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小鼠抗人类IgG4 Fc-AF488研究方案

小鼠抗人类IgG4 Fc-AF488基本参数：

克隆：HP6025

同种：小鼠（BALB/c）IgG1k

免疫原：人IgG4骨髓瘤蛋白

特异性：人IgG4-Fc

工作稀释液：

ELISA AP结合物：1:1000–1:2000

HRP共轭：1:4000–1:8000

BIOT共轭：1:5000–1:10000

FLISA FITC、AF488和AF555结合物的比例为1:200–1:400 PE和AF647结合物

小鼠抗人类IgG4 Fc-AF488应用：

ELISA、FLISA、FC、IHC-FS、IHC-PS、WB、微阵列

艾美捷 小鼠抗人类IgG4 Fc-AF488搬运和储存：

1.纯化（UNLB）抗体以0.5 mg纯化免疫球蛋白的形式提供于1.0 mL硼酸盐缓冲盐水中，pH值为8.2。不添加防腐剂或含胺缓冲盐。在2-8°C下储存。

2.荧光素（FITC）结合物以0.5 mg/1.0 mL PBS/NaN3的形式提供。在2-8°C下储存。碱性磷酸酶（AP）结合物以1.0 mL储备溶液的形式提供，溶液为50 mM Tris/1 mM MgCl2/50%甘油，pH值8.0，含有NaN3作为防腐剂。在2-8°C下储存或在-20°C下长期储存。

3.辣根过氧化物酶（HRP）结合物以1.0毫升储备溶液的形式提供，溶液为50%甘油/50%PBS，pH值为7.4。不添加防腐剂。在2-8°C下储存或在-20°C下长期储存。

4.在1.0毫升PBS/NaN3中以0.5毫克的形式提供生物素（BIOT）结合物。在2-8°C下储存。

5.R-藻红蛋白（PE）结合物以0.1 mg/1.0 mL PBS/NaN3和稳定剂的形式提供。在2-8°C的温度下储存。不要冻结

6.Alexa Fluor®488（AF488）、Alexa Fluor®555（AF555）和Alexa Fluor®647（AF647）共轭物以0.1 mg/0.2 mL的形式提供PBS/NaN3。在2-8°C下储存。

7.保护荧光色素结合物不受光照。如果按照指示储存，试剂在标签上显示的时间内是稳定的。

艾美捷 小鼠抗人类IgG4 Fc-AF488相关研究方案：

Cat#   Format   Size

9200-01   Purified (UNLB) 0.5 mg

9200-02   Fluorescein (FITC) 0.5 mg

9200-04  Alkaline Phosphatase (AP) 1.0 mL

9200-05  Horseradish Peroxidase (HRP) 1.0 mL

9200-08  Biotin (BIOT) 0.5 mg

9200-09  R-phycoerythrin (PE) 0.1 mg

9200-30  Alexa Fluor® 488 (AF488) 0.1 mg

9200-31  Alexa Fluor® 647 (AF647) 0.1 mg

9200-32 Alexa Fluor® 555 (AF555) 0.1 mg

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小鼠抗人IgE Fc端二抗研究方案

小鼠抗人IgE Fc端二抗基本参数：

克隆：HP6029

同型：小鼠IgG2ak

免疫原：PS人IgE骨髓瘤蛋白

ELISA纯化（UNLB）抗体≤ 1.m克/毫升

FLISA1:100-1:400

HRP共轭1:1000–1:2000

BIOT共轭1:5000–1:10000

FLISA FITC共轭1:100–1:400

小鼠抗人IgE Fc端二抗应用：

ELISA、FLISA、ELISPOT、WB、Purification

艾美捷 小鼠抗人IgE Fc端二抗搬运和储存：

1.纯化（UNLB）抗体以0.5 mg纯化免疫球蛋白的形式提供于1.0 mL硼酸盐缓冲盐水中，pH值为8.2。不添加防腐剂或含胺缓冲盐。在2-8°C下储存。

2.荧光素（FITC）结合物以0.5 mg/1.0 mL PBS/NaN3的形式提供。在2-8°C下储存。

3.碱性磷酸酶（AP）结合物以1.0 mL的形式提供于50 mM Tris/1 mM MgCl2/50%甘油的储备溶液中，pH值为8.0，含有NaN3作为防腐剂。在2-8°C下储存或在-20°C下长期储存。

4.辣根过氧化物酶（HRP）结合物在50%甘油/50%PBS的储备溶液中以1.0 mL的形式提供，pH值为7.4。不添加防腐剂。在2-8°C下储存或在-20°C下长期储存。

5.在1.0毫升PBS/NaN3中以0.5毫克的形式提供生物素（BIOT）结合物。在2-8°C下储存。保护荧光色素结合物不受光照。如果按照指示储存，试剂在标签上显示的时间内是稳定的。

艾美捷 小鼠小鼠抗人IgE Fc端二抗相关研究方案：

Cat#   Format   Size

9250-01 Purified (UNLB) 0.5 mg

9250-02 Fluorescein (FITC) 0.5 mg

9250-04 Alkaline Phosphatase (AP) 1.0 mL

9250-05 Horseradish Peroxidase (HRP) 1.0 mL

9250-08 Biotin (BIOT) 0.5 mg

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109-001-043山羊抗人IgM抗血清功能与参数说明

抗血清是指机体经抗原免疫后含特定抗体的血清。山羊抗人IgM抗血清经过脂类抽提以提高透明度，经去盐和透析处理以去除包含叠氮化钠的磷酸缓冲液，并最后冻干以获得冻干粉末。其中针对全血清蛋白的抗血清是通过完整血清免疫宿主动物获得，而针对所有IgG分子的抗血清则可与PAP联用。

基于免疫电泳，抗体与人IgM重链的Fc5µ部分反应，但不与人IgG、IgA或人免疫球蛋白的轻链反应。未检测到针对非免疫球蛋白血清蛋白的抗体。抗体可能与其他物种的IgM发生交叉反应。

来自免疫宿主的多克隆抗血清是脂质提取以提高透明度，盐分离，针对含有叠氮化钠的磷酸盐缓冲盐水透析并冷冻干燥。全血清抗血清是用全血清免疫宿主动物获得的。建议使用针对整个IgG分子的抗血清[即抗IgG（H+L）]将PAP连接到初级抗体。

艾美捷 山羊抗人IgM抗血清基本参数：

英文：Goat Anti-Human IgM

cat#：109-001-043

规格：2ml

免疫原：人IgM

来源宿主：山羊

特异性：IgM，Fc5μ片段特异性

类别：抗血清

艾美捷 山羊抗人IgM抗血清其它参数：

纯度：从整个抗血清中分离抗体和硫酸铵。

缓冲液：0.01M磷酸钠，0.25M氯化钠，pH 7.6

物理状态：冻干固体

储存和再水化：将冻干固体储存在2-8°C下。用指示体积的dH2O再水化，如果不清楚，则用离心机进行离心。在使用当天准备工作稀释液。产品在2-8°C温度下作为未稀释液体稳定约6周。

补液后的长期储存：将未稀释的产品等分并在-20°C或更低温度下冷冻。避免反复冻融。

有效期：自补液之日起一年。如果试验结果可用于预期用途，则有效期可延长。

艾美捷 山羊抗人IgM抗血清保存建议：

冻干粉保存在2-8°C，准备用时，根据指示的体积加入三蒸水，产品在2-8°C条件下，未稀释的液体保质期为6周，每天准备新鲜的工作液。如果溶解后想延长保存期，将未稀释的液体分装并保存在-20°C或以下，避免反复冻融。

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一文了解EpiQuik CUT＆RUN m6A RNA富集（MeRIP）试剂盒

EpiQuik CUT＆RUN m6A RNA富集（MeRIP）试剂盒用途：

EpiQuik™ 切割和运行m6A RNA富集（MeRIP）试剂盒旨在富集RNA含有来自低输入RNA的m6A片段，并通过PCR或图谱鉴定区域特异性m6A通过使用Illumina平台或其他方法进行下一代测序，获得超转录组宽m6A。创新的工作原理、优化的协议和套件组件允许捕获m6A片段具有最小的非特异性背景水平。富集的RNA是特异性的适用于快速构建非条形码（单复合）和条形码（复合）库，允许m6A区域以较小的偏差和高分辨率进行映射。

EpiQuik CUT＆RUN m6A RNA富集（MeRIP）试剂盒输入量：

一般来说，每个反应的总RNA量在1µg到20µg之间。为了获得最佳制备，输入量应为10µg RNA，尽管数据可以从使用该试剂盒，总RNA含量低至500纳克。

EpiQuik CUT＆RUN m6A RNA富集（MeRIP）试剂盒起始材料：

起始材料可以包括各种哺乳动物细胞样本，如培养物烧瓶或平板上的细胞，从血液、体液和血液中分离的原代细胞或稀有细胞群新鲜/冷冻组织、从整个细胞群和胚胎细胞中分离的特定细胞等。

EpiQuik CUT＆RUN m6A RNA富集（MeRIP）试剂盒抗体：

本试剂盒中使用的抗m6A兔多克隆抗体对m6A具有高度特异性RNA片段，MeRIP级，与腺嘌呤非甲基化RNA片段无交叉反应。

EpiQuik CUT＆RUN m6A RNA富集（MeRIP）试剂盒注意事项：

为避免交叉污染，小心地用移液管将样品或溶液移到试纸上威尔斯。使用气溶胶屏障移液管头，并在液体转移之间始终更换移液管头。穿在整个过程中佩戴手套。如果手套与样品接触，立即更换手套。

EpiQuik CUT＆RUN m6A RNA富集（MeRIP）试剂盒运输和储存;

该套件分两部分装运：第一部分在室温下装运，第二部分在室温下装运4°C下的冷冻冰袋。拿到后，根据上表中的温度将部件存放在避光处。正确储存后，试剂盒可自装运之日起稳定长达6个月。

EpiQuik CUT＆RUN m6A RNA富集（MeRIP）试剂盒注意：使用前检查WB（洗涤缓冲液）是否含有盐沉淀物。如果是这样的话，在房间里短暂暖和一下加热或37°C，摇动缓冲液，直到盐重新溶解。

EpiQuik CUT＆RUN m6A RNA富集（MeRIP）试剂盒程序：

EpiQuik™ 切割和运行m6A RNA富集（MeRIP）试剂盒包含所需的所有必要试剂用于从总RNA开始进行成功的m6A RNA富集。在反应中，RNA在含有m6A的靶区的两端中的序列被切割/移除，并且靶区使用珠子结合的m6A捕获抗体将含有m6A的片段拉下。丰富的然后释放、纯化和洗脱RNA。试剂盒中包括非免疫IgG对照品和m6A阳性对照。这些可以用来证明试剂盒的有效性和性能富集RNA定量或生物分析仪步骤。

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FabGennix 艾美捷丨人绒毛膜促性腺激素β抗体

FabGennix 艾美捷人绒毛膜促性腺激素β抗体属于糖蛋白激素亚单位β家族。

FabGennix 艾美捷人绒毛膜促性腺激素β抗体-生物素结合物，是一种生物素结合绒毛膜促性腺激素亚单位β抗体，基本参数如下：

已验证的应用程序：ELISA，IP，WB

宿主：兔子

物种交叉反应性：人类

免疫原：人绒毛膜促性腺激素β蛋白131-149氨基酸区的合成肽。

特异性：该抗体可检测CGB1、CGB2、CGB5、CGB7、CGB8。

体积：200微升

浓度：抗体稳定缓冲液中0.55-0.63微克/微升

免疫球蛋白：IgG

类型：生物素结合

克隆性：多克隆

决定因素：C-表位

存储：-20⁰C用于长期储存

FabGennix 艾美捷相关研究工具：

CGβ抗体

CGB 3抗体

CGB 5抗体

CGB 7抗体

CGB抗体

CGB8抗体

绒毛膜促性腺激素亚单位β抗体

绒毛膜促性腺激素链β抗体

绒毛膜促性腺激素β多肽抗体

绒毛膜促性腺激素β亚单位抗体

hCGB抗体

人绒毛膜促性腺激素抗体

艾美捷科技是FabGennix的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/brand/FabGennix.shtml

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Cell Biolabs丨艾美捷BPDE DNA加合物ELISA试剂盒

多环芳烃（PAHs）是一种有效的、普遍存在的大气污染物与石油、煤炭、香烟烟雾和汽车尾气有关。一些多环芳烃化合物也存在于熟食（如烤肉、熏鱼）中，已被鉴定为致突变和致癌的。一些多环芳烃的毒性已被证明可诱发动物恶性肿瘤模型和通常被认为对人类癌症有很深的影响。

一种多环芳烃化合物苯并（a）芘是第一种被发现的化学致癌物发现。苯并（a）芘是一种五环多环芳烃，已知为致癌原；其作用机理致癌作用取决于最终突变物的三步酶代谢（下图1）苯并（a）芘二醇环氧化物（BPDE）。非常活跃，BPDE与蛋白质、脂质和蛋白质共价结合DNA（鸟嘌呤残基）产生BPDE加合物。如果不进行修复，DNA加合物可能导致导致细胞转化并最终导致肿瘤发展的永久性突变。

Cell Biolabs 艾美捷OxiSelect™ BPDE DNA加合物ELISA试剂盒是一种用于快速检测的酶免疫分析方法检测BPDE-DNA加合物。DNA样本中BPDE加合物的数量由已知BPDE-DNA标准曲线的相对比较。每个试剂盒提供足够的试剂执行多达96项分析，包括标准曲线和未知蛋白质样本。

Cell Biolabs 艾美捷该试剂盒化验原理：

BPDE-DNA标准或未知DNA样本吸附在96孔DNA高结合膜上盘子样品或标准品中存在的BPDE-DNA加合物用抗BPDE-I探针探测抗体，然后是HRP结合的二级抗体。蛋白质中BPDE-DNA加合物的含量通过与标准曲线比较，确定未知样品，标准曲线由预先确定的BPDE-DNA标准。

Cell Biolabs 相关研究方案：

1.STA-301：选择™ BPDE蛋白加合物ELISA试剂盒

2.STA-320：选择™ 氧化DNA损伤ELISA试剂盒（8-OHdG定量）

3.STA-321：选择™ DNA双链断裂分析

4.STA-322：选择™ 紫外线诱导DNA损伤ELISA试剂盒（CPD定量）

5.STA-323：选择™ 紫外线诱导DNA损伤ELISA试剂盒（6-4PP定量）

6.STA-324：选择™ 氧化DNA损伤定量试剂盒（AP位点）

7.STA-325：选择™ 氧化性RNA损伤ELISA试剂盒（8-OHG定量）

8.STA-350：选择™ 彗星分析试剂盒（3孔）

9.STA-355：选择™ 96孔彗星检测试剂盒

来源：https://www.amyjet.com/brand/Cell-Biolabs.shtml

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免疫（共）沉淀磁珠/琼脂糖实验建议及FAQ

免疫（共）沉淀磁珠/琼脂糖实验建议：

基于传统的IP/Co-IP实验操作繁琐耗时、试剂用品种类繁多、实验结果稳定性可靠性差的痛点，Abbkine 通用型免疫（共）沉淀磁珠/琼脂糖包含经优化的天然和变性裂解液、IP negative control、Protein A/G Magnetic Beads、特别的Ipkine™ 二抗，可满足大多数用户IP/Co-IP的需求。

免疫（共）沉淀磁珠/琼脂糖特点：

• 高效：高效的抗体结合能力和较低的蛋白非特异吸附率，节省抗体用量；

• 便捷、通用：综合 IP/Co-IP和WB实验所需的所有必要缓冲液，可同时满足样本IP/Co-IP或WB需求；

• 可靠、稳定：包含即用型IP negative control，可排除IgG本身和目的蛋白或其它特定生物分子的非特异性结合，确保IP抗体的特异性；包含特别的IPkine™ 二抗，完美消除重链干扰。

免疫（共）沉淀磁珠/琼脂糖FAQ：

Q1：该试剂盒内有两瓶裂解液，分别为变性蛋白裂解液和非变性蛋白裂解液，如何把它们合理运用到IP实验中？

A1：在一次IP实验验证中，Input样本组直接用于SDS-PAGE和WB实验，可用变性裂解液；运用到IP/CoIP实验操作中的样品，建议用非变性裂解液处理。

Q2：IP/Co-IP实验中IgG阴性对照的意义是什么？

A2：排除非特异性结合的可能性，例如检测一个兔子细胞的某种蛋白质，若没有设置IgG的对照，而操作中有非特异性蛋白质，又和设计的抗体有作用，就会出现阳性的结果。如果做了lgG阴性对照，对照没有出现阳性就说明没有非特异性的蛋白，对照出现阳性，说明抗体有非特异结合到杂蛋白的可能，需要重新开始实验。

Q3：该试剂盒20T规格中的Protein A/G Agarose组分实际体积为多少？

A3：Protein A/G琼脂糖微球的实际体积为450 μL，总混悬液有900 μL。

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这些常见的IP/Co-IP问题你应该了解一下

先一起和Abbkine了解一下IP/Co-IP的结果解读：

下图为验证蛋白X与蛋白Y是是否存在相互作用的结果图。由图可以发现，该实验被分为两组：input组及IP组。

第一块胶图是IB验证蛋白X的存在，第二块是IB验证蛋白Y的存在。由对照组的条带可以得到结论：蛋白X与蛋白Y都是存在的。IP组的第一个条带表示利用IgG进行沉淀实验，结果蛋白X与蛋白Y没有被沉淀下来，说明蛋白X、蛋白Y不能与IgG结合（阴性对照，用于排除蛋白与抗体非特异性结合的可能性）；IP组的第二条带表示利用蛋白X进行沉淀实验，结果蛋白X被沉淀下来，蛋白Y也被沉淀下来，由此得到结论：蛋白X-蛋白Y之间存在相互作用。在CO-IP-WB鉴定结果中，IgG组无目的蛋白条带、IP组有目的蛋白条带，说明IP过程成功；银染胶图中，IP组相对于IgG组有更多蛋白条带、且存在差异，说明CO-IP过程捕获到互作蛋白。

然后一起看看，关于IP/Co-IP常见问题和解决办法：

Q：IP/Co-ip实验中IgG阴性对照的意义是什么？

A：排除污染的可能性，例如检测一个兔子细胞的某种蛋白质，若没有设置IgG的对照，而操作中有非特异性蛋白质，又和设计的抗体有作用，就会出现阳性的结果。如果做了lgG阴性对照，对照没有出现阳性就说明没有非特异性的蛋白，对照出现阳性，说明抗体有非特异结合到杂蛋白的可能，需要重新开始实验。

Q：如何避免轻重链的干扰？

A：1、IP一抗与WB一抗来源一致或者两种抗体来源不一致时，二抗有交叉反应，使用IPkine二抗可以避免轻重链的干扰。2、靶蛋白丰度较低，仪器延长曝光时间，导致IgG阴性对照出现杂带：增加Input和IP泳道上样量，减少曝光时间，防止轻重链（杂带）的干扰；3、阴性对照IgG和IP一抗加入偏多：对照IgG抗体量较多，易导致杂带形成，阴性对照IgG使用量建议调整到1ug以下。

Q：通过WB验证发现，没有想要的目的条带

A：没有目的条带可以是诸多原因导致的。1、有可能是样品被蛋白酶降解，对应的策略是需要添加蛋白酶抑制剂，且所有操作保持4℃以下冰上操作并防止冻融。2、有可能是抗体浓度太低导致条带较浅，则需要调整IP或IB抗体浓度，必要时设立浓度梯度，摸索最佳浓度。3、抗体亲合力太低，选用适合于IP或IB的相应抗体；4、有可能IP抗体未与琼脂糖/磁珠结合。此种情况则需要选选用适合于IP的相应珠子，正确保存防止变质或干燥。5、若Tag未暴露在融合蛋白构象的表面，则需要改变tag融合表达部位。6、裂解液盐碱度太高，则需要改用低盐碱度裂解液。7、目的蛋白在样本中表达量低或者不表达，则需首先对目的蛋白表达量进行检测，或者加大IP中加入的蛋白裂解物并进行预处理。8、目的蛋白未被洗脱可能导致没有条带，须保证使用合适的洗脱液，保证洗脱液的强度和pH值合适。9、抗体选择不当或者不工作，则须利用WB对抗体进行验证。

Q：通过WB验证发现，虽然可见目的条带，但是背景很高

A：背景高可能由多方面原因造成：1、由非特异蛋白结合导致背景高。若要避免非特异性蛋白结合，则需要在无血清溶液中裂解细胞，且在免疫沉淀前用protein (G/A)珠子预洗免疫沉淀后增加漂洗次数和盐碱度（高盐或去垢剂）。2、实验仪器或液体被污染。使用洁净的仪器或液体。3、转移膜上的非特异吸附导致背景高。实验操作过程中戴手套，使用镊子夹取，不要接触膜转移面。4、制备样品中可能有不完全溶解的大的蛋白复合体，则在制备样品后进行短暂超声处理（3次，每次5秒钟），然后离心纯化，取上清后进行后续试验。5、洗涤不彻底，则需要多次洗涤，并逐渐增加洗涤缓冲液中的NaCl和去垢剂浓度。6、可能有非特异性蛋白吸附于珠子上，则须进行Preclearing以排除非特异性吸附。7、抗体本身特异性不好可能导致背景高，则须选择合适的抗体，可以考虑单抗。8、使用了过多的细胞或组织进行裂解导致背景高，则须减少样本量，推荐100-500μg细胞裂解物。9、蛋白降解也可能出现高背景的情况，次情况下须保证样品中加入了蛋白酶/磷酸酶抑制剂，尽量使用新鲜制备的样品。

Q：互作蛋白信号弱

A：互作蛋白信号弱可能是由于裂解液中的去垢剂浓度太高或配方过于剧烈、蛋白与蛋白之间的相互作用太弱或不太稳定等原因导致。相应的举措有：1、降低去垢剂浓度或更换去垢剂种类；2、受蛋白的亚细胞定位影响，则新选择裂解液配方来释放目的蛋白；3、选择亲和力更高的抗体以捕获更多的目的蛋白，从而捕获更多的相互作用蛋白；4、选择目的蛋白或相互作用蛋白含量高的样品进行免疫共沉淀实验。

来源：https://www.abbkine.cn/ip-co-ip-5/