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Science、Nature热门研究之m6A去甲基化酶激活/抑制检测试剂盒

来宝网 2021/8/23点击1170次

 

m6A的获得或丧失可导致RNA病毒发生重大功能变化,从而改变其宿主细胞的融合/进入,复制,传播,致病强度和免疫逃逸。m6A 在调节DNA复制、DNA损伤、RNA剪接、转座、转录和细胞防御方面起着至关重要的作用。

 

关于去甲基化研究,Nature又出新文章“RNA demethylation increases the yield and biomass of rice and potato plants in field trials”。

 

该研究首次开发了利用RNA表观遗传修饰N6-甲基腺嘌呤(m6A)直接提高植物生物量、产量和抗逆的新技术。通过在水稻和马铃薯中引入FTO实现m6A RNA的去甲基化修饰,使得田间试验的产品和生物量增加约50%

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在人类细胞中,m6A修饰可能由甲基转移酶复合物 METTL3/METTL14 催化,并被 α-酮戊二酸 (α-KG) Fe2+ 依赖性双加氧酶如 FTOALKBH5 TET样酶去除,这个过程是动态可逆的。结果表明,METTL3和 α-KG /Fe2+ 依赖性双加氧酶对生物的生长代谢和繁殖过程都发挥着重要作用。

 

测量m6A RNA甲基酶活性/抑制和去甲基酶活性/抑制水平将使我们能够更好地了解腺嘌呤AN6-甲基腺苷之间的关系。对RNA甲基化和RNA去甲基化的可逆循环的研究,将对调节胚胎发育和细胞生长方面起到广泛的作用。

 

艾美捷 Epigenase m6A Demethylase Activity/Inhibition Assay Kit (Colorimetric)m6A去甲基化酶激活/抑制检测试剂盒(比色法)——利用核提取物或纯化的m6A去甲基化酶——FTOALKBH5,测定总m6A去甲基化酶的激活/抑制效果。该试剂盒适用于多数物种比如哺乳动物、植物、真菌和细菌等。

 

实验原理

m6A底物包被在板上,m6A去甲基化酶结合在底物上,并将底物中的m6A去甲基化。底物中未被去甲基化的m6A可以被m6A抗体特异性识别,然后通过后续显色系统增强免疫信号,最终达到比色定量的目的。在试剂盒的组分中含有2ug/mlFTO去甲基酶,通过添加不同浓度重组FTO酶,测定OD值。OD值与FTO酶活性成反比。

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Epigentek 公司是表观遗传学相关研究的技术创新者和产品开发供应商。开发了超过700多个专利产品,为表观遗传学方面的研究和新药研发提供全面系统的解决方案。艾美捷科技是Epigentek 的中国代理商,为您提供优质的m6A去甲基化酶激活/抑制检测试剂盒(比色法)。

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尼罗红——一种比较实用的脂质荧光染料

 

目前脂类染色使用最广泛的染料是苏丹染料,最常用的有苏丹Ⅲ,苏丹Ⅳ,苏丹黑及油红O等,这种脂肪染色方法,实际上是苏丹染料被脂肪溶解吸附而呈现染料的颜色的过程,经研究认为组织中脂质在液态或半液态时,对苏丹染料着色效果最好,根据这一原理,适当提高温度(37-60℃)会对组织切片产生较好的染色效果。

 

苏丹染料主要针对于组织切片的脂质染色,同时灵敏度也较低,且存在操作过程中试剂挥发过多,易形成背景沉淀,无法兼容活细胞等局限。

 

鉴于脂质化学染料有上述诸多弊端,今天给大家介绍一下尼罗红这种比较实用的脂质荧光染料。

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尼罗红(也被称为尼罗蓝恶嗪酮)是一种亲脂性染料,它对环境非常敏感。尼罗红在脂质丰富的环境中具有强烈的荧光,在以水为介质的环境中,其荧光强度非常弱。它是非常卓越的活体染料,通过荧光显微镜和流式细胞术来检测细胞内脂质。尼罗红将细胞内脂质体染成红色。它对细胞质中的脂质体具有更好的选择性,在细胞中看见的是金黄色荧光(450-500 nm 激发; >528 nm发射)而不是红色荧光(515-560 nm激发; >590 nm 发射)。这是一种很强的荧光,但是只有在疏水性环境中。

 

艾美捷 尼罗红cat#22190)染色结果赏析:

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尼罗红染色IAA处理的褐藻(黄色是叶绿体,红色是脂滴)

引文:Indole-3-acetic-acid-induced phenotypic plasticity in Desmodesmus algae by Chung et al., Scientific Reports, July 2018.

 

除了广泛使用的尼罗红,升级版脂质染色工具: Nile GreenDroplite Red 跟尼罗红性质类似,它们也是在富含脂质的环境中具有强烈荧光的,而在水性介质中具有最小的荧光。可用荧光显微镜,流式细胞术或荧光微孔板阅读器检测细胞内脂液滴,是一类优异的活细胞脂质染料。 其中Nile Green仅染色细胞内脂液滴,具有绿色荧光,它可以与其他荧光染料一起使用,用于多重染色,弥补了尼罗红染色的缺陷。

 

AAT Bioquest Inc。是一家为从事生命科学研究、诊断研发及药物开发的科学家研发、生产和销售生物分析研究试剂和试剂盒的公司。公司致力于光谱学检测领域,包括显色、荧光和生物发光技术。艾美捷科技是AAT 的中国代理商,为您提供优质的尼罗红。

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阿柏西普ELISA检测试剂盒——实现抗血管生成药物阿柏西普的定量检测

 

阿柏西普是人血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactorVEGF)受体1和受体2胞外区结合域与人免疫球蛋白Fc段重组形成的融合蛋白,是一种新的抗VEGF药物,通过与VEGF紧密结合,降低血管通透性,进一步抑制新生血管的生成。

 

阿柏西普适用于新生血管型年龄相关性黄斑变性( AMD) CRVO 后的视网膜水肿。 用于对含奥沙利铂化疗方案有抗性或经该方案治疗后癌症恶化的转移性结直肠癌患者的治疗。

 

研究发现阿柏西普与所有VEGFA亚型的亲和力大于VEGFA与其自身受体的亲和力,可有效防止VEGF结合并激活其受体。阿柏西普与PIGF也呈现出高亲和力,该作用可增强药物抗VEGF作用,减少肿瘤组织和血管细胞持续释放促进血管生成的因子,而且阿柏西普并不产生明显的缺氧作用,这可能是耐药率减少的原因之一。阿柏西普的半衰期约为6d,在循环中以11比例来结合以上内源性配体形成稳定的复合物,该复合物在循环中的达峰时间为给药后2448h,通过胞吞作用入胞,并在蛋白水解酶作用下清除。

 

作为一种新的抗VEGF药物,与哌加他尼钠(pegaptanib)、雷珠单抗(ranibizumab)和贝伐单抗(bevacizumab)等抗VEGF药物相比较,阿柏西普作用靶点更广、亲和力更强、作用时间更长,而且已有临床试验证实阿柏西普用于治疗年龄相关性黄斑变性(age-related macular degenerationAMD)和息肉状脉络膜血管病变(polypoidal choroidal vasculopathyPCV)具有显著疗效及广泛安全性。

 

艾美捷 阿柏西普ELISA检测试剂盒cat#KA6247),实现抗血管生成药物阿柏西普(aflibercept)的定量检测。

 

阿柏西普ELISA检测试剂盒检测原理:

将标准品和样品(血清或血浆)分别添加到包被有阿柏西普反应物的微孔中,孵育后,洗板,阿柏西普通过反应物被结合在微孔底部。加入HRP偶联探针,与已经结合在孔底的阿柏西普特异性结合,随后洗板,添加 TMB选择底物,用酸性终止液终止反应。显色强度与样品或标准品中阿柏西普的含量成正比。样品结果可通过标准曲线确定。

 

阿柏西普ELISA检测试剂盒标曲:

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Abnova优良的品质使其成为强大的抗体品牌供应商,您可以在各个主要抗体品牌,如AbcamSigmaNovusAbD等知名品牌的目录上都能发现Abnova的抗体。艾美捷科技是Abnova的中国代理商,为您提供优质的阿柏西普ELISA检测试剂盒。


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