来宝网 2021/5/6点击1009次
氧化应激可通过测量活性氧（ROS）来直接评估，或通过过度产生的ROS对脂质，蛋白质和核酸造成的相关损害来间接评估，（ROS损伤机体的生物分子后可产生大量特异性的氧化代谢产物，这是氧化应激作用于机体的结果）。
尽管直接测量ROS是理想的方法，但是与ROS的瞬时特性相比，通常更依赖于间接方法，测量这些代谢产物可准确反映机体的氧化应激状态，但单独用某一种指标难免片面，宜综合考虑各种氧化代谢产物。当然还有一个更重要的原因是生物分子上的损伤标记相对稳定。
正常生理状态下，机体内自由基的产生与抗氧化系统处于动态平衡；当自由基大量生成而超过抗氧化系统的清除能力时，此平衡被打破，则表现为氧化应激状态。接下来一起看看保护细胞免受自由基的损伤抗氧化系统...
人机体内固有的抗氧化系统分为酶类和非酶类。
其中抗氧化酶包括超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽还原酶（GPX）、过氧化氢酶（CAT）、过氧化物酶（POD）、谷胱甘肽S-转移酶（GST）、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH-PX)、胱甘肽还原酶（GR）、硫氧还蛋白过氧化物酶（TPX）等。各种抗氧化酶从不同角度协助清除体内的ROS，在抗氧化过程中起着不同的作用，因而常测定机体内SOD、GPX、CAT、POD、GSH-PX、GST、GR或TPX等抗氧化酶来反映机体抗氧化活性。
非酶类抗氧化物包括维生素A、维生素C、维生素E、谷胱甘肽、尿酸等。
其中，谷胱甘肽（GSH）是一种由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸结合的三肽，GSH的结构中含有一个活泼的巯基（-SH），易被氧化脱氢，这一特异结构使其成为体内主要的抗氧化剂。而且GSH是多种酶如GSH-Px的辅酶，涉及多种生物学过程，参与清除ROS，防护氧化应激对机体产生的损伤。GSH的含量可在一定程度上反映机体的抗氧化能力。
单独测定某一种或某些抗氧化成分的含量往往不能全面的反映组织的抗氧化能力，且在操作上较为困难与或繁琐，因而可通过T-AOC来评价机体总体上的抗氧化能力（测定样本中各种抗氧化物质和抗氧化酶等构成总抗氧化水平）。此外，羟自由基在人体中是人体在新陈代谢过程中产生的对生物体毒性强、危害大的一种自由基。羟自由基清除能力是样品抗氧化能力的重要指标之一，在抗氧化类保健品和药品研究中得到广泛应用。
当自由基大量生成而超过抗氧化系统的清除能力时，机体平衡被打破，表现为氧化应激状态。氧化应激可通过测量活性氧（ROS）来直接评估，或通过过度产生的ROS对脂质，蛋白质和核酸造成的相关损害来间接评估。例如：测定生物样品中的丙二醛（MDA）含量可反映脂质过氧化水平。测定生物样本中的羰基可衡量蛋白质氧化损伤程度的大小。而与自由基之对抗保护细胞免受自由基的损伤抗氧化系统又有酶类和非酶类等诸多生化指标。
如何测定这些与氧化应激有关的生化指标呢？
CheKine™ 系列生化检测试剂盒检测分析物包括氧化/抗氧化、谷胱甘肽、氨基酸、糖酵解、糖代谢、脂肪酸代谢、辅酶Ⅰ/Ⅱ、离子、ATP等。检测样本类型涉及动植物组织、血清、血浆、细胞、细菌、多种体液等。主要的检测仪器为酶标仪，分光光度计。采用更高效、创新的检测技术、优化的实验方案，试剂盒中包括了检测所需的全套试剂和标准品，可快速获得准确且可重复的结果，省时高效!
氧化应激——氧化/抗氧化系列
CheKine™ Hydrogen Peroxide (H2O2) Assay Kit 过氧化氢（H2O2）检测 KTB1041 48T/96T/480T
CheKine™ Lipid Peroxidation (MDA) Assay kit 脂质过氧化(丙二醛) 分析 KTB1050 48T/96T
CheKine™ Phenylalanine Ammonia Lyase (PAL) Activity Colorimetric Assay Kit 苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性检测 KTB1160 48T/96T
CheKine™ Protein Carbonyl Colorimetric Assay Kit 蛋白质羰基含量检测 KTB1200 48T/96T
CheKine™ Superoxide Anion Colorimetric Assay Kit 超氧阴离子含量检测 KTB1210 48T/96T
CheKine™ Diamine Oxidase (DAO) Activity Colorimetric Assay Kit 二胺氧化酶（DAO）活性检测 KTB1220 48T/96T
CheKine™ Nitric Oxide (NO) Assay Kit 一氧化氮（NO）检测 KTB1400 48T/96T/192T
CheKine™ Monoamine Oxidase (MAO) Activity Colorimetric Assay Kit 单胺氧化酶（MAO）活性检测 KTB1900 48T/96T
CheKine™ Superoxide Dismutases (SOD) Assay Kit 超氧化物歧化酶 (SOD) 活力检测 KTB1030 48T/96T/480T
CheKine™ Hydroxyl Free Radical Scavenging Capacity Assay Kit 羟自由基清除能力分析 KTB1090 48T/96T
CheKine™ Polyphenol Oxidase (PPO) Activity Colorimetric Assay Kit 多酚氧化酶（PPO）活性检测 KTB1140 48T/96T
CheKine™ Peroxidase (POD) Activity Colorimetric Assay Kit 过氧化物酶(POD)活性检测 KTB1150 48T/96T
CheKine™ Catalase (CAT) Activity Assay Kit 过氧化氢酶 (CAT) 活性分析 KTB1040 48T/96T/480T
CheKine™ Xanthine Oxidase Assay Kit 黄嘌呤氧化酶（XO）活性分析 KTB1070 48T/96T/480T
CheKine™ Superoxide anion Scavenging Capacity Assay Kit 超氧阴离子清除能力分析 KTB1080 48T/96T
CheKine™ Glucose Oxidase Activity (GOD) Assay Kit 葡萄糖氧化酶活性（GOD）检测 KTB1310 48T/96T/480T
CheKine™ Total Antioxidant Capacity (TAC) Assay Kit 总抗氧化能力（TAC）检测 KTB1500 48T/96T/480T
CheKine™ Plant Oligomeric Proantho Cyanidins (OPC) Colorimetric Assay Kit 植物原花青素(OPC)含量检测 KTB1520 48T/96T
CheKine™ Plant Flavonoids Colorimetric Assay Kit 植物类黄酮含量检测 KTB1530 48T/96T
CheKine™ Plant Total Phenols (TP) Colorimetric Assay Kit 植物总酚（TP）含量检测 KTB1540 48T/96T
氧化应激——谷胱甘肽系列
CheKine™ Reduced Glutathione (GSH) Colorimetric Assay Kit 还原型谷胱甘肽（GSH）检测 KTB1600 48T/96T
CheKine™ Glutathione Oxidized (GSSG) Colorimetric Assay Kit 氧化型谷胱甘肽（GSSG）检测 KTB1610 48T/96T/192T*5
CheKine™ Glutathione Reductases (GR) Colorimetric Assay Kit 谷胱甘肽还原酶（GR）检测 KTB1620 48T/96T /192T
CheKine™ Glutathione S-Transferase (GST) Colorimetric Assay Kit 谷胱甘肽S-转移酶（GST）检测 KTB1630 48T/96T
CheKine™ Glutathione Peroxidase (GSH-Px) Colorimetric Assay Kit 谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）检测 KTB1640 48T/96T/192T
CheKine™ Thioredoxin Reductase (TrxR) Colorimetric Assay Kit 硫氧还蛋白还原酶（TrxR）检测 KTB1650 48T/96T
CheKine™ Thioredoxin Peroxidase (TPX) Colorimetric Assay Kit 硫氧还蛋白过氧化物酶（TPX）检测 KTB1660 48T/96T
CheKine™ Toal Glutathione (T-GSH) Colorimetric Assay Kit 总谷胱甘肽（T-GSH）检测 KTB1670 48T/96T
CheKine™ ¦Ã-Glutamyl Cysteine Ligase (GCL) Activity Colorimetric Assay Kit γ-谷氨酰半胱氨酸连接酶(GCL)活性检测 KTB1680 48T/96T
CheKine™ Gamma-Glutamyl Transpeptidase (GGT) Activity Colorimetric Assay Kit γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)活性检测 KTB1690 96T
文章来源：http://www.abbkine.cn/oxidative-stress-biochemical-kit
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在选择抗体稀释液需要注意的问题
传统的抗体稀释液常用的有：脱脂奶粉、TBST、PBST、BSA、市售的抗体稀释液。在选择抗体稀释液需要注意的问题有哪些呢？
1、脱脂奶粉不能用于磷酸化蛋白，保存时间短，颜色变绿，要更换新的抗体，昂贵的抗体不建议使用。
2、PBST不能用来稀释碱性磷酸酶（AP）标记的抗体，含AP标记的二抗不能使用PBST稀释。
3、抗BSA的抗体不能使用含BSA的抗体稀释液，能与BSA结合的抗体，会发生交叉反应，产生背景。
4、含有叠氮钠的市售抗体稀释液，不能用来稀释辣根过氧化酶 (HRP)标记的抗体，且有毒，用时小心。
5、对于初次使用抗体时，TBST更安心。
传统的抗体稀释液有这么多局限性，那有没有通用型的抗体稀释液，可以适用于磷酸化，AP、HRP等偶联的抗体，并且在降低背景的同时，有增强信号的作用，无需烦恼选用哪种抗体稀释液，也不用再在丁香园、小木虫等网站求助。
事实上，Abbkine增强型抗体稀释液—BMU103-CN SuperKine™ 增强型抗体稀释液，可以解决这个问题，它不仅有增强抗体的效果，且无蛋白，纯化学试剂成分，适用AP，磷酸化，HRP等偶联的抗体。
此外，它还有一定的保存效果，且不含磷酸盐、叠氮钠等成份，含有的抗体结合增强成份，可有效增强抗原与抗体的结合反应，减少抗体使用量，以节约抗体。
纯化学成分—— 无动物蛋白，无抗原抗体交叉反应风险。
信号增强——含有抗体抗原结合增强成份，且无磷酸盐。
节时快捷——孵育1h就可以达到很强的效果，无需过夜，实现1天能做完WB的梦想。
兼容性好——兼容辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶和生物素标记的二抗。
安全无毒——加入新型的防腐剂，无叠氮钠，无毒健康，使用安心。
即用溶液——无需稀释，直接使用。
适用广泛——适用于多种免疫检测实验（WB、IHC、ELISA、IF）。
以NF-kB为例，看下效果：
图：Superkine™ 增强型抗体稀释液（BMU103-CN）与普通抗体稀释液（TBST）以及同级竞品（B品牌）进行对比WB实验
蛋白样品：HEK293细胞；
一抗(NFkB 小鼠单克隆抗体, ABM0017,1:5000)溶液室温孵育1 h，TBST洗涤；
二抗(辣根过氧化物酶标记山羊抗鼠IgG, A21020,1:10000)溶液室温孵育1 h，TBST洗涤；
ECL发光液（超敏型ECL发光液（飞克级）货号：BMU102-CN）孵育1-2 min，然后曝光相同时间成像。
注意事项：抗体稀释的浓度依据自己的实验自己摸索的，不同实验中，不同抗体稀释倍数不同。
文章来源：http://www.abbkine.cn/enhanced-antibody-dilution-buffer
