板生产、mRNA生产和mRNA质量控制。

艾美捷 Abnova IVT mRNA工作流程：

从几百个碱基到几千个碱基的定制mRNA

优化的mRNA合成和纯化程序

无细胞生产，无有毒化学品

合格的RNA以满足客户需求

可用于大多数的下游应用

艾美捷 Abnova IVT合成mRNA的服务细节：

1、DNA模板的生产

扩增感兴趣的基因*并将其克隆到表达载体上

质粒DNA的制备和纯化

线性化的DNA制备

2、mRNA生产

线性化的DNA制备

线性化DNA的体外转录成RNA

RNA加帽

加帽的RNA纯化和定量**

3、mRNA质量控制

完整性和纯净度：RNA的琼脂糖凝胶电泳

蛋白质的表达: RNA转染到细胞，细胞裂解液进行Western blot分析。

加冒方法：

共同转录修饰

序列 RNA 序列加帽顺序帽类似物

Cap 0 GAUG 3´-O-Me-m7G(5')ppp(5')GAUG Anti-Reverse

GTP competition

Cap 1 AUG m7G(5')ppp(5')(2'OMeA)pUG Without Anti-Reverse

Without GTP competition

Cap 1 AGG m7(3'OMeG)(5')ppp(5')(2'OMeG)pGG Anti-Reverse

Without GTP competition

Cap 1 GGG m7(3'OMeG)(5')ppp(5')(2'OMeA)pGG Anti-Reverse

GTP competition

核苷的修饰：

Pseudouridine (Ψ)

5-methylcytidine (m5C)

N1-methylpseudouridine (N1mΨ)

来源：https://www.amyjet.com/brand/abnova-china-distributor.shtml

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Abnova 免疫组化服务解决方案丨艾美捷

艾美捷 Abnova有一个包含超过30500种免疫组织化学（IHC）抗体的扩展库。其能力得到了大量正常和疾病组织样本的支持，以进行抗体的鉴定。此外，其内部IHC团队已经创建了组织微阵列面板，用于高通量的抗体验证、生物标记物发现和伴随诊断开发。

艾美捷 Abnova及用户资源介绍：

艾美捷 Abnova：

正常和疾病的临床样本

预制的组织和微阵列玻片

不断扩大的单克隆抗体目录

抗体生产基础设施

丰富的经验和成熟的专业知识

用户资源：

提供自己的临床样本

提供预制的组织切片

抗体（有或没有特征）

特定的组织和抗体协议

以前的实验结果

艾美捷 Abnova IHC服务的一般工作流程：

用户填写IHC定制服务表，并发送给Abnova

Abnova准备好福尔马林固定和石蜡包埋组织的切片

Abnova在未经预处理或预处理的玻片上进行IHC染色，或两者都进行。

Abnova根据客户的指示进行抗体稀释，或进行40、20、10、5、2.5、1.25、0.675 ug/ml的连续稀释。

Abnova提供以下玻片预处理。用户可以选择一个或多个方案进行预处理 :

在1X柠檬酸盐缓冲液（pH6.0）中进行预处理，750W的微波炉加热20分钟，然后冷却样品。

在1X Tris/EDTA缓冲液（pH9.0）中进行预处理，750W微波炉加热20分钟，然后冷却样品。

在室温下用盐酸（2N）（pH 0.6~0.9）预处理10~20分钟。

在0.1%胰蛋白酶中预处理，并在37℃下摇晃25分钟。

Abnova免疫组化服务实例介绍：

来源：https://www.amyjet.com/brand/abnova-china-distributor.shtml

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Abnova 膜蛋白脂蛋白体技术及类别展示

体外小麦胚系统 + 脂蛋白体技术

艾美捷 Abnova体外蛋白质表达系统以小麦胚真核翻译机制为基础开发而成。小麦胚将所有翻译所需的成分存储于干燥浓缩的状态，在胚芽开始时即进行蛋白质的合成。普通的小麦胚萃取物中包含有RNA N-糖苷酶麦芽凝集素和其它翻译抑制物，例如硫堇、核糖核酸酶、脱氧核糖核酸酶类和蛋白酶等。这类抑制物产生于胚乳中。通过充分清洗小麦胚去除其中的胚乳污染物，形成高稳定性和高活性的萃取物。

将具有 5' 端甲基化与 3' 端 poly(A) 尾的 mRNA 与这种萃取物反应，同时加入独门脂质体，体外的翻译反应能产生出足量的膜蛋白，膜蛋白被脂质体捕获，从而正确折迭出执行生物功能所必需的蛋白质形态。常用的蛋白质表达系统，例如大肠杆菌、昆虫细胞和哺乳动物细胞等都属于体内系统并且受到细胞膜的约束作用，其产量和稳定性都相对较低。与这些蛋白质表达系统相比，艾美捷 Abnova这一系统有着显着的优越性。此外，体外小麦胚系统能够经得起自动化高通量小分子生物筛选以及特征描述的考验。

艾美捷 Abnova膜蛋白脂蛋白体特色：

产量更高

稳定性更高

高表达成功率

天然蛋白构型

易用于自动化

类别：

聚类分化 (CD) 分子

G 蛋白偶联受体 (GPCR)

离子通道

转运蛋白

艾美捷 Abnova膜蛋白脂蛋白体演示：

来源：https://www.amyjet.com/brand/abnova-china-distributor.shtml

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肿瘤免疫治疗研究丨ProSci LAG3抗体解决方案

LAG-3是一种Ⅰ型跨膜蛋白，具有四个Ig样结构域（D1-D4）。LAG-3的D1由9条β-链组成，它们被称为A、B、C、C'、C”、D、E、F和G链。大约30个氨基酸的附加序列位于C和C'链之间，形成一个环，称为“额外环”。尽管序列相似性较低，但在人和小鼠LAG-3中都可以观察到这个环，据报道此环参与了LAG-3和主要组织相容性复合体II类（MHCII）之间的关联。此外，LAG-3高度糖基化，在D2-D4中存在多个N-糖基化位点。Galectin-3和肝窦内皮细胞凝集素（LSECtin）被认为与LAG-3聚糖存在相互作用。

LAG-3的D4和跨膜区之间的存在一个较长的氨基酸序列称为“连接肽”。基于小鼠模型，发现金属蛋白酶ADAM10和ADAM17可以在CP处裂解LAG-3，并以可溶性形式释放LAG-3胞外区域。因此，ADAM10和ADAM17可能通过调节细胞表面LAG-3的数量来调节LAG-3的抑制作用。

LAG-3免疫抑制作用

一直以来，肿瘤中LAG-3表达水平和LAG-3+细胞浸润与肿瘤进展、预后不良和各种类型的人类肿瘤相关。这些结果强烈表明，LAG-3参与了类似PD-1的肿瘤免疫逃逸机制。

然而，LAG-3的确切信号通路仍然未知。已经证明，LAG-3的抑制作用并不是由与CD4的竞争性结合pMHC II引起的。有研究报告称，LAG-3可能是通过存在于膜近端区域的FXXL基序与C-末端的EX-repeat协同诱导抑制机制。在敲除EX重复序列或在FXXL序列中诱导突变时，LAG-3的抑制作用消失。LAG-3是如何与细胞内信号蛋白的作用机制，仍然有许多未知。

艾美捷ProSci LAG3抗体旨在改善体外研究。与使用酵母或细菌中制造的蛋白质开发的抗体不同，这些LAG-3抗体是使用哺乳动物细胞系中表达的抗原开发的，对蛋白质进行天然的翻译后修饰。可以应用于已测试验证过的应用类型。

艾美捷ProSci LAG3抗体应用说明：

可用于 ELISA，起始浓度为 0.25 μg/mL。对于蛋白质印迹，起始浓度为 0.25 μg/mL。对于免疫细胞化学，从 1 μg/mL 开始。对于免疫荧光，从 10 μg/mL 开始。对于免疫组织化学，从 5 μg/mL 开始。对于流式细胞术，从 1 μg/ml 开始。

艾美捷ProSci LAG3抗体验证：

人体样本中的蛋白质印迹；人体样本中的免疫组织化学；人体样本中的免疫细胞化学；人体样本中的免疫荧光和人体样本中的流式细胞术。所有其他应用和物种尚未测试。

LAG3抗体引用文献：

1:Huard B, Tournier M, Hercend T, et al. Lymphocyte-activation gene 3/major histocompatibility complex class II interaction modulates the antigenic response of CD4+ T lymphocytes. Eur J Immunol 1994; 24:3216–21.

2:Triebel F. LAG-3: a regulator of T-cell and DC responses and its use in therapeutic vaccination. Trends Immunol 2003; 24:619–22.

3:Workman CJ, Wang Y, El Kasmi KC, et al. LAG-3 regulates plasmacytoid dendritic cell homeostasis. J Immunol. 2009; 182:1885–91.

4:Workman CJ, Vignali DA. The CD4-related molecule, LAG-3 (CD223), regulates the expansion of activated T cells. Eur J Immunol 2003; 33:970–9.

来源：https://www.amyjet.com/products/PSI-RF16082.shtml

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中英文说明书丨ProSci LAG-3 重组蛋白

靶向抑制性协同受体PD-1和CTLA-4的检查点免疫疗法彻底改变了癌症治疗，而LAG-3作为新一代发现的抑制性检查点，有望成为肿瘤治疗中极具前景的靶点。

艾美捷ProSci LAG-3 重组蛋白的化学性质：

英文名称：LAG-3 Recombinant Protein

cat#：PSI-90-241

规格：50ug

来源宿主：CHO 细胞

溶解建议：开盖前，先离心。建议按说明书中要求的方式进行溶解和使用。

保存建议：Stable for at least 6 months after receipt when stored at -20˚C.

物种：人类

来源物种：人体细胞

重组蛋白序列：Leu23-Gly434

融合标签：C-6 his标签

艾美捷ProSci LAG-3 重组蛋白可以应用于已测试验证过的应用类型。

Lymphocyte activation gene 3 (LAG-3; CD223) plays an important role in negatively regulating T cell proliferation, function and homeostasis. It is required for maximal natural and induced regulatory T cell (Treg) function. LAG-3 is closely related to the T cell co-receptor CD4 and binds to MHC class II molecules but with a significantly higher affinity than CD4.

Specications：

Species Human, Monkey, Mouse

Source Species CHO cells

Fusion Tag Fc Tag

Biological Activity

Inhibits binding of MAb to LAG-3 (human) to LAG-3. Induces maturation of human dendritic

cells.

Properties：

Purity

>99% (SDS-PAGE).<br><br> Endotoxin level is less than 0.1EU/ μg puried protein (LAL test;

Lonza).

Physical State Liquid

Buer In PBS.

Concentration 0.5 mg/ml

Storage Conditions Stable for at least 6 months after receipt when stored at -20°C.

来源：https://www.amyjet.com/products/PSI-90-241.shtml

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选F-actin染色试剂盒，Abbkine有哪些实验建议？

选择TraKine F-actin染色试剂盒，Abbkine来了！

老规矩，先说TraKine F-actin染色试剂盒有何优势？

一、优化的实验方案：

特别适用于甲醛固定与透化处理的组织切片、细胞培养物或无细胞实验中的F-actins标记，鉴定以及定量需求。

二、专利的鬼笔环肽染料 (绿色荧光) (Ex/Em = 490/515 nm)

特异性地结合F-actins，且兼具比其它荧光素-鬼笔环肽偶联物更强的光稳定性。

再来，Abbkine F-actin染色试剂盒有哪些实验建议？

该试剂盒使用了绿色荧光染料 (Ex/Em=490/515nm) 偶联的鬼笔环肽，可以特异性地结合F-actins，与其它的荧光素-鬼笔环肽衍生物相比，具有更优质的光稳定性。

再看看其组成成分：

• 鬼笔环肽 (绿色荧光) (200×)

• 实验缓冲液 (5×)

三、使用时注意事项：

由于不同细胞类型的精确染色条件可能不同，建议根据实验确定自己合适的浓度。

来源：https://www.abbkine.cn/product/ktc4008/

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快速定量，Abbkine 蛋白质定量试剂盒BCA法来了！

在蛋白质的提取、纯化和分析过程中，蛋白质的定量随处可见。比如在裂解细胞之后，我们对各个样品中的蛋白进行定量，方便下游应用中的平行比较；而在蛋白电泳之前，我们也需要准确定量，以免精心准备的电泳（特别是2D电泳）抱憾而归。鉴于不同的蛋白样品中可能存在各种各样的（干扰）组分，测定蛋白浓度的方法也有许多种。

BCA法是比较常用的一种蛋白定量方法。目前Google学术搜索已有14万条结果。BCA法的基本原理是，蛋白质在碱性环境下与Cu2+络合，并将Cu2+还原为Cu1+。通过两个BCA分子与还原态Cu1+的螯合，可形成紫色的显色反应产物。该产物在562 nm处有较高的吸光值，并与蛋白质浓度呈正比。

此外，BCA法有着高度的均一性。相对于Bradford染料结合方法而言，不同蛋白质之间的变异性更小。

接下来我们要说的是Abbkine的BCA法蛋白质定量试剂盒。

Abbkine BCA法 蛋白质定量试剂盒实验建议：

BCA法适用于检测20-2,000 µg/mL范围内的蛋白浓度，最小检测蛋白量达到0.4 µg，待测样品体积为 1-20 µL。

Abbkine BCA法 蛋白质定量试剂盒特点：

• 节省时间—比传统的Lowry方法更容易，速度快4倍。

• 灵敏度高—检测限低至20 ug/mL，最低检测蛋白量达到0.4 ug。

• 线性卓越—线性工作范围20-2000 ug/mL。

• 良好的稳定性—与染料结合的方法相比，检测不同蛋白质分子的变异系数更小。

• 兼容性好—不受大多数离子型和非离子型洗涤剂的影响，样品中最多可兼容5% SDS, 5% Triton X-100, 5% Tween-20，60，80。

Abbkine BCA法 蛋白质定量试剂盒标准曲线：

来源：https://www.abbkine.cn/product/ktd3001/

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