来宝网 2021/2/2点击852次
T淋巴细胞在活化的不同阶段细胞表面会表达不同的活化分子，它们是检测T淋巴细胞是否被有效诱导活化的标准。
1、细胞毒T细胞（cytotoxic T cell）：消灭受感染的细胞。这些细胞的功能就像一个“杀手”或细胞毒素，因为它们可以对产生特殊抗原反应的目标细胞进行杀灭。细胞毒T细胞的主要表面标志是CD8，也被称为杀手T细胞。
2、辅助T细胞（helper T cell）在免疫反应中扮演中间过程的角色：它可以增生扩散来激活其它类型的产生直接免疫反应的免疫细胞。辅助T细胞的主要表面标志是CD4。 T细胞调控或“辅助”其它淋巴细胞发挥功能。
3、调节/抑制T细胞（regulatory/suppressor T cell）：负责调节机体免疫反应。通常起着维持自身耐受和避免免疫反应过度损伤机体的重要作用。调节/抑制T细胞有很多种，目前研究最活跃的是CD25+ CD4+ T细胞。
4、记忆T细胞 (memory T cell)：在再次免疫应答中起重要作用。记忆T细胞由于暂时没有非常特异的表面标志。
由此可知，T细胞及其亚群可以根据细胞表面表达的不同标志物而区分，如CD3，CD4，CD8和CD25等。使用这些结合了荧光的抗体直接标记这些标志物之后，多色流式分析技术就可以帮助研究者对单个细胞同时进行多个标志物的测量，而这可以提供特定样品关于细胞系以及细胞亚群分化阶段的信息。
流式细胞术研究专家exbio可提供活性T细胞筛选试剂盒，助您实现活性T细胞的免疫分型。
抗体信息：
结果分析——新冠病毒患者外周血样本分析：
COVID-19患者中免疫细胞频率动力学的事例。
上图设门分析用于鉴定患者外周血中活化的细胞毒性CD8 + T淋巴细胞。下图显示了患者住院期间几个时间点测得的细胞频率（占T细胞的百分比）。
流式细胞术表型分析策略，用于鉴定正常人外周血中活化的T细胞。
1.单重态细胞
2.白细胞
3.淋巴细胞
4.CD3 + T淋巴细胞
5.CD4 +与CD8 + T淋巴细胞
下中部：活化的CD8 +细胞毒性T淋巴细胞
右下：循环的滤泡辅助性T淋巴细胞
右上：激活的CD4 +辅助/诱导T淋巴细胞
COVID-19患者中免疫细胞频率动力学的示例。
上图设门分析用于鉴定患者外周血中活化的辅助/诱导剂CD4 + T淋巴细胞。
下图显示了患者住院期间几个时间点测得的细胞频率（占T细胞的百分比）。
需要住院的COVID-19患者中免疫细胞频率动力学的示例。
上图显示了用于识别患者外周血中循环性T辅助滤泡细胞的设门策略。
下图显示了患者住院期间几个时间点测得的细胞频率（占T细胞的百分比）。
使用ED7705 活性T细胞筛选试剂盒在正常人外周血中对活化的细胞毒性CD8 + T淋巴细胞（左），活化的辅助/诱导性CD4 + T淋巴细胞（中）和循环T辅助滤泡细胞（右）进行流式细胞仪表面染色。 图显示了每种细胞亚群的频率（占T细胞的百分比）。
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参与T细胞识别与活化的CD分子
CD分子是用以单克隆抗体鉴定为主的聚类分析法,将来自不同实验室的单克隆抗体所识别的同一分化抗原归为一个分化群(Cluster of differentiation，CD)。
CD分子的功能主要分为以下几方面:
免疫应答过程中参与免疫细胞的相互识别；
免疫细胞识别抗原、活化、增殖和分化；免疫效应功能的发挥；
参与造血细胞的分化和造血过程的调控；
参与炎症的发生；
参与细胞的迁移如肿瘤细胞的转移等。
今天说的两款CD分子，属于参与T细胞识别与活化的CD分子。
1.【CD3E】重组人T细胞表面分子CD3E，Fc标签（无动物源）
Human CD3E protein, Fc tag (Animal-Free) #PRP2029
CD3E是一种T细胞表面单程I型膜糖蛋白。作为存在于T淋巴细胞表面的TCR-CD3复合物的一部分，CD3E在适应性免疫反应中起着重要作用。CD3E包含1个Ig样(免疫球蛋白样)结构域和1个ITAM结构域，与CD3-γ、CD3-δ和CD3-ζ以及T细胞受体α/β和γ/δ杂二聚体一起形成T细胞受体-CD3复合物。T细胞受体-CD3复合物在将抗原识别与多种细胞内信号转导途径耦合方面发挥着重要作用，对T细胞的发育和功能至关重要。此外，CD3E在T细胞发育中同样起着重要的作用，CD3E基因的缺陷会导致严重的免疫缺陷。CD3E基因也与女性对I型糖尿病的易感性有关。
2.【CD28】重组人Ｔ细胞表面分子CD28，Fc标签（无动物源）
PRP2031 Human CD28 protein, Fc tag (Animal-Free) #PRP2031
CD28分子是Ig超家族成员，以两条肽链组成的同源二聚体形式表达于CD4+T细胞和半以上CD8+T细胞表面。CD28分子是T细胞表面的黏附分子，也是最重要的共刺激分子，其通过与抗原提呈细胞 (APC) 上的配体(B7)以非共价键结合形成的B7-CD28复合体可发挥共刺激作用。CD28分子在许多T细胞过程中起着关键作用，包括细胞骨架重塑，细胞因子产生，存活和分化。阻断CD28/B7的相互作用可能有助于防止过敏反应和自身免疫性疾病中的有害活化，而增强这种相互作用可以促进肿瘤排斥反应。因此，CD28及其信号通路可能被证明是开发新治疗方法的有用靶点。
以上，就是今天介绍的两款参与T细胞识别与活化的CD分子。
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细胞培养过程，以及需要注意的重要事项
细胞培养是研究病毒与研制疫苗的基础技术，因此细胞培养技术在遗传学、免疫学、肿瘤学、病毒学、分子生物学等领域已得到广泛的应用。近年来发展起来的核移植、细胞杂交、DNA介导的基因转移以及一些物理图谱的建立，也都需要与细胞培养紧密结合。
细胞培养一般过程主要包括以下几点：
1.准备工作：准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒，培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，培养箱及其他仪器的检查与调试。
2.取材：在无菌环境下从机体取出某种组织细胞(视实验目的而定)，经过一定的处理(如消化分散细胞、分离等)后接入培养器皿中，这一过程称为取材。如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。机体取出的组织细胞的首次培养称为原代培养。
3.培养：将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。如系组织块培养，则直接将组织块接入培养器皿底部，几个小时后组织块可贴牢在底部，再加入培养基。
4.冻存及复苏：为了保存细胞，特别是不易获得的突变型细胞或细胞株，要将细胞冻存。冻存的温度一般用液氮的温度-196℃，将细胞收集至冻存管中加入含保护剂(一般为二甲亚砜或甘油)的培养基，以一定的冷却速度冻存，最终保存于液氮中。在极低的温度下，细胞保存的时间几乎是无限的。复苏一般采用快融方法，即从液氮中取出冻存管后，立即放入37℃水中，使之在一分钟内迅速融解。然后将细胞转入培养器皿中进行培养。
细胞原代培养的基本步骤：
原代分离细胞培养是指从供体内取出组织后，经机械以及消化分离成单个细胞或单一型细胞群，使之在体外模拟人体生理环境，在无菌、适当温度和一定的营养条件下，生存、生长和繁殖。原代培养细胞常有不同的细胞成分，生长缓慢，但是更能代表所来源的组织细胞类型和表达组织的特异性特征。利用原代细胞培养做各种实验，如药物测试、细胞分化及病毒学方面的试验效果很好。其操作步骤如下：
1.剪切组织：先将所取得的组织，用D-Hanks或Hanks液清洗，以去除表面血污，并用手术镊去除黏附的结缔组织等非培养所需组织。再次清洗后，用手术刀将组织切成若干小块，移入青霉素小瓶或小烧杯中，加入适量缓冲液，用弯头眼科剪，反复剪切组织，直到组织成糊状，约1mm3大小。静置片刻后，用吸管吸去上层液体，加入适当的缓冲液再清洗一次。
2.消化分离：消化分离的目的是将细小的组织块消化分离成细胞团或分散的单个细胞，以利于进一步的培养，常用的消化酶有胰蛋白酶和胶原酶。
3.培养：细胞悬液用计数板进行细胞计数。用培养液将细胞数调整为（2～5）×105 cells／ml，或实验所需密度，分装于培养瓶中，使细胞悬液的量以覆盖后略高于培养瓶底部为宜。置CO2培养箱内，5％CO2，37℃静置培养。一般3～5d，原代培养细胞可以黏附于瓶壁，并伸展开始生长，可补加原培养液量1／2的新培养液，继续培养2～3d后换液，一般7～14d可以长满瓶壁，进行传代。
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