来宝网 2021/8/4点击1087次
细胞划痕是一种操作简单，经济实惠的研究细胞迁移/肿瘤侵袭的体外试验方法。划痕实验在一定程度上模拟了体内细胞迁移的过程，是研究细胞迁移的体外试验方法中最简单的方法。
传统的划痕实验，是细胞在培养孔中贴壁后，使用移液枪的枪头在贴壁细胞的中间划过，人为造成一道伤口（划痕），之后定时测量划痕的宽度，进而得到伤口愈合的细胞迁移数据。但是这种方式存在难以避免的缺陷：首先，因为是手动划痕，难以准确测量划痕的宽度，也无法保证每次划痕的一致性；其次，在划细胞的同时可能会对划痕的边缘细胞造成机械损伤，影响细胞的迁移和伤口的愈合。
艾美捷科技（Cell Biolabs中国区金牌代理）细胞划痕试验试剂盒，使用伤口愈合插件（insert）制造均一笔直的划痕。
名称 | CytoSelect 24-Well Wound Healing Assay 24-孔细胞划痕试验试剂盒 |
Cat# | |
组分 | 1. 24-well Wound Healing Assay Plate 2. Cell Stain Solution 3. DAPI Fluorescence Stain (1000X) 4. Fixation Solution |
原理 | 每24孔板包含12个经过专利处理的塑料插件，培养细胞至形成单层状态后，移除插件，即可得到2块细胞区域之间的笔直又均一的划痕（0.9mm）,用于测量细胞的迁移和增殖率。迁移细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。细胞增殖和迁移率可以使用手动固定和显微成像来确定。试剂盒中提供了固定液，用于在特定时间点终止细胞的迁移。还同时提供了细胞染色剂和 DAPI染料，便于通过光学和荧光显微镜查看结果。 |
计算 | 1.伤口闭合百分比= Migrated Cell Surface Area / Total Surface Area x 100（备注：Total Surface Area =0.9mm x length ；Migrated Cell Surface Area = length of cell migration (mm) x 2 x length ） 2.迁移率=length of cell migration(nm)/migration time(hr) |
结果图 |
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原理流程图：
24孔板（12插件）示意图：
你还在手动划痕吗？该划痕实验试剂盒，使用伤口愈合插件（insert）制造均一笔直的划痕，实验重复性好，也不会刮坏细胞，也不会造成划痕的边缘的细胞有机械损伤。
Cell Biolabs作为细胞学分析检测试剂盒生产商，为生物技术和研究类客户提供基于细胞功能研究以及疾病等方面的产品和技术服务。产品主要涵盖细胞研究、细胞信号通路和蛋白质生物学、代谢研究、病原体和毒素、干细胞研究等领域。全球众多大学、政府研究机构、生物、制药企业的科研实验室均在使用Cell Biolabs的产品。艾美捷科技是Cell Biolabs的中国代理商，为您提供优质的细胞划痕试验试剂盒。
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鸟苷酸交换因子研究——GEF活性检测试剂盒方案
今天我们就主要来聊一聊小G蛋白活性增强剂——鸟苷酸交换因子（GEF），GEF 是通过催化其目标 GTPase上的核苷酸交换来发挥作用，GEF与核苷酸结合的 GTPase 结合，这会导致结合的核苷酸被释放，从而产生不含核苷酸的GEF-GTPase 反应中间体。这种不含核苷酸的复合物随后将结合新的核苷酸，然后GEF再从GTPase 中释放出来。
由于GEFs对GDP-GTPases的亲和力高于对相应GTP-GTPases的亲和力，在正常细胞中GTP和GDP比率约为10:1，GEFs将推动从GDP-GTPases到GTP-GTPases的转换。
艾美捷GEF活性检测试剂盒是一款基于荧光法的检测GTP酶上的核苷酸转换的试剂盒，可适用于常规的96孔格式或高通量384孔格式。
GEF活性检测试剂盒包含检测所需的所有试剂：
1.Exchange Buffer
2.His标签 Cdc42蛋白
3.His标签 Rac1 蛋白
4.His标签 RhoA 蛋白
5.His标签 hDbs 蛋白（作为 Cdc42 和 RhoA 的GEF的阳性对照 ）
6.黑色384孔板
7.黑色96孔板
检测原理：该试剂盒是通过检测荧光核苷酸类似物 N-甲基邻氨基苯甲酰-GTP（mant-GTP）对 GTPase 的结合情况来检测GEF的活性的。一旦mant-GTP与 GTPase 结合， mant-GTP的荧光强度（Ex：360 nm，Em：440 nm）显著增加，通过检测游离的mant-GTP和GTPase 结合的 mant-GTP 之间的荧光值差异，即可检测样本中GEF的活性。
GEF活性检测试剂盒的主要用途和应用:
1.测定未知GEFs活性；
2.小GTPases及其相关GEFs的生化特性表征；
3.研究不同辅助因子或蛋白结构域对GEF活性的调控；
4.筛选GEFs或GTPases突变蛋白的活性和底物特异性；
5.HTS(高通量筛选)筛选鉴定GEF抑制剂。
检测结果展示：
图 1. 96 孔板中Dbs 对于Cdc42、RhoA 和 Rac1 的交换活性
图 2.384 孔板中Dbs 对于Cdc42、RhoA 和 Rac1 的交换活性
Cytoskeleton专注于生物化学和细胞过程研究中的纯化蛋白和便捷试剂盒开发与生产。公司提供药物筛选、信号转导、蛋白质转录后修饰（PTM）、细胞骨架研究相关的系列试剂盒和产品，尤其以细胞骨架相关研究见长，既能满足于样品较少的科学研究，也可以用于小规模筛选研究和高通量大规模筛选研究。艾美捷科技是Cytoskeleton的中国代理商，为您提供优质的GEF活性检测试剂盒。
