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BMG公司CLARIOstar多功能酶标系统优化PicoGreen核酸定量法

空白对核酸样品的定量是任何基于和分子生物学实验室最基本的需求。除了大家熟知的传统260 /280紫外吸收分析法外，还有很多基于荧光分析的DNA定量方法。这类荧光定量法不仅灵敏度远远高于光吸收法，它们还可以针对双链DNA进行定量。在市场上比较有名的就是Life Technology公司的PicoGreen试剂，它是可跟双链核酸结合的特异性荧光探针。在很多对核酸浓度要求比较高的实验中，如二代测序，经常会用到这种荧光定量方法。
空白除了分析灵敏度以及特异性，通量以及微量分析体积也是现有用户经常面对的问题。虽然市面上也有荧光定量仪去配合PicoGreen试剂，但每次只能做一个样本。对于很多服务性企业，特别是测序服务商，每天面对几百个样本，在核酸定量这一环就要花大半天去完成，费时失事。所以市场上非常渴望高通量、低反应体积和高准确度的核酸定量方案。然而，这种新需求对检测设备的要求非常之高。针对这种需求，德国专业酶标仪生产公司BMG LABTECH推出了基于独特的LVF光栅的CLARIOstar多功能酶标仪，并在该系统上优化了 PicoGreen核酸定量方法，是高灵敏度、高特异性、高通量、微体积样品核酸定量的最优解决方案。
空白该优化方案分别对BMG公司生产的LVis微量板（2μL体系）、市面上常见的96孔板和384孔板分别进行了测试和优化，并对比了基于CLARIOstar特有的LVF光栅以及优化滤光片两种滤光系统的结果，进一步验证该方案的优越性（图1，2和3）。
空白所有实验结果数据充分说明，使用CLARIOstar多功能酶标仪进行PicoGreen核酸定量，在超大浓度梯度范围内都有非常好的检测灵敏度和线性度。CLARIOstar独特的LVF光栅具备了与滤光片基本相同的高性能 。例如，在384孔板在，无论是采用滤光片或是采用LVF光栅，其检测最低极限都可以低至3pg/孔。采用基于CLARIOstar多功能酶标仪的PicoGreen核酸定量法，可以进行任意体积核酸样品的精确定量——最低2μL到384孔或96孔的标准检测体积。事实上BMG酶标仪的高灵敏度和稳定性已广泛得到国内用户认可，其中国内测序服务龙头—华大基因（BGI），已先后添置十多台BMG系统进行核酸定量检测，充分说明BMG LABTECH多功能酶标仪在高通量核酸定量的优越性与可靠性。

图2：384孔板PicoGreen分析法，采用滤光片（红色）以及LVF光栅（蓝色）的结果对比图，样品体积20μL，整个检测DNA浓度范围内都有非常好的线性度：滤光片：R2 = 0.9999，
LVF光栅：R2 = 0.9998

图3： LVis微量板PicoGreen分析法，采用滤光片（红色）和LVF光栅（蓝色）的结果对比图，样品体积2μL