来宝网 2018/6/15点击1136次
ATP作为重要的能量物质，其代谢生化机制早已被研究地清清楚楚，然而植物活细胞内ATP实时动态变化情况还有大量未知信息。虽然已有多种ATP感应蛋白用于动物细胞ATP动态实时检测，然而植物活细胞内ATP的动态实时监测，一直很少有稳定可靠方法。 近日，Valentina De Co等人采用新型ATP感应蛋白ATeam1.03-nD/nA，建立了一种基于荧光能量共振转移（FRET）的方法，创造性地应用于实时监测植物活细胞ATP。ATeam1.03-nD/nA可在植物活细胞内稳定表达，蛋白结构中间表达有ATP合成酶 Ɛ 亚基，一端表达CFP荧光集团，一端表达Venus荧光集团。当有ATP结合时，ATeam1.03-nD/nA结构发生改变，CFP与Venus距离变得更近，产生更加明显的荧光能量共振转移，获得更高的Venus/CFP荧光信号比值（图1）。通过实时监测该荧光信号比值，即可实时动态检测植物活细胞ATP含量（图2）。 Valentina De Co等人开发的这种创新性应用方案，为植物活细胞ATP动态实时监测提供了最佳检测工具，将大大推动植物细胞ATP动态变化机制研究。其方案所用BMG CLARIOstar多功能酶标仪拥有专利的线性渐变滤光片光栅技术（可检测任意波长荧光，8-100nm任意带宽，满足任意检测要求），专为细胞检测设计的顶读和底读选项，高精度顶读和底读自动聚焦，高精度孔阈扫描，多色荧光动力学检测设计，以及精密灵活的气体控制设计（氧气和二氧化碳浓度（0.1-20%），单/双控制），为活细胞ATP等能量代谢指标分析提供了最佳选择。
图1，ATP感应蛋白ATeam1.03-nD/n ATP结合效应示意图
图2，拟南芥种子，在不同外界氧气条件下ATP含量动态实时监测 正常大气环境下，ATP含量维持稳定不变（灰色曲线），Venus/CFP荧光信号比值维持稳定。低氧条件下，ATP产量下降，Venus/CFP荧光信号比值下降（黑色和红色曲线）。 参考资料 1、Imamura, Hiromi, et al. "Visualization of ATP levels inside single living cells with fluorescence resonance energy transfer-based genetically encoded indicators." Proceedings of the National Academy of Sciences 106.37 (2009): 15651-15656. 2、De Col, Valentina, et al. "ATP sensing in living plant cells reveals tissue gradients and stress dynamics of energy physiology." Elife 6 (2017). 想了解更多BMG多功能酶标仪的应用，在伯齐官方公众号（微信号：Bio-Gene）输入BMG酶标仪相关的关键词（不用输入序号）：1、细胞代谢；2、钙流；3、朊病毒；4、HTS； 5、FRET和BRET；6、BMG；7、仪器操作; 8、蛋白聚集 推荐阅读 >>384孔高通量细胞能量代谢检测用户案例分享 >>BMG PHERAstar FSX 备受制药巨头阿斯利康高通量药物筛选总监认可推荐 >>BMG多功能酶标仪快速筛选肠道微生物 >>BMG酶标仪增强型细胞分析功能为科研提供新解决方案 >>CLARIOstar多功能酶标仪12大特点 >>华大基因BMG多功能酶标仪客户评价 >>上天下海：BMG酶标仪挑战无极限 >>荧光偏振法快速准确高通量检测IgG和含Fc段衍生物 >>如何更好地实现单样品多参数检测 >>BMG酶标仪，世界第一台实现自动离体的缺氧、缺血再灌注 >>Cell Reports：缺氧，让T细胞抗癌功能更强大 >>MetaCell-TM在海德堡EMBL研讨会上隆重介绍细胞代谢金标准检测平台 >>经久耐用， BMG酶标仪经得起数十年的考验 >>德国BMG多功能酶标仪客户评价 >>BMG在线公开课视频：细胞代谢之胞内氧浓度实时检测 >>细胞能量代谢三“简”主义：细胞内氧含量实时监测解决方案 >>英国Sygnature Discovery采用德国BMG PHERAstar FSX进行高端药物研发 >>Nature Methods亮点推荐细胞代谢胞内氧检测技术 >>BMG PHERAstar FSX 高通量超灵敏HTS多功能酶标仪入选Selectscience杂志2016最佳药物研发产品十强 香港伯齐科技有限公司 Bio-Gene Technology Ltd. 广州伯齐生物科技有限公司 400 600 9639 www.bio-gene.com.cn marketing@bio-gene.com.cn 香港 北京 上海 广州 成都 武汉 济南 |
