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表皮生长因子(Epidermal Growth Factor,简称EGF )是广泛存在于哺乳动物体内的一类多肽物质,表皮生长因子对体内特定细胞的分化有着深远的影响，是一种有效的促有丝分裂因子，可用于多种体外和中胚层来源的培养细胞。

人表皮生长因子(hEGF)是由53个氨基酸组成的小分子多肤,分子量约为 6000道尔顿,等电点约为4.6,分子内有三对二硫键,因而对酸、碱、热等理化因素均较稳定。hEGF具有广泛的生物学效应,能极强地促进各种表皮组织生长,在医学上己用于烧烫伤、溃疡、各类创伤以及角膜损伤等的治疗。EGF还能促进正常表皮细胞的新陈代谢,添加到美容护肤品中可以达到美白、抗皱、延缓衰老的作用。

目前EGF重组人表皮生长因子在医学美容方面的研究比较广泛，如以下：

1、嫩肤作用

EGF重组人表皮生长因子能剌激外胚层和内胚层起源的各种细胞如角膜上皮和内皮细胞、表皮、 真皮层细胞(如纤维母细胞)、乳腺腺泡及间质细胞等,使其增殖迁移,加快新陈代谢,达到嫩肤的效果。

2、滋润皮肤

EGF重组人表皮生长因子能促进DNA 、RNA和功能蛋白质的生物合成,能促进细胞外大分子的合成(如透明质酸、弹性纤维蛋白等),增加皮肤含水量,进而增加皮肤弹性,滋润肌肤。

3、消除皱纹

EGF重组人表皮生长因子促进细胞营养物质从细胞外主动运至细胞内,增加细胞内的营养。促进真皮层细胞分泌合成胶原纤维、多糖、糖蛋白等功能分子,使皮下真皮组织饱满、肌纤维排列整齐紧密,从而减少和消除皱纹。

4 、修复创伤

通过与EGF重组人表皮生长因子受体结合剌激表皮细胞（包括多种组织来源的上皮细胞、各种间质细胞）进入细胞分裂周期,启动细胞内一些重要功能基因活化、表达、分泌生物活性蛋白质等。促使胶原纤维呈线状排列,表皮细胞快速规则生长并及时覆盖创面。明显加速美容、整容术后及其它皮肤创伤等伤口愈合,并保持创面平整光滑,使癍痕减少或消失及减少色素沉着。

5 、预防色斑

EGF重组人表皮生长因子对表皮细胞的增殖有较强的促进作用,使用后表皮细胞变得年轻化,使得表皮组织中较少有色素及死亡细胞的残留等累积,使皮肤表现出嫩白无暇, 消除色斑及色素沉着等异常皮肤表现。在祛斑的治疗期和恢复期使用EGF能有效遏制色斑的复发。

在药理方面，表皮生长因子能促进皮肤创面组织修复过程 中DNA、RNA和羟脯氨酸的合成，诱导分化成熟的表皮细胞逆转化为表皮干细胞，加速创面肉芽组织的生成和上皮细胞的增殖，从而缩短创面的愈合时间，提高创面修复质量。

艾美捷EGF重组人表皮生长因子为过滤灭菌的白色冻干粉末；该冻干粉末是从含1mg/ml人表皮生长因子（EGF）的10mM磷酸盐缓冲液（pH 7.4）中冻干产生的。在溶解方面，建议加无菌的18MΩ-cm水以配制工作储存液到100ug/ml，后继实验过程中可根据实验要求进一步稀释；在保存方面，人表皮生长因子（EGF）冻干粉末在室温可保存3周，或置于-18℃冻存用于长期保存.重新溶解后可以在4℃冷藏保存至少2-7天以上；如果想延长保存时间，建议分装（加载体蛋白如0.1% HSA或 BSA）后置于-18℃冻存.请避免反复冻融.

CYT-217 EGF重组人表皮生长因子参数可参考如下：

ProSpec 是一家全球著名细胞因子蛋白生产和研发的公司，具有20多年的生产经验，专注于蛋白（重组及合成）生产研发。我们的核心产品包括：干扰素、白介素、骨蛋白、肿瘤坏死因子、成纤维生长因子、瘦素、干细胞因子、催乳素、表皮生长因子、胰岛素样生长因子、神经生长因子、集落刺激因子、激素、酶、病毒抗原以及各种重组蛋白等。 领先的生产工艺和规模使其可以提供毫克到克级蛋白，价格优于同类公司。绝大部分产品是天然成熟型蛋白，而不含有标签蛋白。考虑到大部分研究者希望能更灵活地配制蛋白溶液，ProSpec-Tany绝大部分产品没有添加保护剂或盐，这就对工艺提出了更高的要求。同时，ProSpec-Tany绝大部分产品为冻干粉，因此易于运输和保存。作为ProSpec在中国的区域代理，艾美捷科技将为大家提供ProSpec的全线产品服务。

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iFluor 488琥珀酰SE：样本实验解决方案

尽管FITC仍然是制备绿色荧光生物复合物最常用的荧光标记染料，但是FITC也存在一定的局限性，如显微镜成像的严重光漂白和pH敏感荧光。用iFluor制备蛋白质结合物™ 488染料远远优于荧光素衍生物的共轭物，如FITC。iFluor 488共轭物明显比荧光素共轭物更亮，并且更容易光照。

另外，iFluor的荧光™ 488不受pH（4-10）的影响。这种pH不敏感是对荧光素的一个重大改进，荧光素只有在pH高于9时才会发出最大的荧光™ 488se染料稳定，与蛋白质氨基具有良好的反应性和选择性。这个iFluor™ 488具有与Alexa Fluor®488 NHS酯类似的光谱性质和反应活性（Alexa Fluor®是Invitrogen的商标）。

一、储备溶液的制备

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分为一次性等份，并在制备后在-20°C下储存。避免反复冻融循环。

1.蛋白质原液（溶液A）

将100µL反应缓冲液（例如，1 M碳酸钠溶液或pH~9.0的1 M磷酸盐缓冲液）与900µL目标蛋白质溶液（例如，抗体，蛋白质浓度>2 mg/mL，如果可能）混合，得到1 mL蛋白质标记储备溶液。

注：

1）蛋白质溶液（溶液A）的pH值应为8.5±0.5。如果蛋白质溶液的pH值低于8.0，则使用1 M碳酸氢钠溶液或1 M pH 9.0磷酸盐缓冲液将pH值调节至8.0-9.0。

2）蛋白质应溶解在1X磷酸盐缓冲盐水（PBS）中，pH值为7.2-7.4。如果蛋白质溶解在Tris或甘氨酸缓冲液中，则必须针对1X PBS（pH 7.2-7.4）进行透析，以去除广泛用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（例如硫酸铵和醋酸铵）。

3）不纯抗体或用牛血清白蛋白（BSA）或明胶稳定的抗体将不能很好地标记。叠氮化钠或硫柳汞的存在也可能干扰共轭反应。叠氮化钠或硫柳汞可通过透析或旋转柱去除，以获得最佳的标记结果。

4）如果蛋白质浓度小于2 mg/mL，则接合效率会显著降低。为获得最佳标记效率，建议最终蛋白质浓度范围为2-10 mg/mL。

2.荧光灯™ 488硒储备液（溶液B）

将无水二甲基亚砜加入iFluor瓶中™ 350 SE制成10 mM储备溶液。用移液管或旋涡搅拌均匀。

注：开始接合前，制备染料储备溶液（溶液B）。及时使用。染料原液的长期储存可能会降低染料的活性。溶液B在避光防潮的情况下，可在冰箱中保存两周。避免冻融循环。

二、样本实验方案

该标记方案是针对山羊抗鼠IgG与iFluor的结合物而建立的™ 350东南。你可能需要进一步优化你的特定蛋白质。

注：每种蛋白质都需要不同的染料/蛋白质比率，这也取决于染料的性质。蛋白质的过度标记会有害地影响其结合亲和力，而低染料/蛋白质比率的蛋白质结合物会降低灵敏度。

运行共轭反应

1.以溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）的摩尔比为10:1为起点：将5µL染料储备液（溶液B，假设染料储备液为10 mM）加入蛋白溶液（95µL溶液A）小瓶中，有效摇匀。假设蛋白质浓度为10mg/mL且蛋白质的分子量为200KD，则蛋白质的浓度约为0.05mm。

注：我们建议使用10:1摩尔比的溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）。如果太少或太高，确定最佳染料/蛋白质比分别为5:1、15:1和20:1。

2.在室温下继续旋转或摇动反应混合物30-60分钟。

纯化结合物

1.以下方案是使用Sephadex G-25柱纯化染料-蛋白质结合物的实例。

2.按照生产说明书制备葡聚糖凝胶G-25柱。

3.将反应混合物（从“运行共轭反应”）装入Sephadex G-25柱顶部。

4.一旦样品刚好在树脂顶面以下，立即添加PBS（pH 7.2-7.4）。

向所需样品中添加更多PBS（pH 7.2-7.4）以完成柱纯化。合并含有所需染料-蛋白质结合物的部分。

注：

1）为了立即使用，染色蛋白结合物需要用染色缓冲液稀释，并等分多次使用。

2）为了长期储存，染料-蛋白质结合物溶液需要浓缩或冷冻干燥。

三、示例数据分析和图表

表征所需的染料-蛋白质结合物

取代度（DOS）是表征染料标记蛋白质的最重要因素。DOS较低的蛋白质通常具有较弱的荧光强度，但DOS较高的蛋白质（如DOS>6）也倾向于降低荧光强度。大多数抗体的最佳DOS推荐在2到10之间，这取决于染料和蛋白质的性质。为了有效的标记，取代度应控制在6-8摩尔iFluor™ 350硒相当于一摩尔抗体。以下步骤用于确定iFluor的DOS™ 350硒标记蛋白。

测量吸收率

为了测量染料-蛋白质结合物的吸收光谱，建议根据染料的消光系数将样品浓度保持在1-10µM的范围内。

读取280 nm处的OD（吸光度）和染料最大吸收（对于iFluor，ƛmax=450 nm）™ 350种染料）

对于大多数分光光度计，样品（来自色谱柱部分）需要用去离子水稀释，以便OD值在0.1到0.9的范围内。280nm处的吸光度是蛋白质的最大吸收，450nm是荧光的最大吸收™ 350东南。为了获得准确的DOS，确保共轭物中没有非共轭染料。

计算DOS

Figure 1.HeLa细胞与（微管蛋白+）或不与（微管蛋白-）小鼠抗微管蛋白一起孵育，然后用iFluor™ 488山羊抗鼠IgG结合物（绿色，左侧）或Alexa Fluor®488山羊抗鼠IgG结合物（绿色，右侧）。细胞核用hoechst33342（蓝色）染色。

美国AAT Bioquest Inc。（前身是ABD Bioquest，Inc。）是一家为从事生命科学研究、诊断研发及药物开发的科学家研发、生产和销售生物分析研究试剂和试剂盒的公司。公司致力于光谱学检测领域，包括显色、荧光和生物发光技术。AAT Bioquest的产品帮助全世界的科学家和生物医药研究者更好的了解生物化学，免疫学，细胞生物学和分子生物学等领域。作为AAT Bioquest Inc。的中国区域代理，艾美捷科技为中国客户提供光谱学检测技术并应用于生化、生理代谢和细胞分析领域的产品，包括显色，荧光和发光技术等全系列解决方案。

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PMSG孕马血清促性腺激素适用的应用方案

一、孕马血清促性腺激素（PMSG）是什么？

孕马血清促性腺激素（PMSG）：它是英国科学家Cole和Hart在怀孕母马血清中发现的一种重要的激素，是由马属动物胎盘的尿囊绒毛膜细胞分泌的，具有促进卵泡发育、排卵和黄体形成功能的一种糖蛋白激素。并已知在妊娠马属动物（驴、斑马等）都有产生，所以也称为马属动物绒毛膜促性腺激素（eCG)。

由于PMSG是从怀孕的母马血液中进行提取的，而且目前PMSG暂无可替代的来源，因此，PMSG目前也只能从怀孕母马身上获取。这就涉及到怀孕母马的动物福利方面，有些生产家为了获取更多的PMSG会强制让母马流产，以便第二年更快地再次怀孕，这种行为有可能会导致母马的死亡或者生病，这也引起了某些国家的动物福利组织的关注。

二、孕马血清促性腺激素（PMSG）的应用

PMSG虽然是由马属动物胎盘的尿囊绒毛膜细胞分泌的，但是在畜牧兽医方面却应用广泛。最开始PMSG是用于动物和人的超速排卵，但是后来发现PMSG在人体中有很强的免疫反应，便不在人体上进行使用。现今，从母马血液中提取的PMSG主要在生产或者研究上常用于动物的排卵，而且PMSG通常会搭档hCG一起作为加速超排的常用激素。

在兽医治疗方面，PMSG常常作为治疗母畜静止性发情、隐性发情和久配不孕等症状的兽用药物，同时也是促进母畜卵巢卵泡发育、成熟，并引起发情和排卵、胚胎移植时的超数排卵以及提高公畜的性欲，并促进精子的形成的刺激药物。还有一个应用，就是诱导单胎动物产双胎。

在实验室内，研究动物的繁殖机制常常将PMSG作为促进实验动物超排的试剂，在各个动物繁殖实验室也是非常常用的科研试剂。

三、PMSG孕马血清促性腺激素主要适用哪些应用呢？

大部分还是用于实验动物的超排实验

【1】小鼠超排实验：

PMSG从怀孕的母马血清中提取分离而来，常用于动物的超排实验。HOR-272 PMSG孕马血清促性腺激素常用于实验动物的超排实验，对小鼠连续注射PMSG和hCG，然后将超排卵的雌性小鼠与雄性小鼠关在一起以产生前核阶段的胚胎，每只小鼠的典型产量为10–20个胚胎。

【2】非洲爪蟾超排实验

非洲爪蟾卵提取前至少三天，将非洲爪蟾原始雌性通过使用30号针头和1 mL注射器皮下注射0.5 mL（100 IU）PMSG注入背侧淋巴囊中。提取前16-18h注射hCG，平均每个雌性性蛙应产下一千多个卵。

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