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INGEZIM谷蛋白抗原检测试剂盒

R.30.GLU.K2

Ingezim 谷蛋白抗原检测试剂盒是基于抗醇溶蛋白的R5单抗制备的用于样品中谷蛋白检测的一种免疫酶试验方法，是国际食品法典委员会（CODEX）认定的食品样品中谷蛋白含量检测的I型方法，并通过了西班牙食品安全评估机构评估。检出限为3ppm。

一、技术原理

1. 用单抗（针对Gliadin、Secalin和Hordein的特异单抗）包被微量板，之后，加入待检样品并孵育。

2. 如果样品中含有谷蛋白抗原，将会与结合在微量板上的特异抗体结合，形成MAb-Gliadin抗原复合物。

3. 当向微量孔加入过氧化物酶标记的抗Gliadin特异抗体，即MAb-PO时, 酶标单抗就会与样品中的抗原结合。

4. 加入底物后，可以通过颜色反应判定是否含有谷蛋白及其含量。

二、用途

该方法可用于样品中0~300ppm含量的谷蛋白成分的检测。

三、敏感性

1. 欧洲标准

将欧洲标准溶液稀释成5种不同的稀释度。按照该标准，应能检测1.56ng/ml的浓度。这个值与食品中谷蛋白含量3ppm相一致。假定样品按照1:25倍稀释，计算公式如下：

ppm=（C×D×2×40）/1000

C：从标定曲线中计算的样品的浓缩值，单位是ng/ml

D：样品稀释倍数

2：用于表达谷蛋白浓缩结果的倍数

40：样品准备过程中的稀释倍数（10ml提取缓冲液中含0.25g）

1000：从ng/ml转换为ppm。

回归曲线

2. 用食品控制样品进行的试验评估

用预先标定了谷蛋白含量（ppm）的5份面包样品进行评估，结果如下图：

利用线性回归曲线，可检测样品中最低含量0.25ppm的谷蛋白。

四、特异性

试验中用于抗原检测的单抗的特异性决定于免疫印迹技术。单抗能特异性识别小麦、黑麦和燕麦（分别为麸朊、黑麦醇溶蛋白和大麦醇溶蛋白）中的醇溶谷蛋白。

五、 试剂盒组成

1. 96孔微量板

2. 阳性对照

3. 阴性对照

4. 控制点（control point）

5. 欧洲麸朊标准溶液（European Gliadin Standard, 5）

6. 酶标抗体

7. 洗液

8. 稀释液

1. 底物溶液（TMB）

2. 终止液

3. 提取液